1、ICS65.020.01 B22备 案 号 ： DB32江 苏 省 地 方 标 准DB32/T 22652012鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定 双波长分光光度法Determination of amylase and amylopectin content in fresh corn Dual-Qavelength Spetrophotometry2012-12-28 发布 2013-02-28 实施江 苏 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 DB32/T 22652012前 言本 标 准 按 GB/T 1.12009 标 准 化 工 作 导 则 第 1部 分 ： 标 准 的 结
2、构 和 编 写 的 要 求 编 写 。 本 标 准 由 江 苏 省 农 业 科 学 院 提 出 。 本标准 起草 单位 ： 江 苏省 农业科 学院 农产 品加 工研 究所、 国家 农业 科技 华东 （江苏 ） 创 新中 心 农 产品 加 工 工 程 技 术 研 究 中 心 。 本 标 准 主 要 起 草 人 ： 宋 江 峰 、 刘 春 泉 、 李 大 婧 、 林 美 娟 、 刘 春 菊 、 吴 海 虹 、 牛 丽 影 、 崔 莉 、 江 宁 。DB32/T 226520121鲜食玉米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定 双波长分光光度法1 范 围本 标 准 规 定 了 双 波 长 分 光 光 度 法
3、 测 定 鲜 食 玉 米 中 直 链 淀 粉 和 支 链 淀 粉 含 量 的 方 法 。 本 标 准 适 用 于 乳 熟 后 期 至 蜡 熟 初 期 收 获 的 鲜 食 玉 米 中 直 链 淀 粉 和 支 链 淀 粉 含 量 的 测 定 。2 规 范 性 引 用 文 件下列文 件对 于本 文件 的应 用是必 不可 少的 。 凡 是注 日期的 引用 文件 ， 仅 所注 日期的 版本 适用 于本 文 件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB 7648-1987 水 稻 、 玉 米 、 谷 子
4、籽 粒 直 链 淀 粉 含 量 的 测 定GB/T 6682-2008 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法3 原 理根据双 波长 比色 原理 ， 若 试样溶 液在 两个 波长 处均 有吸收 ， 则两 个波 长的 吸 光差值 ， 与溶 液中 待测 物质的 浓 度 成正 比 。 从 待 测样品 液中 的直 链淀 粉 、 支链淀 粉分 别与 碘生 成络 合物的 吸收 图谱 中 ， 可 以 确 定 测 定 波 长 和 参 比 波 长 。 淀 粉 与 碘 能 形 成 螺 旋 状 结 构 的 碘 -淀 粉 复 合 物 ， 它 具 有 特 效 的 颜 色 反 应 ， 其 中 直 链 淀
5、粉 与 碘 生 成 纯 蓝 色 复 合 物 ， 而 支 链 淀 粉 与 碘 依 其 分 枝 程 度 生 成 紫 红 -红 棕 色 复 合 物 。 因 此 两 种 淀 粉 与 碘 作 用 时 会 产 生 不 同 的 光 学 特 性 ， 从 而 表 现 出 特 定 的 吸 收 谱 及 吸 收 峰 。4 试 剂除 非 另 有 说 明 ， 在 分 析 中 仅 使 用 确 认 为 分 析 纯 的 试 剂 和 GB/T 6682-2008 中 规 定 的 水 。4.1 直 链 淀 粉 标 准 品直 链 淀 粉 标 准 品 的 制 备 参 照 GB 7648-1987 中 附 录 （ 参 考 件 ） 操 作
6、 。4.2 支 链 淀 粉 标 准 品支 链 淀 粉 标 准 品 的 制 备 参 照 GB 7648-1987 中 附 录 B（ 参 考 件 ） 操 作 。4.3 盐 酸 （ HCl） 。4.4 氢 氧 化 钾 （ KOH） 。4.5 石 油 醚 （ 沸 点 30 60 ） 。4.6 碘 （ I2） 。4.7 碘 化 钾 （ KI） 。4.8 碘 试 剂称取 2.0 g 碘 化 钾 ， 溶 于 少 量 蒸 馏 水 ， 再 加 0.2 g 碘 ， 待 溶 解 后 用 蒸 馏 水 稀 释 定 容 至 100 mL。 每 天 用 前 现 配 ， 避 光 保 存 。4.9 直 链 淀 粉 标 准 贮
7、备 液称取 0.1000 g 直 链 淀 粉 标 准 品 ， 置 于 50 mL 容 量 瓶 中 ， 加 入 1 mol/L 氢 氧 化 钾 溶 液 10 mL， 在 热DB32/T 226520122水 中 待 溶 解 后 ， 取 出 用 蒸 馏 水 定 容 至 刻 度 ， 摇 匀 并 静 置 ， 制 备 2 mg/mL 直 链 淀 粉 标 准 贮 备 液 。4.10 支 链 淀 粉 标 准 贮 备 液称取 0.1000 g 支 链 淀 粉 标 准 品 按 （ 4.9） 法 制 备 2 mg/mL 支 链 淀 粉 标 准 贮 备 液 。5 仪 器 和 设 备5.1 双 光 束 分 光 光 度
8、 计带 波 段 扫 描 。5.2 分 析 天 平感 量 为 0.01 g 和 0.1 mg 各 一 台 。5.3 pH 计pH 计 精 度 为 0.01， 使 用 前 校 正 。5.4 索 氏 抽 提 器 。5.5 恒 温 水 浴 锅 。5.6 鼓 风 干 燥 箱 。5.7 组 织 捣 碎 机 。6 试 样 制 备将 鲜 食 玉 米 籽 粒 样 品 用 组 织 捣 碎 机 捣 碎 ， 置 于 60 鼓 风 干 燥 箱 中 烘 干 ， 使 其 水 分 含 量 降 低 到 10 % 以 下 ， 过 孔 径 为 0.25mm 试 样 筛 。 称 取 1 g 的 烘 干 样 品 放 入 索 氏 抽 提
9、 器 中 ， 加 入 35 mL 石 油 醚 ， 加 热 回 流 脱 脂 4 h， 然 后 放 入 鼓 风 干 燥 箱 中 烘 干 ， 挥 去 残 余 的 石 油 醚 。7 检 验 步 骤7.1 提取准 确 称 取 脱 脂 样 品 0.1000g， 置 于 50 mL 容 量 瓶 中 ， 加 1 mol/L 氢 氧 化 钾 溶 液 10 mL， 在 75 水浴 中 充 分 溶 解 20 min， 冷 却 后 用 蒸 馏 水 稀 释 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 静 置 15 min 后 过 滤 。7.2 测定精 取 5 mL滤 液 ， 置 于 50 mL容 量 瓶 中 ， 加 25 mL蒸 馏
10、水 ， 以 0.1 mol/L 盐 酸 溶 液 调 pH至 3.0， 加 0.5 mL 碘 试 剂 ， 用 蒸 馏 水 定 容 至 刻 度 。 于 室 温 静 置 25 min后 ， 以 样 品 空 白 液 为 对 照 ， 用 1 cm比 色 杯 ， 分 别 测 定 样 品 液 1、 2、 3、 4的 吸 收 值 A 1、 A 2、 A 3、 A 4， 得 到 A样 直 ， A样 支 ， 再 与 标 准 化 系 列 比 较 定 量 。7.3 标 准 曲 线 绘 制7.3.1 选 择 直 链 、 支 链 淀 粉 测 定 波 长 、 参 比 波 长分 别 吸 取 1.0 mL、 5.0 mL 直
11、链 和 支 链 淀 粉 标 准 贮 备 液 置 于 50 mL 容 量 瓶 中 ， 加 蒸 馏 水 25 mL， 以 0.1 mol/L 盐 酸 溶 液 调 pH 至 3.0， 加 0.5 mL 碘 试 剂 ， 并 用 蒸 馏 水 定 容 。 室 温 下 静 置 25 min。 以 蒸 馏 水 为 空 白 ， 用 双 光 束 分 光 光 度 计 进 行 可 见 光 全 波 段 扫 描 绘 制 直 链 和 支 链 淀 粉 吸 收 曲 线 。 根 据 原 理 （ 3） 确 定 直 链 淀 粉 和 支 链 淀 粉 的 测 定 波 长 1、 2， 参 比 波 长 3、 4。7.3.2 双 波 长 直
12、链 淀 粉 标 准 曲 线 绘 制分 别 吸 取 0.3 mL、 0.5 mL、 0.7 mL、 0.9 mL、 1.1 mL 和 1.3 mL 直 链 淀 粉 标 准 贮 备 液 ， 置 于 50 mL3DB32/T 226520122容 量 瓶 中 ， 加 25 mL 蒸 馏 水 ， 以 0.1 mol/L 盐 酸 溶 液 调 pH 至 3.0， 加 0.5 mL 碘 试 剂 ， 用 蒸 馏 水 定 容 。 室 温 下 静 置 25 min 后 ， 以 蒸 馏 水 为 空 白 ， 用 1cm 比 色 杯 在 1、 3 两 波 长 下 分 别 测 定 A 1、 A 3， 即 得 A 直 =
13、A 1-A 3， 以 A 直 为 纵 坐 标 ， 直 链 淀 粉 浓 度 （ mg/mL） 为 横 坐 标 ， 制 作 双 波 长 直 链 淀 粉 标 准 曲 线 。7.3.3 双 波 长 支 链 淀 粉 标 准 曲 线 绘 制分 别 吸 取 2.0 mL、 2.5 mL、 3.0 mL、 3.5 mL、 4.0 mL、 4.5 和 5.0 mL 支 链 淀 粉 标 准 贮 备 液 ， 置 于 50 mL 容 量 瓶 中 。 以 下 操 作 同 （ 7.3.2） 。 以 蒸 馏 水 为 空 白 ， 用 1cm 比 色 杯 在 2、 4 两 波 长 下 分 别 测 定 A 2、 A 4， 即 得
14、 A 支= A 2-A 4， 以 A 支 为 纵 坐 标 ， 支 链 淀 粉 浓 度 （ mg/mL） 为 横 坐 标 ， 制 作 双 波 长 支 链 淀 粉 标 准 曲 线 。8 结 果 计 算每 100 克 鲜 食 玉 米 籽 粒 中 直 链 淀 粉 和 支 链 淀 粉 的 含 量 分 别 按 式 （ 1） 和 式 （ 2） 计 算 。Y C1 50 10 (1W1 W2 ) 100 （ 1）1 M 1000 C 50 10 (1W W ) （2 ）Y2 1M 1000 2 100式中：Y1试 样 中 直 链 淀 粉 的 含 量 ， 单 位 为 克 每 百 克 （ g/100g） ； Y2
15、试 样 中 支 链 淀 粉 的 含 量 ， 单 位 为 克 每 百 克 （ g/100g） ； C1标准曲线查得的样品液中直链淀粉的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； C2标准曲线查得的样品液中支链淀粉的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； M测定用脱脂样品的质量，单位为克（g）； W1试 样 中 水 分 含 量 ， 单 位 为 克 每 百 克 （ g/100g） ； W2试 样 中 粗 脂 肪 含 量 ， 单 位 为 克 每 百 克 （ g/100g） ； 计算结果保留至小数点后 2 位 。9 方 法 测 定 低 限 和 允 许 差9.1 本 方 法 对 鲜 食 玉 米 籽 粒 中 直
16、 链 淀 粉 和 支 链 淀 粉 的 测 定 低 限 为 0.1g/100g。9.2 在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的 10%。4DB32/T 22652012吸光值/Abs附录A（ 资 料 性 附 录 ） 直 链 淀 粉 与 支 链 淀 粉 参 比 波 长 分 析A.1 直 链 淀 粉 与 支 链 淀 粉 参 比 波 长 分 析1.00.90.80.70.60.50.40.30.20.1 2 11 直链淀粉吸收曲线2 支链淀粉吸收曲线120.0 3 4400 450 500 550 600 650 700 750 800波长/nm图 A.1 直 链 淀 粉 与 支 链 淀 粉 参 比 波 长 分 析
