1、“生物制药技术实训”课程研究报告班级： 生物制药 081 姓名： 孙晓斌 学号： CJP2008006同组组员： 孙晓斌 王芳芳 孙无双 马君英泡菜中益生性乳酸菌的筛选 研究目的：泡菜是有着 2000 多年悠久历史的世界性、大众化发酵食品，是一种经乳酸菌发酵的蔬菜制品。泡菜传统生产方法为自然发酵，就是利用蔬菜自身携带的乳酸菌进行发酵。这种方法生产周期长且质量不稳定，难以实现大规模工业化生产。为此开展了泡菜用乳酸菌发酵剂菌株的筛选工作，获得很多产酸能力强且发酵产品风味好的菌株，其中有些已经用于工业生产，取得明显效果。研究方案：乳酸菌的生长特性与菌落形态生长后，菌落形态均为白色,菌落较小,直径 0
2、.52.5mm 中央突起,边缘整齐,易挑取。菌株均为 G+,杆状 ,两端呈圆形,无鞭毛。原始记录：1、原料市购泡菜2、平板培养基（初筛）的制备1.配制 200mLMRS 培养基，121灭菌 20min，冷却至 50倒平板，静置、冷却凝固后放入 37恒温恒湿培养箱过夜，无菌检验合格后备用。2. 配制一瓶生理盐水（9：1000） ，一瓶蒸馏水 ， 8 根移液管包好 4 根装有 9ml 蒸馏水的试管包好后放入灭菌锅灭菌 。3. 原液配制：用移液管移取 10ml 泡菜汁倒入烧杯中，加入 90ml 无菌生理盐水，再取10乙醇 5ml 倒入烧杯中加热 5min。 4. 稀释涂布：取出灭完菌的 4 只试管分
3、别贴上标签 做梯度稀释 ，稀释倍数为 10-1 10-2 10-3 10-4 。再用移液管移取不同浓度的原液各 0.1ml 涂布于 MRS 培养基上，贴上标签。 （操作范围在酒精灯外焰 10cm无菌范围） 。涂布完的平板放于30恒温培养箱中培养 72h。5. 反复分离纯化：72h 后取出平板观察到白色菌落， 多次划线培养，直到平板上得到单一菌落为止。6. 鉴别培养：取出 MRS 培养基，用接种坏进行划线，接着 30 培养 72 小时。时间到后，取出培养基观察，发现白色圆形菌落，边缘整齐，进行镜检。通过鉴别培养和镜检可以确定得到的单一菌落为目的菌。7. 菌种保藏：配制 MRS 斜面培养基 ： 倒
4、入 4 支试管 ，包扎好灭菌、 摆斜面 、静置冷却 ， 放入恒温培养箱中待用。在试管斜面上进行划线，培养 72 小时。发现划线后的试管斜面长出白色菌落后，用保鲜膜包好放入 4的冰箱中保藏。实验中的注意事项培养时间不要太长，涂布时要冷却涂布棒，培养基不要太少，要保持无菌环境。结果与讨论：经培养得到白色菌落，挑取红白色菌落用 MRS 斜面培养基进行鉴别培养。菌落形态均为白色,菌落较小,直径 0.52.5mm 中央突起,边缘整齐,易挑取。菌株均为 G+,杆状,两端呈圆形 ,无鞭毛。通过观察菌落外观形态和镜鉴确定为所要筛取的目的菌乳酸菌参考文献：1 蒋立文，卜尔红，侯艳梅.利用纯种乳酸菌制作泡萝卜的技术研究J 2 凌代文，东秀珠 .乳酸细菌分类鉴定及实验方法M.北京：中国轻工业出版社，1999：85-88，118.3 张菊花，单杨 .乳酸菌发酵蔬菜汁工艺研究J.现代食品科技， 2005，21（4）：61-63.4 张刚.乳酸细菌 -基础、技术和应用M.北京：化学工业出版社，2007：174-175，196-199，333-334.5 杨洁彬，郭兴华，张箎，等.乳酸菌-生物学基础及应用M. 北京：中国轻工业出版社，1998：177-179.6 熊晓辉，王晓飞，陆利霞，等.泡菜中乳酸菌的分离、鉴定和生产初试J.中国调味品，2004（11）： 12-15.
