1、杭州新景生物试剂开发有限公司地址：浙江省杭州市西湖科技经济园西园八路 2 号 H 座 2601邮编：310030 电话：0571-56011203 传真：0571- 仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。 V2013.07Recombinant Taq DNA聚合酶使 用 说 明 书制品货号: DP1001包装剂量: 250 U / 50 L，制品保存: -20 制品说明本品为重组Taq DNA聚合酶，来源于 Thermus aquaticus，大肠杆菌发酵表达、经分离、纯化而获得。它与野生型Taq DNA聚合酶具有相同的基因扩增功能，但突变消除了99%的53外切酶活性，提高了扩增
2、效率。用本制品扩增获得的PCR产物的3端有一个“A”碱基凸出，因此可直接用于“T-A” 克隆过程。 制品内容Pango rTaq（5 U/l） 50 L10PCR Buffer（Mg 2+ Plus） 1 mLdNTP Mixture（各2.5 mM） 800 L6Loading Buffer* 1 mL*电泳时，PCR反应液与6Loading Buffer的比例为5：110PCR Buffer（Mg2+ Plus）的组成 : Tris-HCl（pH8.8） 100 mM KCl 500 mM MgCl2 15 mMNP40 0.8%(V/V) dNTP Mixture: dATP、dCTP
3、、dGTP、dTTP 各 2.5mM混合物， 不用稀释可直接用于PCR反应。 活性定义用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在74，30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。 制品纯度1） 10 U的本酶和0.6 g的-Hind III在74下反应1小时，DNA 的电泳谱带不发生变化。2）10 U的本酶和0.6 g的Supercoiled pBR322 DNA在74下反应1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。 制品用途1） PCR法扩增DNA。 2） DNA序列测定。 PCR反应性能1） 以 DNA为模板，可以很好地扩增 8 kb的DNA片段。2）
4、 以人基因组DNA为模板，可很好地扩增 3.0 kb（p53基因）的DNA 片段。 应用例1.按下列组份配制PCR反应液。 Pango rTaq（5 U/l） 0.25 L10PCR Buffer（Mg2+ Plus） 5 LdNTP Mixture（各2.5 mM） 4 LTemplate DNA 1-5 ng Forward Primer（10 M） 2 LReverse Primer（10 M） 2 L灭菌蒸馏水加至 50 l 2. PCR反应参数预变性(95 3 min.)是常规步骤，PCR循环中的变性通常94/30秒，复性温度根据引物的Tm值调整，通常比引物Tm低24 ，延伸通常72
5、 ，扩增片段2kb 以下，每1分钟/kb，大于 2kb, 2分钟/kb, PCR最佳扩增在25循环时到达。现在的PCR结束前都有一个补全延伸： 72/5 10分钟，最后是短时保存温度: 425.注） PCR反应条件视模板、引物等构成条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。 杭州新景生物试剂开发有限公司地址：浙江省杭州市西湖科技经济园西园八路 2 号 H 座 2601邮编：310030 电话：0571-56011203 传真：0571- 仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。 V2013.07注意事项PCR的反应液请在冰上配制，然后置于 PCR反应仪上进行PCR反应。这种冷启动法可增强PCR扩增的特异性， 减少非特异性扩增，取得更好的PCR结果。
