1、血型正反定型不一致处理技巧2016年 11月 15日马春娅ABO血型系统抗原抗体简介血型鉴定方法血型鉴定强度判定标准血型正反定型不一致原因分析案例介绍主要内容血型 红细胞上抗原 血清中的抗体 基因型A型B型AB型O型ABABH抗 -B抗 -A无抗 -ABA/A或 A/OB/B或 B/OA/BO/OABO血型发现者： Karl Landsteiner， 1900年ABO血型系统抗原抗体简介H基因：遗传产生 -L-岩藻糖基转移酶 ，将岩藻糖基转移到支链末端的半乳糖上形成 H抗原ABO血型系统抗原抗体简介A基因 产物： N-乙酰氨基半乳糖转移酶 功能：从尿苷二磷酸（ UDP） -N-乙酰氨基半乳糖转
2、移一个 N-乙酰氨基半乳糖 到 H物质的岩藻糖化半乳糖基上B基因产物： 1， 3-D半乳糖基转移酶功能：从 UDP-半乳糖转移一个 D-半乳糖到 H物质的岩藻糖化半乳糖基上ABO血型系统抗原抗体简介血型（表现型） 基因型ABABOAA, AOBB, BOABOA和 B基因是显性基因O型基因是隐性基因基因型相同血型一定相同血型相同基因型不一定相同ABO血型系统抗原抗体简介A1与 A2量的差异A1： 8-12 105 A2： 1-4 105 A1B： 5-9 105 A2B： 1 105A1和 A2 质的差异约有 2%A2个体产生抗 A1约有 25%A2B个体产生抗 A1ABO血型系统抗原抗体简介
3、ABO血型系统抗原抗体简介A1和 A2抗血清 试剂红细胞 唾液（分泌型）-A -B -AB -A1 -H A1 A2 B OA1 4+ 0 4+ 2+ W/0 0 0 4+ 0 A/HA2 4+ 0 4+ 0 3+ 0/W 0 4+ 0 A/HABO血型系统抗原抗体简介抗血清 试剂红细胞 唾液（分泌型）-A -B -AB -A1 -H A1 A2 B OA3 mf 0 mf 0 3+ 0/w 0 4+ 0 A/HAend mf 0 mf 0 4+ 0/w 0 4+ 0 H 出现双群时，要结合临床，由简至难排查：如白血病、骨髓移植、不同型输血等 A3凝集细胞占 多数 ，游离细胞占少数； Aend
4、凝集细胞占 少量 ，需多次离心才能被发现；ABO血型系统抗原抗体简介抗血清 试剂红细胞 唾液（分泌型）-A -B -AB -A1 -H A1 A2 B OAx w 0 1+-3+ 0 4+ w 0/w 4+ 0 Aw/HAel 0 0 0 0 4+ w 0/w 4+ 0 HAm +/w 0 +/w 0 4+ 0 0 4+ 0 A/H Ay表现型与 Am相似 与同样的血清孵育时， Ay上放散下来的抗 A较 Am少 Ay比 Am分泌型唾液中 A物质含量更少ABO血型系统抗原抗体简介B亚型血清学特征抗血清 试剂红细胞 唾液（分泌型）-A -B -AB -H A1 A2 B OB3 0 mf mf 4
5、+ 4+ 3+ 0/w 0 B/HBend 0 mf 0 4+ 4+ 4+ 0/w 0 HBx 0 w 1-3+ 4+ 4+ 3+ w 0 HBel 0 0 0 4+ 4+ 4+ 0/w 0 HBm 0 -/w -/w 4+ 4+ 3+ 0 0 B/HABO血型系统抗原抗体简介A2B、 A3B、 AxB、 AmB、 AelB、 AendB、 AB3、 ABx、ABm、 ABel、 Abend 同 A亚型和 B亚型的血清学特点 不同之处：与抗 H的凝集强度弱，呈 w/0，同 A1BABO血型系统抗原抗体简介ABO血型系统抗原抗体简介B（ A）或 A（ B）表型 B型糖基转移酶在某些条件下可以合成
6、 A物质 A1型糖基转移酶也能合成 B物质 A型和 B型糖基转移酶的叠盖功能cisAB 两条染色体相邻的基因交换，产生两种转移酶 A和 B基因的一个基因突变，只能产生一种酶，同时催化 A和 B抗原的产生ABO血型系统抗原抗体简介cisAB和 B（ A）cisAB的 A抗原接近正常， B 抗原 较正常 弱 很多；B(A)的 B抗原接近正常， A抗原弱 很多。cisAB或 B（ A）血清中存在 针对弱抗原产生的不规则抗体cisAB与 抗 H反应强度 仅次于甚至接近与 O细胞。带有 cisAB或 B(A)等位基因的个体，若与 O型血的人（基因型O / O）生育，子女的血型可能表现为 AB型或 O型，
7、而不像通常AB型血与 O型血的父母只能生出 A或 B型血的子女。血清学方法判断为 AB亚型，需分子生物学验证ABO血型系统抗原抗体简介获得性 B 表现在 A型红细胞上 可能减弱 A抗原的抗原性 获得性 B消失后，红细胞 A抗原性增强 唾液中只含有 A和 H抗原 PH6时，凝集消失ABO血型系统抗原抗体简介孟买型和类孟买型抗血清 试剂红细胞 唾液（分泌型）-A -B -AB -A1 -H A1 A2 B OOh 0 0 0 0 4+ 4+ 4+ 3+ -Omh 0 0 0 0 4+ 4+ 4+ w HAmh w 0 w 0 0 w 0 4+ w A/HBmh 0 w w 0 0 4+ 3+ w
8、w B/HABO血型系统抗原抗体简介存在方式 颗粒性抗原（膜抗原）：存在于红细胞膜上 可溶性抗原（型物质）：存在于分泌型人群的体液中（如唾液）形成时间 胚胎期抗原产生 出生时已经存在，但 较成人弱 出生三月时与成人基本相同 以后逐步增强到成人水平ABO血型系统抗原抗体简介ABO血型系统抗原存在形式 A型与 B型人以 IgM为主， IgG很少 O型人含有抗 A、抗 B和抗 AB，以 IgG为主， IgM很少 AB型人既无抗 A也无抗 B产生时间 新生儿出生时理论上无 ABO抗体 3至 6月后开始产生抗体 5 10岁时抗体水平达到高峰，并延续多年 老年后，随年龄增大而降低ABO血型系统抗体ABO血
9、型系统抗原抗体简介正定型 用抗 -A和抗 -B检测红细胞上是否存在 A和 /或 B抗原反定型 用已知的 A1和 B型红细胞检测血清或血浆中的抗 A和或 B抗体准确定型 必须进行正反定型 并且正反定型的结果必须相互对应一致，符合 Landsteiner规则血型鉴定方法ABO血型鉴定单独 的正定型或反定型都不能准确鉴定血型正定型（检测抗原） 反定型（检测抗体）血型红细胞悬液 +标准血清 患者血清 +标准反定红细胞抗 A 抗 B A细胞 B细胞- - + + O+ + - - AB+ - - + A- + + - B血型鉴定方法玻片法 /纸板法 /瓷板法优点操作简单费用低廉缺点反应不充分易污染边缘易
10、干涸，造成假阳性试管法优点反应充分快速、准确结果可靠适用于所有血型血清学试验对于有疑问的血型均需转入试管法处理缺点不适用于批量 检测血型鉴定方法柱凝集法 ABO/RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶（或玻璃微珠）颗粒和抗 A、抗 B、抗 D标准血清 如果红细胞表面存在 A或 B或 D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应 凝胶（或玻璃微珠）颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶（或玻璃珠）颗粒，使其悬浮在凝胶（或玻璃珠）颗粒中 未凝集的红细胞则可以通过凝胶（或玻璃微珠）颗粒间的微小空隙到达微管底部 反定型将患者血清与标准红细胞分别加入微柱孔内，其反应原理同正定型血型鉴定方法
11、柱凝集法优点标准化程度高重复性强试验结果准确可靠标本用量少仪器检测可拍照存档便于查找结果，提供法律证据缺点抗蛋白干扰能力较差对细胞浓度要求较高血型鉴定方法微孔板法聚氯乙烯（ PVC）或聚苯乙烯（ PS）制成的 U型底微板在其孔中添加受检者红细胞悬液和标准血清（或受检者血浆和反定红细胞）经室温孵育后，振荡、离心平铺于微孔底部为阳性者；在微孔底部聚集成纽扣状为阴性优缺点适用于批量检测需要专用的仪器设备血型鉴定方法试管法血型操作技巧 红细胞浓度约为 3%-5%(1ml生理盐水 +1d压积红细胞） 正定型： 1d标准血清 +1d患者红细胞（ 3%-5%） 反定型： 1d试剂红细胞 +2d患者血清 离心
12、力： 1000g,15s 结果判读：用液体轻轻冲刷细胞扣边缘，仔细观察细胞扣的变化边缘齐整脱落，为阴性边缘呈不规则形状脱落，如月牙边，锯齿等，为阳性 强度判断：离心完后立即看结果，以细胞扣刚刚脱落完时状态，判断强度血型鉴定方法何谓有疑问的血型？正定型与反定型结果不一致正定型凝集强度 3+质控孔阳性反定型凝集强度 2+不该凝集的一端出现任意凝集强度O型反定强度不平行血型鉴定判断标准4+ 红细胞凝集成一大块，液体背景透明，无游离红细胞3+ 一个大凝块，周围有少量小凝块或数个大凝集块，液体背景透明，无游离红细胞血型鉴定判断标准2+ 有很多小凝集块，液体背景透明，无游离红细胞1+ 有许多很小的凝集块，肉眼可见，液体背景不透明，有游离红细胞1+2+ 3+血型鉴定判断标准
