1、TRAP 染色（sigma-aldrich.NO387）Test procedure：1. 37预热足够的去离子水。 2. Fixation solution（固定液）室温放置，细胞爬片浸没 30 秒，用去离子水彻底清洗，不要让爬片太干燥。3. 准备两个 1.5ml EP 管，各加 0.5mL Fast garnet GBC Base solution（快速石榴石型碱溶液）和 0.5mL Sodium Nitrite Solution（亚硝酸盐溶液） ,轻轻混匀 30 秒，室温静置 2 分钟。两者混合后为 步骤三混匀的溶液 4. 另标签一个 50ml 离心管为 A（B） ，并按以下要求配置混合
2、液： (个人意见：说明书的 B 不用做只是对照) ？5. 把步骤 4 中的配置的染色液倒入合适的染色缸中，水浴加热到37，再加玻片前一定要保证温度达到 37 。Note：个人意见：直接在 35mm 皿上放置可拆卸 96 微孔板染，然后避光水浴（锡箔纸包裹后放置于一次性手套） 。6. 把爬片放入染色缸中，37避光孵育 1 小时。7. 孵育 1 小时后，用去离子水彻底清洗爬片可选步骤：（个人意见：要是苏木精染得技术不好还是别染了，最后步骤可省了） 8. 在 HematoxylinGill NO.3(苏木精溶液)复染 2 分钟。9. 碱性自来水冲洗几分钟，直到出现蓝色的核。10. 自然晾干，甘油明胶
3、封片，显微镜观察。Another one 染色步骤：1.取 6 孔板，弃液，加 PBS1ml/well 清洗，弃 PBS2.4%多聚甲醛（37左右） 1ml/well 加入 6 孔板，置于孵箱 25min取出，加 1ml/well PBS 清洗3.1 个 1.5ml EP 管，+fast garnet GBC base solution（氨偶氮卞） 0.5ml+sodium Nitrite solution(亚硝酸盐) 0.5ml二者轻轻混匀 30 秒，室温静置 2min4. 37超纯水 45ml步骤 3 的液体 1mlNaphthol AS-BI phosphate solution（萘酚） 0.5mlAcetate solution （醋酸） 2mlTartrate solution（酒石酸盐，避光加入） 1ml依次加入 25 平方厘米培养瓶，混匀，至于孵箱 5min 左右，使混合液温度尽量达到 375.取出配置好的染液，2ml/well 加入 6 孔板6.6 孔板置于 37 度孵箱中 1h（避光）7.取出 6 孔板，超纯水冲洗 3 次，自然风干后镜下观察
