1、ICS 65.020.01B 40 备 案 号 ： 18645-2006 DB32江 苏 省 地 方 标 准DB32/T 9002006兽 药 粉 剂 /预 混 剂 中 甲 氧 苄 啶 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法Determination of trimethoprim in powder/premix of veterinary drug High Performance Liquid Chromatography2006-03-25 发布 2006-05-25 实施江 苏 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 DB32/T 9002006前 言为 了 防 止 兽 药 粉 剂
2、/预 混 剂 中 长 期 大 量 添 加 甲 氧 苄 啶 ， 使 动 物 产 生 耐 药 性 与 致 畸 作 用 ， 在 动 物 体 内 的 残 留 给 人 类 健 康 带 来 危 害 ， 特 制 定 本 标 准 以 监 控 兽 药 粉 剂 /预 混 剂 中 甲 氧 苄 啶 的 含 量 。本标准 按 GB/T1.1-2000 标准化 工作 导则 第1 部分 ： 标准 的结 构和 编写 规则 和GB /T1.2-2002 标 准 化 工 作 导 则 第 2部 分 ： 标 准 中 规 范 性 技 术 要 素 内 容 的 确 定 方 法 编 制 。本 标 准 附 录 A为 资 料 性 附 录 。 本
3、 标 准 由 江 苏 省 农 林 厅 提 出 。 本 标 准 由 江 苏 省 兽 药 监 察 所 起 草 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 宋 慧 敏 、 时 勇 、 毕 昊 容 、 邵 德 佳 、 颜 京 平 、 王 苏 华 、 花 继 兰 、 汪 云 花 。DB32/T 90020061兽药粉剂/预混剂中甲氧苄啶的测定 高效液相色谱法1 范围本 标 准 规 定 了 兽 药 粉 剂 /预 混 剂 中 甲 氧 苄 啶 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法 的 原 理 、 试 剂 和 溶 液 、 仪 器 及 设 备 、 分 析 步 骤 、 定 量 测 定 、 结 果 计 算 、 允 许 偏
4、 差 。本 标 准 适 用 于 用 高 效 液 相 色 谱 法 测 定 兽 药 粉 剂 /预 混 剂 中 甲 氧 苄 啶 ， 最 低 检 出 浓 度 为 0.25 g/mL。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 随 后 所 有 的 修 改 单 （ 不 包 括 勘 误 的 内 容 ） 或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准 ， 然 而 ， 鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究 是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最
5、新 版 本 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准 。GB/T 6682-1992 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法3 原理试 样 中 甲 氧 苄 啶 经 流 动 相 提 取 后 ， 注 入 高 效 液 相 色 谱 仪 中 进 行 分 离 ， 用 紫 外 检 测 器 检 测 ， 外 标 法 计 算 甲 氧 苄 啶 的 含 量 。4 试 剂 和 溶 液除 特 殊 说 明 外 ， 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯 ； 水 为 双 蒸 水 ， 符 合 GB/T6682-1992中 一 级 水 规 定 。4.1 甲 醇 ：
6、 色 谱 纯 。4.2 磷 酸 二 氢 钾 ： 分 析 纯 。4.3 流 动 相 ： 取 磷 酸 二 氢 钾 2.72g， 加 水 使 溶 解 并 稀 释 至 1L， 取 该 溶 液 800mL 与 200mL 甲 醇 混 合 ， 摇 匀 、 过 滤 、 脱 气 、 待 用 。4.4 甲 氧 苄 啶 标 准 品 ： 纯 度 应 不 小 于 99.0 。4.5 甲氧 苄 啶 标 准贮 备液 ： 准 确称取 已知 纯度 的甲 氧苄 啶标准 品 25mg（ 精确 至 0.0001g） ， 置 于 100mL 容 量 瓶 中 ， 用 流 动 相 溶 解 ， 置 超 声 波 清 洗 器 中 超 声 10
7、min 后 用 流 动 相 定 容 、 摇 匀 ， 该 溶 液 中 甲 氧 苄 啶 浓 度为 0.25mg/mL,置 于 4 保 存 ， 可 使 用 3 个 月 。4.6 甲 氧 苄 啶 标 准 工 作 液 ： 准 确 移 取 标 准 贮 备 液 5mL 于 50mL 容 量 瓶 中 ， 用 流 动 相 定 容 至 刻 度 ， 该 溶 液 中 甲 氧 苄 啶 浓 度 为 25g/mL， 置 于 4 保 存 ， 可 使 用 1 个 月 。5 仪 器 及 设 备高 效 液 相 色 谱 仪 （ 紫 外 检 测 器 ） 、 超 声 波 清 洗 器 、 超 纯 水 处 理 器 。6 分 析 步 骤6.1
8、 试 样 溶 液 的 制 备 准 确 称 取 试 样 适 量 （ 含 甲 氧 苄 啶 约 为 2.5mg） ， 置 于 100mL容 量 瓶 中 ， 加 入 约 三 分 之 二 体 积 的 流 动相 ， 于 超 声 波 清 洗 器 中 超 声 提 取 10min， 再 用 流 动 相 定 容 至 刻 度 ， 摇 匀 、 过 滤 ， 滤 液 过 0.45 m滤 膜 ， 待 用。6.2 色 谱 条 件6.2.1 色 谱 柱 ： C18 柱 （ 粒 度 为 5 m） ： 150mm4.6mm（ i.d.） 。DB32/T 900200626.2.2 流 动 相 ： 20 甲 醇 溶 液 ， 以 1.
9、0mL/min 流 速 洗 脱 。6.2.3 进 样 量 ： 10L。6.2.4 检 测 器 ： 紫 外 检 测 器 ， 检 测 波 长 271nm。7 定 量 测 定按高效 液相 色谱 仪说 明书 调整仪 器操 作参 数。 向色 谱柱中 注入 甲氧 苄啶 标准 工作液 及试 样溶 液， 得 到 色 谱 峰 面 积 响 应 值 ， 用 外 标 法 定 量 ， 色 谱 图 参 见 附 录 A。8 结 果 计 算8.1 试 样 中 甲 氧 苄 啶 的 含 量 按 式 （ 1） 计 算 。Wi PiVCiVst (1)PstimVi式中： Wi试 样 中 甲 氧 苄 啶 的 含 量 ， 单 位 为
10、毫 克 每 千 克 （ mg/kg） ; Pi试 样 溶 液 峰 面 积 值 ; V样 品 的 总 稀 释 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ mL） ; Ci标 准 溶 液 浓 度 ， 单 位 为 微 克 每 毫 升 （ g/mL） ; Vst标 准 溶 液 进 样 体 积 ， 单 位 为 微 升 （ L); Psti标 准 溶 液 峰 面 积 算 术 平 均 值 ; m试 样 质 量 ， 单 位 为 克 （ g） ; Vi试 样 溶 液 进 样 体 积 ， 单 位 为 微 升 （ L)。8.2 平 行 测 定 结 果 用 算 术 平 均 值 表 示 ， 保 留 至 小 数 点 后 一 位 。9 允 许 偏 差同 一 分 析 者 对 同 一 试 样 两 次 平 行 测 定 结 果 的 相 对 偏 差 不 大 于 10 。DB32/T 90020063附 录 A（ 资 料 性 附 录 ） 甲 氧 苄 啶 对 照 色 谱 图甲 氧 苄 啶 对 照 色 谱 图 见 图 A.1。图A.1 甲 氧 苄 啶 对 照 色 谱 图
