1、收稿日期 : 2014-02-13基金项目 : 广东省中医药局科研课题 ( 20132030)作者简介 : 余晓霞 ( 1979-) ， 女 ， 硕士 ， 主管药师 ， 主要从事医院药学研究 ; Tel: 020-81332427， E-mail: xiaoxiao197921cn. com。*通讯作者 : 王定勇 ， Tel: 020-39352213， E-mail: wdingyong163. com。南蛇藤叶降血糖有效部位化学成分研究余晓霞1， 张亭亭2， 王定勇2*( 1. 中山大学孙逸仙纪念医院药学部 ， 广东 广州 510120; 2. 广东药学院药科学院 ， 广东 广州 510
2、006)摘要 目的 : 研究南蛇藤 Celastrus orbiculatus Thunb. 叶降血糖有效部位的化学成分 。方法 : 采用柱色谱和薄层色谱分离纯化化合物 ， 用 I、MS、NM 等波谱技术鉴定结构 。结果 : 分离并鉴定了 7 个化合物 ， 分别为 : 山柰酚( 1) 、槲皮素 ( 2) 、山柰酚 -7-O-L-鼠李糖苷 ( 3) 、山柰酚 -3， 7-二 -O-L-鼠李糖苷 ( 4) 、槲皮素 -3-O-D-葡萄糖苷( 5) 、杨梅苷 ( 6) 和山柰酚 -3-O-芸香糖苷 ( 7) 。结论 : 首次报道南蛇藤叶降血糖有效部位的化学成分 ， 且化合物 5 7 为首次从该植物中
3、分离得到 。关键词 南蛇藤叶 ; 化学成分 ; 黄酮 ; 降血糖中图分类号 : 284. 1/284. 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1001-4454( 2014) 06-0998-03Chemical Constituents in Hypoglycemic Active Fraction of Celastrus orbiculatus LeafYU Xiao-xia1， ZHANG Ting-ting2， Wang Ding-yong2( 1. Department of Pharmacy， Sun Yat-sen Memorial Hospital， Sun Yat-sen
4、University， Guangzhou 510006， China; 2. School of Pharma-cy， Guangdong Pharmaceutical University， Guangzhou 510006， China)Abstract Objective: To study the chemical constituents in the hypoglycemic active fraction of Celastrus orbiculatus leaf. Methods:The constituents were separated and purified by
5、column chromatography and thin layer chromatography， and their structures were eluci-dated by I， MS and NM. esults: Seven compounds were isolated from the active fraction of Celastrus orbiculatus， which identified askaempferol( 1) ， quercetin( 2) ， kaempferol-7-O-L-rhamnoside( 3) ， kaempferol-3， 7-d
6、i-O-L-rhamnoside( 4) ， quercetin-3-O-D-glu-coside( 5) ， myricetrin( 6) and kaempferol-3-O-rutinoside( 7) . Conclusions: Chemical constituents in the hypoglycemic active fraction ofCelastrus orbiculatus leaf are reported for the first time， and compounds 5， 6 and 7 are firstly obtained from this plan
7、t.Key words Celastrus orbiculatus leaf ; Chemical constituents; Flavonoid; Hypoglycemic action南蛇藤 Celastrus orbiculatus Thunb. 系卫矛科南蛇藤属藤状灌木 ， 在我国分布广泛 。茎 、根和叶均可入药 ， 具有袪风湿 、活血脉 、消肿等功效 ， 常用于治疗风湿性关节炎 、腰腿痛 、筋骨痛 、牙痛 、闭经 、痢疾 、跌打损伤 、肠风痔漏 、毒蛇咬伤 、疮疡 、痈疖等症1。南蛇藤的化学成分主要为倍半萜 、生物碱 、黄酮以及三萜等2。近年国内外报道其对乳腺癌 、胃癌 、卵巢癌以及
8、恶性黑色素瘤等细胞株有很好的细胞毒作用3。笔者曾对南蛇藤进行化学成分研究 ， 发现其根皮的甲醇提取物对肺癌细胞 A549 有较强抑制作用 ( IC50值为 15. 66 g/mL)4。随着对南蛇藤的深入研究 ， 笔者发现南蛇藤叶子具有良好的降血糖效果 ， 并以四氧嘧啶致糖尿病小鼠动物模型5， 6成功筛选到南蛇藤叶降血糖活性的有效部位 。为阐明其药效物质基础 ， 本文对该有效部位进行系统的化学成分研究 ， 从中分离得到 7 个化合物 ， 分别鉴定为 :山柰酚 ( 1) 、槲皮素 ( 2) 、山柰酚 -7-O-L-鼠李糖苷( 3) 、山柰酚 -3， 7-二 -O-L-鼠李糖苷 ( 4) 、槲皮素
9、-3-O-D-葡萄糖苷 ( 5) 、杨梅苷 ( 6) 和山柰酚 -3-O-芸香糖苷 ( 7) 。其中 ， 化合物 5 7 为首次从该植物中分离得到 。1 仪器与材料X-6 型显微熔点测定仪 ( 温度计未校正 ， 北京泰克仪器有限公司 ) ; Bruker AM-500 型核磁共振仪( TMS 为内标 ， 瑞士 Bruker 公司 ) ; Agilent 6120 LC/MS( 美国 Agilent 公司 ) ; PerkinElmer Spectrum-100型红外光谱仪 ( KBr 压片 ， 美国 PerkinElmer 公司 ) 。层析用硅胶 ( 青岛海洋化工厂 ) ; 聚酰胺粉 ( 60
10、 90目 ) 及聚酰胺薄膜 ( 浙江黄岩四青生化材料厂 ) ;D101 型大孔树脂 ( 蚌埠市辽源新材料有限公司 ) ;有机溶剂均为分析纯 ( 天津市富宇精细化工有限公司 ) 。试验用南蛇藤叶于 2012 年 10 月采自广东省阳春市 ， 由广东药学院中药学院曾令杰教授鉴定为卫矛科南蛇藤属植物南蛇藤 Celastrus orbiculatusThunb. 的叶 。2 提取与分离取阴干的南蛇藤叶 5. 0 kg， 粉碎至 30 目 ， 用适量甲醇室温浸泡 3 次 ， 每次 7 d， 合并提取液 ， 减压回899 Journal of Chinese Medicinal Materials 第 3
11、7 卷第 6 期 2014 年 6 月收甲醇得膏状提取物 200 g。取该提取物 180 g 加适量热水混悬 ， 先依次用石油醚 、CHCl3、EtOAc 萃取3 次 ( 每次用 2 500 mL) ， 再用水饱和正丁醇萃取 3次 ( 每次 2 000 mL) ， 减压浓缩后得正丁醇萃取物 75g。药理实验表明正丁醇萃取物即为南蛇藤叶降血糖有效部位 。取有效部位 65 g， 经 D101 型大孔树脂 ( 30 60 目 ) ， 水充分洗脱后 ， 用甲醇洗脱 ， 减压浓缩甲醇洗脱液得脱糖有效部位 。该脱糖有效部位经聚酰胺柱层柱 ( 60 90 目 ) ， 甲醇 -水系统梯度洗脱 ，同时配合硅胶柱
12、层柱 ( 200 300 目 ， 氯仿 -甲醇体系为洗脱剂 ) 、制备薄层层析和重结晶等分离纯化方法 ， 得到化合物 1( 40 mg) 、2( 25 mg) 、3( 55 mg) 、4( 155 mg) 、5( 48 mg) 、6( 35 mg) 和 7( 140 mg) 。3 结构鉴定化合物 1: 黄色针状结晶 ( MeOH) ， mp 275. 0 276. 5 。ESI-MS m/z: 285. 2 M H。1H-NM( 500 MHz， DMSO-d6) : 12. 45( 1H， s， 5-OH) ， 8. 01( 2H， d， J = 8. 7 Hz， H-2， 6) ， 6.
13、91( 2H， d， J = 8. 7Hz， H-3， 5) ， 6. 42( 1H， d， J = 2. 0 Hz， H-8) ， 6. 21( 1H， J = 2. 0 Hz， H-6) ;13C-NM( 125 MHz， DMSO-d6) : 176. 2( C-4) ， 164. 2( C-7) ， 161. 5( C-9) ， 160. 5( C-4) ， 156. 0 ( C-5) ， 146. 2 ( C-2) ， 135. 9 ( C-3) ，130. 3( C-2， 6) ， 123. 0 ( C-1) ， 116. 3 ( C-3， 5) ，103. 0( C-10) ，
14、98. 7( C-6) ， 93. 5( C-8) 。以上波谱数据与文献7报道对照基本一致 ， 故确定化合物 1 为山柰酚 。化合物 2: 黄色针状结晶 ( MeOH) ， mp 313. 0 314. 5 。ESI-MS m/z: 301. 1 M H。1H-NM( 500 MHz， DMSO-d6) : 12. 47( 1H， s， 5-OH) ， 7. 66( 1H， d， J =1. 9 Hz， H-2) ， 7. 54( 1H， dd， J =8. 6， 1. 9Hz， H-6) ， 6. 89( 1H， d， J =8. 6 Hz， H-5) ， 6. 41( 1H，J =2. 0
15、 Hz， H-8) ， 6. 20( 1H， J = 2. 0 Hz， H-6) ;13C-NM( 125 MHz， DMSO-d6) : 176. 1( C-4) ， 164. 8( C-7) ， 161. 6( C-9) ， 156. 5( C-5) ， 148. 1( C-4) ， 146. 8( C-2) ， 145. 4 ( C-3) ， 136. 1 ( C-3) ， 123. 0 ( C-1) ，120. 3( C-6) ， 116. 0( C-5) ， 115. 6( C-2) ， 104. 0( C-10) ， 98. 5( C-6) ， 93. 7( C-8) 。以上波谱数
16、据与文献7报道对照基本一致 ， 故确定化合物 2 为槲皮素 。化合物 3: 黄色针状结晶 ( MeOH) ， mp 210. 5 212. 0 。ESI-MS m/z: 431. 2 M H。1H-NM( 500 MHz， CD3OD) : 12. 50 ( 1H， s， 5-OH) ， 8. 06( 2H， d， J = 7. 5 Hz， H-2， 6) ， 7. 58( 2H， d， J = 7. 5Hz， H-3， 5) ， 6. 70( 1H， d， J = 2. 0 Hz， H-8) ， 6. 38( 1H， d， J =2. 0 Hz， H-6) ， 5. 50( 1H， d， J
17、 =1. 2 Hz， H-1) ， 3. 95( 1H， br s， H-5) ， 3. 76( 1H， dd， J =9. 2， 4. 0Hz， H-3) ， 3. 55( 1H， m， H-2) ， 3. 41( 1H， t， J = 9. 0Hz， H-4) ， 1. 19( 3H， d， J = 6. 2 Hz， H-6) ;13C-NM( 125 MHz， CD3OD) : 177. 5( C-4) ， 163. 2( C-7) ，161. 2( C-5) ， 160. 8( C-4) ， 157. 8( C-9) ， 149. 2( C-2) ， 137. 8 ( C-3) ， 1
18、30. 9 ( C-2， 6) ， 123. 5 ( C-1) ，116. 3( C-3， 5) ， 106. 3( C-10) ， 100. 5( C-1) ， 99. 9( C-6) ， 95. 3( C-8) ， 73. 6( C-4) ， 72. 1( C-3) ， 71. 7( C-2) ， 71. 2( C-5) ， 18. 1( C-6) 。以上波谱数据与文献8报道对照基本一致 ， 故确定化合物 3 为山柰酚 -7-O-L-鼠李糖苷 。化合物 4: 淡黄色针状结晶 ( MeOH) ， mp 195. 0 196. 5 。ESI-MS m/z: 577. 1 0 M H。1H-NM
19、( 500 MHz， CD3OD) : 12. 48 ( 1H， s， 5-OH) ，7. 75( 1H， d， J = 8. 5 Hz， H-2， 6) ， 6. 88( 1H， d， J =8. 5 Hz， H-3， 5) ， 6. 68( 1H， d， J = 2. 1 Hz， H-8) ，6. 42( 1H， d， J = 2. 1 Hz， H-6) ， 5. 51 ( 1H， br s， H-1) ， 5. 35( 1H， br s， H-1) ， 4. 16( 1H， br s， H-5) ，3. 96( 1H， br s， H-5) ， 3. 75 ( 1H， dd， J = 9
20、. 2， 4. 0Hz， H-3) ， 3. 65 ( 1H， dd， J = 9. 2， 4. 0 Hz， H-3) ，3. 56( 1H， m， H-2) ， 3. 40( 1H， t， J = 9. 0 Hz， H-4) ，3. 25 3. 32( 2H， m， H-2， 4) ， 1. 20( 3H， d， J = 6. 4Hz， H-6) ， 0. 88( 3H， d， J =5. 8 Hz， H-6) ;13C-NM( 125 MHz， CD3OD) : 179. 8( C-4) ， 163. 6( C-7) ，163. 1( C-5) ， 161. 8( C-4) ， 159.
21、9( C-9) ， 158. 1( C-2) ， 136. 5 ( C-3) ， 132. 0 ( C-2， 6) ， 122. 4 ( C-1) ，116. 6( C-3， 5) ， 107. 6( C-10) ， 99. 9( C-6) ， 95. 6( C-8) ， 7-O-ha: 100. 6 ( C-1) ， 73. 1 ( C-4) ， 72. 1 ( C-2) ， 71. 9 ( C-3) ， 71. 7 ( C-5) ， 17. 8 ( C-6) ， 3-O-ha: 103. 5( C-1) ， 73. 5( C-4) ， 72. 2( C-2) ， 71. 8( C-3) ，
22、 71. 5( C-5) ， 18. 1( C-6) ， 。以上波谱数据与文献8报道对照基本一致 ， 故确定化合物 4 为山柰酚 -3， 7-二 -O-L-鼠李糖苷 。化合物 5: 黄色粉末 ( MeOH) ， mp 159. 5 160. 0。ESI-MS m/z: 463. 1 M H。1H-NM( 500MHz， DMSO-d6) : 12. 60( 1H， s， 5-OH) ， 7. 57( 1H，dd， J =8. 5， 2. 5 Hz， H-6) ， 7. 54( 1H， J =2. 4 Hz， H-2) ， 6. 85( 1H， d， J =8. 5 Hz， H-5) ， 6.
23、32( 1H， d， J =1. 8 Hz， H-8) ， 6. 13( 1H， d， J = 1. 8 Hz， H-6) ， 5. 44( 1H， d， J =7. 6 Hz， H-1) ， 4. 40( 1H， d， J =11. 3 Hz，H-6a) ， 4. 20( 1H， dd， J =11. 3， 6. 2 Hz， H-6b) ， 3. 61( 1H， t， J = 6. 1 Hz， H-3) ， 3. 20 ( 3H， m， H-2， 4，5) ;13C-NM( 125 MHz， DMSO-d6) : 177. 5( C-4) ，166. 0( C-7) ， 161. 5( C-
24、5) ， 156. 7( C-9) ， 156. 2( C-2) ， 149. 0( C-4) ， 145. 1( C-3) ， 133. 4( C-3) ， 121. 8( C-1) ， 121. 2( C-6) ， 116. 3( C-5) ， 115. 5( C-2) ，999Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 6 期 2014 年 6 月103. 8( C-10) ， 101. 2 ( C-1) ， 99. 4 ( C-6) ， 94. 1 ( C-8) ， 76. 8( C-3) ， 70. 2( C-4) ， 77. 7(
25、C-5) ， 74. 4( C-2) ， 61. 2( C-6) 。以上波谱数据与文献7报道对照基本一致 ， 故确定化合物 5 为槲皮素 -3-O-D-葡萄糖苷 。化合物 6: 淡黄色片状结晶 ( MeOH) ， mp 182. 5184. 5 。I max( KBr) cm1: 3 400， 2 930， 1656， 1 606， 1 454， 1 346， 1 291， 1 200， 1 165， 1 074， 1058， 1 040， 1 021， 969， 917， 858， 716， 641。ESI-MSm/z: 465. 2 M + H+。1H-NM( 500 MHz， DMSO-
26、d6) : 12. 68( 1H， s， 5-OH) ， 6. 88( 2H， s， H-2， 6) ，6. 36( 1H， d， J =2. 1 Hz， H-6) ， 6. 20( 1H， J =2. 1 Hz，H-8) ， 5. 21( 1H， br s， H-1) ， 3. 76( 1H， br s， H-2) ，3. 56( 1H， dd， J = 9. 4， 2. 9 Hz， H-3) ， 3. 16( 1H， t， J=9. 5 Hz， H-4) ， 3. 98( 1H， br s， H-5) ， 0. 85( 3H， d，J =6. 1 Hz， H-6) ;13C-NM( 125
27、 MHz， DMSO-d6) :178. 2( C-4) ， 164. 7( C-7) ， 161. 9( C-5) ， 158. 0( C-9) ， 156. 8 ( C-2) ， 146. 2 ( C-3， 5) ， 136. 8 ( C-4) ，134. 5( C-3) ， 121. 1( C-1) ， 108. 2( C-2， 6) ， 104. 4( C-10) ， 102. 5( C-1) ， 99. 1( C-6) ， 94. 0( C-8) ， 71. 7( C-4) ， 71. 1( C-3) ， 70. 8( C-2) ， 70. 5( C-5) ， 18. 0( C-6)
28、 。以上波谱数据与文献9报道对照基本一致 ， 故确定化合物 6 为杨梅苷 。化合物 7: 黄色粉末 ( MeOH) ， mp 171. 0 173. 0。ESI-MS m/z: 593. 1 M H。1H-NM( 500MHz， DMSO-d6) : 12. 54( 1H， s， 5-OH) ， 7. 97( 2H，d， J =8. 5 Hz， H-2， 6) ， 6. 89( 2H， d， J =8. 5 Hz， H-3， 5) ， 6. 35( 1H， d， J =1. 8 Hz， H-8) ， 6. 18( 1H， J =1. 8 Hz， H-6) ， 5. 29 ( 1H， d， J
29、= 7. 6 Hz， glc-H-1) ，4. 39( 1H， br s， rha-H-1) ， 0. 99( 3H， J = 6. 0 Hz， rha-H-6) ， 3. 02 3. 90 ( 10H， 芸香糖其余质子 ) ;13C-NM( 125 MHz， DMSO-d6) : 177. 3 ( C-4) ， 166. 5( C-7) ， 161. 4 ( C-5) ， 160. 2 ( C-4) ， 156. 4 ( C-9) ，157. 0( C-2) ， 133. 4( C-3) ， 131. 1( C-2， 6) ， 121. 2( C-1) ， 115. 5( C-3， 5) ，
30、 103. 8( C-10) ， 99. 8( C-6) ，94. 5( C-8) ， 101. 7 ( glc-C-1) ， 76. 8 ( glc-C-3) ， 76. 2( glc-C-5) ， 74. 5( glc-C-2) ， 70. 6( glc-C-4) ， 67. 2( glc-C-6) ， 101. 2( rha-C-1) ， 72. 1( rha-C-4) ， 70. 9( rha-C-3) ， 70. 6( rha-C-2) ， 68. 8( rha-C-5) ， 18. 0( rha-C-6) 。以上波谱数据与文献7报道对照基本一致 ， 故确定化合物为山柰酚 -3-O-
31、芸香糖苷 。参 考 文 献 1 江苏新医学院 . 中药大辞典 M 下册 . 上海 : 上海科学技术出版社 ， 2000: 1563-1564. 2 陈源旺 ， 丁立平 ， 欧阳明安 . 南蛇藤化学成分研究进展 J 亚热带植科学 ， 2007， 36( 1) : 79-84. 3 杨庆伟 ， 刘延庆 ， 戴小军 等 . 南蛇藤对鼠黑色素瘤B16BL6 细胞增殖抑制及凋亡诱导作用研究 J 中药药理与临床 ， 2008， 24( 3) : 61-63. 4 刘惠玲 ， 冯玉静 ， 陈定双 ， 等 . 南蛇藤根皮的化学成分研究 J 中成药 ， 2010， 32( 7) : 1169-1172. 5 陈
32、建国 ， 梅松 ， 付颖 ， 等 . 四氧嘧啶致小鼠高血糖模型的研究 J 浙江省医学科学院学报 ， 2005，( 61) : 53-54. 6 张均田 . 现代药理实验方法 M 北京 : 北京医科大学中国协和医科大学联合出版社 ， 1998: 982. 7 雷军 ， 肖云川 ， 王文静 ， 等 . 糯米藤中黄酮类化学成分研究 J 中国中药杂志 ， 2012， 37( 4) : 478-482. 8 巴寅颖 ， 刘倩颖 ， 石任兵 ， 等 . 鬼箭羽中黄酮类化学成分研究 J 中草药 ， 2012， 43( 2) : 242-246. 9 廖华卫 ， 刘恩桂 ， 王定勇 . 杨梅树皮的化学成分研究
33、 J 中南药学 ， 2006， 4( 3) :檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳檳196-199.本刊加入 中国学术期刊 ( 光盘版 ) 和 中国期刊网 全文数据库的声明为适应我国信息化建设的需要 ， 扩大作者学术交流渠道 ， 本刊已加入 中国学术期刊 ( 光盘版 ) 和 中国期刊网 全文数据库 ， 其作者著作权使用费与本刊稿酬一次性给付 。如作者不同意将文章编入该数据库 ， 请在来稿时声明 ， 本刊将做适当处理 。中国学术期刊 ( 光盘版 ) 和 中国期刊网 全文数据库属 “国家级火炬计划项目 ”， 被国家科技部等五部委评定为 “国家重点新产品 ”， 并被列为 “重中之重 ”项目 ， 荣获国家新闻出版署评定的国家电子出版物最高奖 。0001 Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 6 期 2014 年 6 月
