生活饮用水生物检验.ppt

1、水质生物检验知识,1.新国标介绍2.微生物监测的意义主要内容 3.微生物基础及新国标中微生物检测方法介绍 4.水质监测中的其它微生物检测方法介绍5.水质监测中微生物检测新技术,新国标简介,1.水质标准的发展,国家生活饮用水卫生标准,新国标简介,1.水质指标项目分类 分为常规检验项目和非常规检验项目两类，其中常规检验项目42项，非常规检验项目64项，共106项。 与老国标GB5749-85相比，新国标中微生物、农药、有机物及消毒副产物项目大大增加。 与城市供水水质标准（CJ/T206-2005）不同部分主要在于新增少数农药指标和个别致病微生物指标及消毒副产物指标。,新国标简介,2.新老国标比较：

2、 水质检验项目由原35项增加至106项，其中： 微生物学指标由2项增至6项。 检测要求的变化。 检测频率的变化。,新国标简介,2.新老国标比较：,新国标简介,2.新老国标比较：,新国标简介,3.与国际先进水质标准接轨 新国标建立在国际先进水质标准基础上，水质标准指标的设立和限值要求逐步在向发达国家的先进标准看齐。城市供水水质标准（CJ/T206-2005）、生活饮用水水质卫生规范和国际标准主要是WHO与欧美国家标准的进展 从国际水质标准发展的趋势来看，水质指标数量在增加。世界卫生组织饮用水水质准则第3版（2004年）中，在饮用水中有健康意义的化学物质提出了限值的有94种，尚未建立限值的有50种

3、，未列入化学物的有25种，共计达169种。美国国家一级饮用水法规（2001）中，有机物指标（包括消毒剂和消毒剂副产物）有60种。美国环保局（EPA）又提出了“美国2004版饮用水标准和健康建议”，列出有机物171种，其中63种提出了最大污染浓度（MCL）。,新国标简介,4. 微生物的安全性摆在首位 世界卫生组织饮用水水质准则在1992年的第二版和2004年的第三版都明确 提出：水的充分消毒以保证水的微生物安全是必须和首要的。 新国标对水质安全基本要求中将“不得含有病原微生物 ”放在首位。 水质微生物的危害在世界上已有先例，中国的城市供水在这个问题上显得不突 出，是因为国人有良好的饮水习惯-烧开

4、喝。但今后直饮水质的管理就面临增 大的风险，必须对此充分重视。,新国标简介,5.两虫：贾第鞭毛虫与隐孢子虫 问题：水质细菌总数、大肠菌群、余氯合格，微生物还不一定安全。 贾第鞭毛虫（Giardia）、隐孢子虫（Cryptosporidium）:原生动物。常规加氯可灭活细菌、病毒，但对贾第鞭毛虫的包囊和隐孢子虫的卵囊无效。 1993年4月美国威斯康辛州米尔沃基市供水中含有隐孢子虫，致使该市超过150万人受感染，40.3万人患病，4400人住院，近百人死亡，引起世界的震惊。 1998年澳大利亚悉尼发生自来水的两虫污染，导致向全城公告饮用煮沸的自来水 美国国家一级饮用水规程要求隐孢子虫去除率达到99

5、%，贾第鞭毛虫去除率99.9%；英国要求两虫均1个/10L，并认为达到该水平是安全的。 新国标限值：1个/10L。,新国标简介,6.微量有毒有害物指标明显增加 标准中对微量的有毒有害的物质给予了充分的重视，体现国家对民生健康的关注。老国标35项中，与人体健康有关的指标为20项，占57%； 新国标106项中，与人体健康有关的水质指标为86项，占80%。 农药：从原国标的2项增加到18项，是新国标增加最多的种类。 环境激素：新国标增加了一些国际上公认的内分泌干扰物（环境激素）如莠去津、六氯苯、邻苯二甲酸二酯、苯乙烯等。 新国标增加了大量致癌和可能致癌致突变的消毒副产物：如卤乙酸、三卤甲烷。 新国标

6、还增加了藻类污染产生的微囊藻毒素、水厂可能使用的助凝剂聚丙酰胺的单体丙烯酰胺、管道内涂材料环氧氯丙烷等有毒有害物。,新国标简介,6.新国标颁布实施时间 生活饮用水卫生标准GB 5749-2006,2006年12月29日发布， 2007年7月一日实施。全部指标最迟于2012年7月1日实施。 广东省要求,广东省地级市要在2010年底前基本达到全部指标检测能力，对 县、镇级供水企业不能自检的非常规项目要委托具备检测能力的第三方检 测机构承担。7.新老国标比较表,6.新老国标检测项目对比,微生物监测的意义,1.水中的微生物风险高 有害化学物质带来的致畸、致癌风险一般在十万分之一到百万分之一的水平，风险

7、比较低；微生物的实际风险比有害物质大得多，如瘟疫等。2.水中含有大量病原微生物 如病原性细菌、钩端螺旋体、病毒、寄生虫等,微生物监测的意义,3食品被微生物污染后对人体的危害 食品被微生物污染后对人体的危害可分为三种：细菌性食物中毒（常见的食物中毒）、真菌性食物中毒、消化道传染病。各种致病菌引起人类症状如下：沙门氏菌：主要有伤寒，食物中毒和败血症等等。（急性胃肠炎症状）金黄色葡萄球菌：侵入人体伤口会产生化脓性感染，恶心、多次呕吐、腹痛。致病性大肠杆菌：腹泻,微生物监测的意义,4.富营养化导致微生物暴发生长及其危害 藻类暴发、水华、藻毒素。危害： 造成水体透明度下降 某些浮游生物可产生生物毒素 藻

8、类及其他水生生物死亡后，可产生硫化氢等有害气体 出现亚硝酸盐和硝酸盐，长期饮用这种水，人畜会中毒致病,微生物监测的意义,5.水厂消毒过程难以杀死部分微生物,微生物监测的意义,6.和饮用水有关的微生物危害事例 美国隐孢子虫病暴发、太湖蓝藻暴发等,微生物监测的意义,蓝藻暴发,2007年无锡蓝藻危机,水中微生物的基本知识,1.微生物的概念微生物(microbe,microorganism)非分类学上名词，它是指肉眼不能直接看见的、单细胞或个体简单的多细胞，甚至没有细胞结构的低等生物的通称。 微生物通常包括病毒、亚病毒（类病毒、拟病毒、朊病毒）、具原核细胞结构的真细菌、古生菌以及具真核细胞结构的真菌（

9、酵母、霉菌、蕈菌等）、原生动物和单细胞藻类,水中微生物的基本知识,2.水中微生物的种类 不具细胞结构的：脊髓灰质炎病毒,一些肠道病毒等； 单细胞结构的：细菌、放线菌、藻类等，如大肠杆菌、硫细菌、铁细菌、衣细菌等； 真菌：酵母菌、霉菌 原生动物：纤毛虫类、鞭毛虫类和根足虫类,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构 形态主要有3种。球形：称为球菌。如葡萄球菌、肺炎双球菌、链球菌等,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构 球形：称为球菌。如葡萄球菌等,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构 球形：称为球菌。如葡萄球菌等,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构 球形：称为球菌。如葡萄球

10、菌等,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构 形态主要有3种：杆状，称为杆菌，如棒状杆菌、大肠杆菌、放线杆菌等,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构 大肠杆菌,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构 放线杆菌,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构 梭状杆菌,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构 螺旋状：分为弧菌和螺旋菌。,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构 螺旋菌。,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构水中微生物的的大小：,水中微生物的基本知识,3.细菌的形态和结构 细菌的结构（典型结构）：细胞壁 细胞膜 细胞核 细胞质及内含物 鞭毛 芽孢,水中微生物的

11、基本知识,3.细菌的形态和结构 细菌的结构（典型平面、 立体结构图）：,水中微生物的基本知识,立体结构图,水中微生物的基本知识,4.细菌菌落的特征 菌落：在固体培养基的表面或深层，繁殖的菌体聚集在一起，就形成了菌落。 菌落特征是菌种识别、鉴定的依据之一。 菌落特征：大小、形状、光泽、颜色、硬度、透明度等。,水中微生物的基本知识,5.微生物的营养 营养物质：有机体从环境中获得的各种合成细胞物质、提供能量及在新陈代谢中起调节作用的物质的总称。 营养：有机体吸收和利用营养物质的过程。 微生物的营养物质：微生物细胞的元素构成由C、H、O、N、P、S、K、Na、Mg、Ca、Fe、Mn、Cu、Co、Zn、

12、Mo等组成。其中C、H、O、N、P、S六种元素占微生物细胞干重的97%；其他为微量元素。微生物细胞的化学元素组成的比例常因微生物种类的不同而各异。,水中微生物的基本知识,5.1碳源 碳源：构成微生物细胞和代谢产物中碳架来源的营养物质。不同的微生物对碳源有一定的选择性。主要是糖类。 碳源主要作用：构成微生物自身的细胞物质和供给微生物生长发育所需要的能量。,水中微生物的基本知识,5.2氮源 氮源：构成微生物细胞和代谢产物中氮素来源的营养物质。常用的主要有牛肉膏、蛋白胨、酵母膏等。 主要作用：合成细胞原生质和其它结构。不提供能量。,水中微生物的基本知识,5.3无机盐 一般为硫酸盐、磷酸盐、氯化物等。

13、 作用：构成细胞的成份，作为酶的组份；维持酶的作用；调节细胞 渗透压、pH、氧化还原电位等。 5.4水 作用：组成细胞的成份之一；参与细胞代谢；调节体温。,水中微生物的基本知识,5.5生长因子 生长因子：某些微生物维持正常生活所不可缺少而需要量不大的特殊营养物质，如维生素、氨基酸和嘌呤、嘧啶。 培养基：人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的混合营养物质。 培养基分类：合成培养基 化学组成 天然培养基固体培养基 加富培养基 物理状态 半固体培养基 用途 选择培养基液体培养基 鉴别,水中微生物的基本知识,6.微生物的生长微生物的生长：生长、发育、繁殖、衰老、死亡。 6.1微生物的纯培养

14、纯培养：在实验室条件下，从一个细胞或一种细胞群繁殖后得到 的后代。方法：稀释倒平皿法、划线法。,水中微生物的基本知识,6.2 细菌生长曲线 在培养基中以培养的时间为横坐标，以细菌增长对数为纵坐标得出的曲线。 6.2.1.适应期（迟缓期） 最初期2-6小时，数目不增加，菌细胞增大，代谢活跃，但不进行分裂。 6.2.2.对数期 610小时细菌迅速分裂，菌数呈对数增加，一个细菌繁殖n代产生2n 个细菌。代谢最旺盛，繁殖最快，致病力最强，是生理少年期。 3.稳定期 细菌繁殖的数目与死亡的数目几乎相等。约8小时。 4.衰退期 细菌的死亡速度超过分裂速度，培养液中的活细菌因环境不适应而自溶。形态染色不典型

15、。（几天几周一年）,水中微生物的基本知识,6.2 细菌生长曲线 6.2.3 稳定期 细菌繁殖的数目与死亡的数目几乎相等。约8小时。 6.2.4 衰退期 细菌的死亡速度超过分裂速度，培养液中的活细菌因环境不 适应而自溶。形态染色不典型。（几天几周一年）,水中微生物的基本知识,生长曲线图,细菌的生长曲线,水中微生物的基本知识,水中微生物的基本知识,6.3消毒与灭菌 灭菌（sterilization） ：用物理或化学因子除去物品上所有生活微生物的方法。 消毒（disinfection） ：杀死病原微生物的措施。 区别：灭菌是利用理化方法，杀死物体或介质中的所有微生物，包 括致病的和不致病的各种微生物

16、，以及细菌的繁殖体和孢芽。 灭菌后的物品即成无菌状态。消毒是利用理化方法，杀死物体或介质中的病原微生物，但不一定能杀死细菌的芽孢和某些抵抗力强的非病原微生物。 通过消毒可以达到防止病原微生物传播的目的。,水中微生物的基本知识,防腐：亦称抑菌，是指抑制微生物的生长繁殖，一般用于保存药品、食品、生物制品等。用于防腐的药物称为防腐剂。有些防腐剂在增加浓度或延长作用时间时，则具有杀菌作用。 无菌： 是没有活菌存在的意思，防止微生物进入机体或物体的方法，称为无菌操作。无菌操作所用的器具和材料，事先都要经灭菌处理。,水中微生物的基本知识,（一）常用的物理消毒、灭菌的方法： 1.高温灭菌法：A 焚烧和烧灼

17、干热灭菌法 B 干烤灭菌法 A 煮沸法 湿热灭菌法 B 巴式消毒法 C 高压蒸汽灭菌法,水中微生物的基本知识,2.辐射 光波短，能量强，物体吸收后使原子核电离。 A 紫外线 B 、 等射线3.滤过除菌：机械地滤去液体或空气中的细菌的方法 4.超声波 5. 低温 6.干燥,水中微生物的基本知识,水中微生物的基本知识 （一）常用的化学消毒、灭菌的方法：化学消毒主要是使用消毒剂，消毒剂不仅能杀死病原体，同时对人体组织细胞也有损坏作用。所以，消毒剂仅限于外用，如用于体表（皮肤、粘膜、表浅的伤口）以及物品和周围环境的消毒。 1.卤素类 氟、氯、溴、碘均有显著的杀菌效果 2.重金属盐类 重金属汞、铜、银等

18、即使微量也有杀菌作用。,水中微生物的基本知识,水中微生物的基本知识 （一）常用的化学消毒、灭菌的方法： 3.醇类： 醇类是有效的消毒剂，常用乙醇作皮肤、手及体温表的消毒。 4.醛类： 甲醛、戊二醛、环氧乙烷等。 5.酚类： 来苏尔（煤酚皂液）、石炭酸（苯酚） 6.氧化剂： 高锰酸钾、过氧化氢（双氧水）、过氧乙酸（CH3COOH） 又名过醋酸,水中微生物的基本知识,水中微生物的基本知识 （一）常用的化学消毒、灭菌的方法： 7.表面活性剂：新洁尔灭等 8.燃料 9.酸碱类,水中微生物的基本知识,消毒注意事项： A、酒精能使菌体蛋白质脱水变性，常用酒精杀菌浓度为75-80%（高于80%浓度的酒精因脱

19、水作用太快，使菌体表面迅速凝固而阻止了乙醇分子继续渗入故杀菌效力反而降低）B、氯的消毒作用，即是HCLO作用，HCLO是中性分子，可以扩散至带负电的细菌表面，并穿过细胞膜进入细胞内部，由于氯原子的氧化作用，破坏某些酶系统，最终致细菌死亡。,水中微生物的基本知识,消毒注意事项：1、消毒剂的浓度：消毒剂的消毒效果，一般与其浓度成正比，75-80%的酒精杀菌效力最好； 2、微生物的种类：微生物的种类如细菌、病毒、真菌等对消毒剂的敏感性不同， 3、有机物的存在：有机物中的蛋白质易和许多消毒剂结合，严重降低消毒的效果。对物体进行消毒必须先洗净油污。 4、温度：温度升高，杀菌力加强。温度升高10杀菌力增加

20、2-5倍。 5、接触时间：细菌与消毒剂接触时间愈久，消毒效果好。,水中微生物的基本知识,消毒注意事项： 6、 洗净杀菌要同时进行，顺序必须是清洗之后再杀菌。因为经过清洗后污浊消失，进行杀菌效果明显。另外，清洁剂与杀菌剂混淆使用的话，两者的效果就会减弱。因此清洗与杀菌之间，要进行充分的洗濯，清洗净后再杀菌，特别是带油污的，如果油污去除不净的话，油污就会做为一层保护膜，保护细菌而影响杀菌的效果。7、 次氯酸钠作为杀菌剂使用时，必须含有有效次氯酸钠100200ppm。器具必须充分洗净。另外，如和其它药剂混合使用，就会产生有毒气体（氯气），所以要特别注意不要与其它杀菌剂混杂使用,水质微生物检验的准备,

21、1.水质生物检验实验室设置准备间、缓冲间、无菌室。实验室要有严格的操作规则。2.培养基的制备2.1 要求：2.1.1 碳源、氮源、无机盐和其他成分；2.1.2 水分；2.1.3 pH2.1.4 物理性能（透明度等）,水质微生物检验的准备,2.2 培养基配制程序2.2.1 调配2.2.2 溶化 2.2.3 调节pH。 2.2.4 过滤澄清。 2.2.5 分装 2.2.6 灭菌 2.2.7 检定2.2.8 保存,水质微生物检验的准备,3.水样的采集和保存 原则：采取一切措施保证样品不受污染和发生任何变化。 3.1采样准备3.1.1 采样瓶：清洗、灭菌、3.1.2 去氯： 如果采集加氯水样，按500

22、ml瓶加入0.3ml 10%Na2S2O3溶液再灭菌。3.1.3 螯合剂：如果采集水样有重金属时，采样瓶灭菌前按500ml瓶加入1ml 15%EDTA-Na2溶液。,水质微生物检验的准备,3.2 采样步骤及注意事项 3.2.1 小心开启瓶盖，避免瓶盖和瓶口受到污染。3.2.2 采样操作 3.2.3 单层采水器和深层采水器 3.2.4 龙头水采样操作：龙头消毒，放水。3.2.5 不能冲洗采样瓶。3.2.6 自上而下采集水样；先采细菌水样。3.2.7 注意采样安全。 3.2.8 编号，记录。,水质微生物检验的准备,3.3 样品保存 采样到检验不能超过4小时，冷藏不能超过6小时。 4.无菌操作 【培

23、养前准备】根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。 【操作间消毒】无菌培养室每天紫外线照射消毒30-50min，超净工作台台面每次实验前要用75酒精擦洗。然后紫外线淌毒30min。消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置否则会遮挡射线降低消毒效果。,水质微生物检验的准备,4.无菌操作 【洗手和着装】穿着经培养室内紫外线照射30min的清洁工作服。进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。工作前必须用70酒精消毒双手。【火焰消毒】 在无菌环境进行无菌工作时，首先要点燃酒精灯或煤气灯。以后一切操作，如按装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需

24、在火焰近处并经过烧灼进行。,水质微生物检验的准备,4.无菌操作 【操作】进入无菌室前必须风淋20s以上； 抽滤前后都要用酒精火焰消毒法彻底消毒抽滤装置； 在打开样品瓶、吸管筒、培养皿筒和培养基三角瓶时，需用酒精火焰快速烧一遍接口部分； 测定细菌总数时，水样要从平皿的一侧加入，不要揭开皿盖； 进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。 不能用手触及已消毒器皿，吸取水样时，均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或导致交叉污染。,细菌总数的测定,1 概述 1.1 基本性质 定义：1mL水样在营养琼脂培养基上于37经24小时培养后，所得 到的菌落总数。 注意：1）细菌总数

25、不是所有细菌的总数。 2）细菌总数不是细菌个数。,细菌总数的测定,1.2 主要用途 反映水源受生活污水或有机污染的程度及净水工艺的效率。2 对人体的影响 粪便污染了饮用水，可能引起肠道传染病甚至暴发流行病。3 检测方法 GB/5750-2006 。 和GB/5750-85方法的区别：培养时间由24小时改为48小时。,细菌总数的测定,4 我国供水水质中的水平及国内外标准的限值 全国30多个水司的统计。,细菌总数的测定,4.2 国内外标准的限值,细菌总数的测定,另外：美国饮用水水质标准（USEPA2001）要求异养平板记数每mL不超过500个。 记数培养时间不同，最大记数是在2080下培养57天。

26、 加拿大和美国基本相同。法国和英国也有一些特殊规定。说明各个地区的标准基本接近的， 但是欧共体、英、法的规定更为严格一些。,细菌总数的测定,6 限值我国根据生活饮用水卫生标准（GB/5749-2006）规定，细菌总数100CFU/mL。7 质控与安全 每次检测要有无菌水空白对照。每批培养基要求灭菌是否完全的检验。,细菌总数检测过程中的质量控制,（1） 检验中所用的一切用品必须是完全灭菌的。在灭菌前应彻底洗涤干净，121高压蒸汽灭菌20min，或160干烤2h。培养基和稀释液按规定要求进行高压蒸汽灭菌。 （2） 同时各接种空白样品、同一稀释度平行样品和不同稀释度的几个平板平皿作对照。 （3） 水

27、样稀释时应小心沿管壁加入，不要触及管内稀释液，以防吸管尖端外侧部分粘附的检液混入其中。 （4） 将水样注入皿内时，从皿侧加入，不要揭去皿盖，最后将吸管直立使水流空，并在皿底干燥处再擦一下吸管尖将余液排出，而不要吹出。 （5） 为防止产生片状菌落，水样加入平皿后，在20min内向皿内倾入营养琼脂培养基，并立即混合均匀。 （6） 皿内琼脂凝固后，不要放置长久后才翻转培养，而应于琼脂凝固后，在数分钟内将平皿翻转进行培养，这样可避免菌落蔓延生长。,细菌总数检测过程中的质量控制,7、菌落计数时，应先分别观察同一稀释度的两个平板和不同稀释度的几个平板内菌落的生长情况。同一稀释度平行检测的两个平板上生长的菌

28、落数应该接近；不同稀释度的几个平板上的菌落数应与检样稀释倍数成反比。反之,则可能是检验工作中存在差错，应查明原因予以纠正。,细菌总数的测定,7 质控与安全 定期检查空气中的细菌数。 带菌培养基应灭菌后弃去。,总大肠菌群的测定,1 概述 1.1 基本性质 定义：大肠菌群(coliformorganisms)或总大肠菌群(total coliforms)是指一群革兰氏染色阴性、需氧及兼性厌氧、无芽孢、能在3537发酵乳糖并于2448小时内产酸产气的杆状细菌。 是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌 ; 出现在粪便、富营养化的水、土壤、腐败蔬菜和相对较高营养水平的饮用水,总大肠菌群的测定,大肠杆菌

29、透射电镜图片,总大肠菌群的测定,大肠杆菌扫描电镜图片,总大肠菌群的测定,带菌毛的大肠杆菌,大肠杆菌的纤毛及裂殖,总大肠菌群的测定,12 主要用途 作为粪便污染指标菌。评估配水系统处理的效果和完全与否。 有一定限制性。2 对人体的影响 肠道致病菌污染的可能性，潜伏着中毒和流行病的威胁,总大肠菌群的测定,3 检测方法 国家标准方法GB/5750-2006 ：多管发酵法和滤膜法、酶底物法 4 我国供水水质中的水平及国内外标准的限值 4.1我国供水水质数据资料 合格率较高，也有超标情况。,总大肠菌群的测定,统计表,总大肠菌群的测定,国内外限值,革兰氏染色的原理,由于细胞壁的结构不同，当碘染料复合物在细

30、菌细胞内形成以后，用95%的酒精脱色时，其效应为：抽提胞壁中的脂类；胞壁脱水，粘肽层的孔径缩小。,G+ ：粘肽多，脂类少，酒精处理后，粘肽发生收缩，脂质溶解，使胞壁的通透性明显降低，碘染料复合物被阻遏在胞壁内，使细菌呈蓝色。 G ：脂类多，粘肽少，酒精处理后，粘肽发生收缩，脂质溶解，但脂质占主体，使胞壁的结构变得松弛，虽然有粘肽也收缩，但疏松作用占主体，细胞壁的通透性明显增高，碘染料复合物被酒精洗脱出细胞壁，当用品红复染时，细菌菌体呈红色。,总大肠菌群的测定,革兰氏染色的步骤,1、草酸铵结晶紫染色液，1-2分钟，水洗3次； 2、革兰氏碘液媒染，1-3分钟，水洗3次； 3、.95%酒精脱色，30

31、秒-1分钟，水洗3次； 4、碱性复红液复染，10-30秒；水洗； 5、烘干或吸干抹片，镜检： 革兰氏阳性菌呈蓝紫色。 革兰氏阴性菌呈红色。,大肠杆菌,总大肠菌群的测定,革兰氏阳性,总大肠菌群的测定,革兰氏阳性,总大肠菌群检测过程中的质量控制(1),多管发酵法: 稀释度的选择：对低污染水样，选择10，1，.1ml 三个稀释度；怀疑水样有严重污染时，可用10倍 稀释系列接种三个以上稀释度。 在接种前应将水样充分摇匀，使水中的细菌能均匀分布于水中，接种后摇动试管，使水样与培养 基混匀。 乳糖发酵试验中常有产气量少或产酸不产气的情况，有时倒管内虽无气体但在液面及管壁却可以看到缓缓上浮的小气泡。 挑取菌

32、落数与大肠菌群的检出率有密切关系，一定要挑取典型菌落，如无应多挑几个以防假阴性,总大肠菌群检测过程中的质量控制(2),滤膜法: 滤膜法适用于检验自来水出厂水、管网水 和未受污染的地下水等较清洁的水样。 品红和亚硫酸钠不稳定，须新鲜配置。故品红亚硫酸钠培养基应临用时再加入新配的碱性品红与亚硫酸钠混合液。亚硫酸钠水溶液须新鲜配置，煮沸灭菌，不可高压。 滤膜灭菌在标准中规定用水浴煮沸灭菌。但当滤膜用量过多或现场采样过滤时，煮沸灭菌不便，也可用高压蒸汽灭菌（115）或钴-60照射。高压蒸汽灭菌后的滤膜韧性减低，易破裂，在操作时应注意。,耐热大肠菌群的测定,1 概述 定义(根据国际标准组织ISO-1-2

33、：1990（E）):1）大肠菌群（Coliform）：3537条件下培养48h，也能发酵乳糖（及甘露醇）产酸、产气及乙醛。 2）耐热大肠菌群（thermotoletant Coliform Organisms）：在4444.5下具有与大肠菌群相同发酵及生物化学性能的菌群。,耐热大肠菌群的测定,1 概述 定义 ： 3）埃希氏大肠菌（E.coli）：是耐热大肠菌群中能在色氨酸存在时生成红色吲哚，在甲基红实验中呈阳性，并能使L谷氨酸脱去羧基，但不能产生乙酰甲基甲醇，不能利用柠檬酸盐作为唯一碳源或在氰化钾培养基上不能生长繁殖的菌群。 注意：我国习惯上将耐热大肠菌群称为“粪大肠菌群”，检测方法检测意义并

34、无改变,耐热大肠菌群的测定,1.1基本性质 培养温度提高到4444.5，在此条件下仍能生长和发酵乳糖的菌群。埃希氏菌属：粪源特异性耐热大肠菌群 克雷伯菌属 肠杆菌属 总大肠菌群 柠檬酸菌属 其它(阴沟肠杆菌和弗氏柠檬酸杆菌) 注意：耐热大肠菌在配水系统中是不能繁殖的，除非管网中有充足的营养物质（升华需氧量超过10/mgL）,以及管网中没有余氯。,耐热大肠菌群的测定,1.2 主要用途 埃希氏大肠菌是最准确和专一的粪便污染指示 。 耐热大肠菌的检出，可认为近期水体直接或者间接地受到了粪便污染。注意：GB/5749-2006规定，如果饮用水检出总大肠菌群，就必须检测耐热大肠菌或者埃希氏大肠菌。,耐热

35、大肠菌群的测定,3 检测方法 国家标准方法GB/5750-2006中的方法。包括多管发酵法和滤膜法、酶底物法。,耐热大肠菌群的测定,1 多孔板,耐热大肠菌群的测定,4 国内外标准的限值,贾第鞭毛虫,1 概述 1.1 基本性质,贾第鞭毛虫,1 概述 1.1 基本性质,贾第鞭毛虫,隐孢子虫,贾第鞭毛虫,1 概述 荧光激发图片,贾第鞭毛虫,1 概述,贾第鞭毛虫,1 概述可见光荧光图片,贾第鞭毛虫,1 概述 1.1 基本性质贾第鞭毛虫，简称贾第虫，是寄生于人类和动物肠道的原生动物，蓝氏贾第鞭毛虫（又称肠贾第鞭毛虫，人类贾第虫病的病原体）是其中一种。 贾第虫的生活史简单分为两个阶段 。一是有繁殖能力的滋

36、养体阶段 ，一是有环境抗性的孢囊阶段。 常规加氯可以灭活多种细菌和病毒，但是不能灭活原生动物，无法影响贾第虫和隐孢子虫的活性。,贾第鞭毛虫,贾第鞭毛虫,1.2 主要用途 美国由饮水引发的流行疾病统计（19761994年）,贾第鞭毛虫,2 环境水平 美国EPA的调查结果显示：13.631.25的水厂原水中有贾第鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊，美国所有的自来水系统中，39的饮用水中检出贾第鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊。,贾第鞭毛虫,2 两虫可能是所有水媒性寄生原生动物中最可能通过饮用水传播的，原因如下： 来自人体的孢囊和卵囊可感染许多种类的家畜或者野生动物并且在环境中广泛分布。 某些水媒性暴发归因于非人体源

37、孢囊对饮用水的污染。 孢囊对消毒具高度抗性且体积小。,贾第鞭毛虫,3 对人体的影响 症状分为急性、亚急性和慢性。包括腹泻、胃气涨、腹痛、腹涨、疲劳、食欲不振、恶心、体重减轻、呕吐等。4 检测方法 美国EPA1623、1622，ICR等。 中国有国标方法GB/T 5750-2006. 5 国内外的限值 美国规定两虫数量为0/10L. 我国GB 5749-2006规定：两虫 1个/10L。,隐孢子虫,1 概述 1.1 基本性质隐孢子虫是寄生于众多动物的胃肠道和呼吸道细胞内的孢子球虫。有六个种，其中小隐孢子虫是引起人类和家畜临床疾病的主要种类。 卵囊的体积小，只有46m，所以各水处理工艺对原水中卵囊

38、的去除都不完全。 隐孢子虫卵囊对臭氧和加氯消毒的抵抗力比蓝氏贾第虫孢囊强1430倍。,隐孢子虫,2 对人体的危害 由于隐孢子虫卵囊其造成的危害可能大于贾第虫。 对免疫功能低下者和其它服用免疫抑制药物者构成了巨大威胁 。3 限值 美国规定两虫数量为0/10L. 我国GB 5749-2006规定：两虫 1个/10L。,隐孢子虫,2,两虫检测方法简介,1 免疫磁分离荧光抗体法（ GB/T 5750-2006 ） 原理：利用滤筒过滤富集水样中的隐孢子虫卵囊和贾第虫孢囊，接着用免疫磁珠分离技术将隐孢子虫卵囊和贾第虫孢囊与杂质分开，然后利用免疫荧光技术对两虫进行染色，并借助荧光和微分干涉显微镜进行镜检和计

39、数。,贾第鞭毛虫,2 主要步骤： 过滤； 淘洗； 免疫磁珠分离（IMS）； 免疫荧光染色； 镜检观察计数。,贾第鞭毛虫,过滤,贾第鞭毛虫,洗脱,贾第鞭毛虫,浓缩,贾第鞭毛虫,磁分离1,贾第鞭毛虫,磁分离2,贾第鞭毛虫,磁分离3,水中浮游生物的检测藻类,浮游生物分类 浮游植物： 藻类 浮游动物：原生动物，轮虫、枝角类和桡足类。,水中浮游生物的检测藻类,1 藻类的基本特征 藻类是一种能进行光合作用的单细胞低等植物 。 藻类的形态是千差万别的，小的只有几个微米；但是大型的藻类却有60多米长。藻类有球形，菱形，带形。 藻类在一定的环境下会产生毒素 。,水中浮游生物的检测藻类,2 藻类的种类 淡水浮游藻

40、类常被分为八个门，分别是：蓝藻门，硅藻门、甲藻门、隐藻门、绿藻门、裸藻门、金藻门、黄藻门。以蓝藻和硅藻分布最广，对水质的影响最大。,水中浮游生物的检测藻类,3 对水质的主要影响 藻类致臭 藻类产生毒素 可能造成堵塞或阻塞滤池 对管网的不利影响 可使水体透明度降低。 影响水体中的溶解氧,水中浮游生物的检测藻类,4 检测方法藻类的测定可以用叶绿素含量测定法、显微计数法、流式细胞仪计数法等，目前常用的是显微计数法。,短棘盘星藻Pediastrum boryanum (Turp.) Men. 真核生物界(Eukaryota)绿藻门(Chlorophyta)绿藻纲(Chlorophyceae) 绿球藻目

41、(Chlorococcales)水网藻科(Hydrodictyaceae)盘星藻属(Pediastrum,形态特征：藻体呈齿状圆盘形，由16个多边形细胞组成，其中外层的每个细胞都具2个角状突起。细胞壁较厚，表面有许多点状颗粒。细胞间的连接紧密而有规则，中间没有穿孔 (图15)，图1为藻体死后残留的细胞外壳；图6为幼体。 对水质和水处理的影响：当其数量较多时，会使水体产生草味。,短棘盘星藻颗粒变种Pediastrum boryanum var. granulatum (Kutz.) A. Br.,形态特征：藻体呈齿盘形，由8个多边形细胞组成，其中外层的每个细胞都具2个角状突起。细胞壁较厚，表面有

42、许多点状颗粒。细胞间的连接紧密，中间没有穿孔 (图16)。对水质和水处理的影响：当其数量较多时，会使水体产生草味。,四角盘星藻四齿变种Pediastrum tetras var. tetraodon (Cord.) Rab.,形态特征：藻体呈齿状四方形，由4个有缺刻的多边形细胞组成。细胞壁较薄，表面光滑，细胞缺刻处的外壁同时向外延伸成2个尖的叶状突起，缺刻和叶瓣的形态在个体之间略有差异(图15)。图6为幼体。 对水质和水处理的影响：当其数量较多时，会使水体产生草味。,扁盘栅藻Scenedesmus Platydiscus (G. M. Smith) Chod. 真核生物界(Eukaryota)

43、绿藻门(Chlorophyta)绿藻纲(Chlorophyceae) 绿球藻目(Chlorococcales)栅藻科(Scenedesmaceae)栅藻属(Scenedesmus),形态特征：藻体呈栅状，通常由8个细胞分2行平行交错排列；4个细胞的藻体(图7)较为罕见。藻体的细胞壁较薄，表面光滑。图13为成熟的藻体；图47为分裂繁殖分裂时的藻体；图89为生长过程中的藻体。 对水质和水处理的影响：喜欢在有机物丰富的富营养化水体中生活；当其数量较多时，会使水体产生草味，使水处理的成本增加。,丰富栅藻Scenedesmus abundans (Kirchn.) Chodat,形态特征：藻体呈栅状，由

44、24个细胞平行排列而成。每个细胞的两极都有一根极刺；另外、藻体两侧细胞的中部外缘还各有三根较细的侧刺。细胞壁较薄(见图16)。 对水质和水处理的影响：喜欢在富营养化水体中生活；当其数量较多时，会使水体产生草味。,镰形栅藻Scenedesmus falcatus Chodat,形态特征：藻体呈栅状，通常由8个镰形细胞呈线性交错排列而成；其中藻体两侧细胞的弯曲度较大。细胞壁较薄、表面光滑。图14为藻体正面观的情形。 对水质和水处理的影响：喜欢在富营养化水体中生活；当其数量较多时，会使水体产生草味，使水处理的成本增加。,裂空栅藻,韩氏集星藻Actinastrum hantzschii Lag. 真核

45、生物界(Eukaryota)绿藻门(Chlorophyta)绿藻纲(Chlorophyceae) 绿球藻目(Chlorococcales)群星藻科(Sorastraceae)集星藻属(Actinastrum),形态特征：藻体呈放射状，由48个梭形细胞组成，细胞的一端彼此相连成对称形的放射状群体。细胞壁较薄，表面光滑。色素体周生(图12，57)或片状(图34，812)。 对水质和水处理的影响：当其数量较多时，会使水体产生草霉味。,镰形纤维藻辐射变种Ankistrodesmus falcatus var. radiatus (Chod.) Lemmermann 真核生物界(Eukaryota)绿藻

46、门(Chlorophyta)绿藻纲(Chlorophyceae) 绿球藻目(Chlorococcales)卵囊藻科(Oocystaceae)纤维藻属(Ankistrodesmus),形态特征：藻体24个针形细胞交织构成。每个细胞的中央向两端渐细、直到两端尖锐。细胞壁较薄，表面光滑。色素体单个、片状、并且均匀地分布在整个细胞内(见图112)。对水质和水处理的影响：当其数量较多时，会使水体产生草霉味。,针形纤维藻,形态特征：藻体单细胞，呈针形。细胞的中央向两端渐细，两端尖锐。细胞壁较薄，表面光滑。色素体片状，中央通常有一明显的缺刻(图2、49)；如果观察的角度不同，这种缺刻会被藻体遮掩 (图1、3

47、)。藻体直(图28)或略为弯曲 (图1、9)。对水质和水处理的影响：当其数量较多时，会使水体产生草霉味。,具缘微囊藻Microcystis marginata (Mengegh.) Kutzing 原核生物界(Porkaryota)蓝藻门(Cyanophyta)蓝藻纲(Cyanophyceae) 色球藻目(Chroococcales)色球藻科(Chroococcaceae)微囊藻属(Microcystis,形态特征：藻体形状不规则，由许多微小的细胞组成。藻体内的细胞密度较小，细胞间有假空胞，细胞壁较薄。细胞间通过透明的胶质彼此相连。藻体的外缘有一层厚而坚韧的无色胶被；图2 藻体死后，残留的胶被

48、。藻体通常较小，但几个较小的藻体通常能聚集在一起，形成较大多群体(图1、3)。细胞呈棕黑色。 对水质和水处理的影响：喜欢在富营养化水体中生活；当其数量较多时，会使水体产生强烈的霉味；同时还会影响水处理。,水华微囊藻Microcystis flos-aquae (Wittr.) Kirch,形态特征：藻体较大，不定形，由很多微小细胞构成(见图14)。藻体内的细胞密度较大。细胞呈棕黑色(图14)或蓝绿色(图2、3)。细胞内有假空胞。细胞壁较薄，细胞间通过透明的胶质彼此相连，藻体外缘没有明显的胶被。对水质和水处理的影响：喜欢在富营养化水体中生活；当其大量繁殖时，会在水面形成水华；同时还会使水体产生强

49、烈的霉味；另外，这种藻类还能产生微囊藻毒素(Mircocystin_LR)。是一种对水处理影响较大的藻类。,尖针杆藻原变种Synedra acus Kuetzing var. acus 真核生物界(Eukaryota)硅藻门(Bacillariophyta) 羽纹纲(Pennatae) 无壳缝目(Araphidiales)脆杆藻科(Fragilariaceae)针杆藻属(Synedra),形态特征：藻体呈披针形，中部膨大，两端细长。图19为常见的藻体形态(正面观的情形)。对水质和水处理的影响：喜欢在富营养化水体中生活；当其数量较多时，会使水体产生霉味，使水处理的成本增加。,颗粒直链藻Melosira granulata (Ehrenberg) Ralfs 复大孢子的几种常见形态圆筛藻目(Coscinodiscaceae) 圆筛藻科(Coscinodiscaceae)直链藻属(Melosira),