1、ICS 65.020.20 B22备 案 号 ： 47706-2015 DB32江 苏 省 地 方 标 准DB32/T 2792-2015南粳 9108 原 种 生 产 技 术 规 程Basic Seed Producing Technology of Rice Variety Nanjing 91082015 - 10 - 20 发布 2015 - 12 - 20 实施江 苏 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布DB32/T 2792-2015I前 言为 规 范 南 粳 9108原 种 生 产 技 术 ， 制 定 本 标 准 。本 标 准 按 GB/T 1.12009 标 准 化 工 作
2、导 则 第 1部 分 ： 标 准 的 结 构 和 编 写 编 制 。 本 标 准 由 江 苏 省 农 业 科 学 院 提 出 。本 标 准 起 草 单 位 ： 江 苏 省 农 业 科 学 院 。 本 标 准 主 要 起 草 人 ： 周 丽 慧 、 陈 涛 、 赵 庆 勇 、 姚 姝 、 赵 春 芳 、 赵 凌 、 朱 镇 、 张 亚 东 、 王 才 林 。DB32/T 2792-20151南粳 9108 原种生产技术规程1 范围本 标 准 规 定 了 南 粳 9108原 种 生 产 的 品 种 来 源 和 类 型 、 原 种 生 产 技 术 、 株 行 决 选 技 术 。 本 标 准 适 用
3、于 苏 中 及 宁 镇 扬 丘 陵 地 区 中 上 等 肥 力 条 件 下 南 粳 9108原 种 生 产 。2 规 范 性 引 用 文 件下列文 件对 于文 本的 应用 是必不 可少 的。 凡是 注日 期 的引用 文件 ， 仅 所注 日期 的 版本适 用于 本文 件， 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB/T 3543.1-1995 农 作 物 种 子 检 验 规 程 总则 GB/T 3543.2-1995 农 作 物 种 子 检 验 规 程 扦样 GB/T 3543.3-1995 农 作
4、物 种 子 检 验 规 程 净 度 分 析 GB/T 3543.4-1995 农 作 物 种 子 检 验 规 程 发 芽 试 验GB/T 3543.5-1995 农 作 物 种 子 检 验 规 程 真 实 性 和 品 种 纯 度 鉴 定GB/T 3543.6-1995 农 作 物 种 子 检 验 规 程 水 分 测 定 GB/T 3543.7-1995 农 作 物 种 子 检 验 规 程 其 他 项 目 检 验 GB 4404.l-2008 粮 食 作 物 种 子 禾 谷 类GB/T 17316-2011 水 稻 原 种 生 产 技 术 操 作 规 程DB32/T 79-2007 水 稻 壮
5、秧 与 育 秧 技 术 标 准DB32/T 17622011 稻 米 食 味 品 质 评 价DB32/T 27912015 水 稻 品 种 南 粳 91083 品 种 来 源 和 类 型3.1 来源南粳 9108 原 原 种 （ 育 种 家 ） 种 子 。3.2 类型迟 熟 中 粳 稻 。4 原 种 生 产 技 术4.1 方法采 用 改 良 混 合 选 择 方 法 ， 即 单 株 选 择 、 分 系 比 较 、 混 合 繁 殖 的 三 圃 制 。4.2 单 株 选 择DB32/T 2792-20152选 择 标 准 和 决 选 标 准 应 符 合 DB32/T 27912015 水 稻 品 种
6、 南 粳 9108的 规 定 。4.3 株行圃4.3.1 编号将 上 年 当 选 的 各 单 株 种 子 ， 按 顺 序 编 号 。4.3.2 育秧所有单 株种 子 (包 括对 照种 子) 的浸 种、 催 芽、 播种， 均须分 别在 同 1d 进 行， 应 符合 DB32/T 79-2007的 规 定 。4.3.2.1 播期湿 润 育 秧 5月 10日 5月 15日 播 种 。4.3.2.2 播 种 密 度按 湿 润 育 秧 每 亩 净 秧 板 播 量 20kg 的 密 度 标 准 进 行 控 制 。4.3.2.3 秧龄湿 润 育 秧 秧 龄 30d左 右 。4.3.3 田 间 设 计 和 隔
7、 离 要 求符合 GB/T 17316-2011 的 规 定 ， 空 间 隔 离 距 离 不 少 于 100m， 时 间 隔 离 扬 花 期 要 错 开 15d 以 上 。4.3.4 移栽应 符 合 GB/T 17316-2011 的 规 定 ， 单 株 栽 插 。4.3.5 田 间 管 理 和 记 载应 符 合 GB/T 17316-2011 的 规 定 。4.3.6 淘 汰 及 收 获应 符 合 GB/T 17316-2011 的 规 定 。4.3.7 株 行 决 选株 行 选 择 标 准 应 符 合 DB32/T 27912015 的 规 定 。 收 获 后 的 株 行 按 附 录 A
8、进 行 暗 胚 乳 突 变 基 因 和 香 味 基 因 检 测 ， 淘 汰 不 含 暗 胚 乳 突 变 基 因 和 香 味 基 因 的 株 行 。4.4 株系圃应 符 合 GB/T 17316-2011 的 规 定 。4.5 原种圃应 符 合 GB/T 17316-2011 的 规 定 。DB32/T 2792-201535 储 藏 和 检 验储 藏 和 检 验 按 GB/T 3543.1 7-1995进 行 ， 符 合 GB 4404.1-2008之 规 定 的 原 种 种 子 签 发 合 格 证 书 。4DB32/T 2792-2015附 录 A（ 资 料 性 附 录 ）南粳 9108 暗
9、 胚 乳 突 变 基 因 和 香 米 基 因 的 分 子 检 测 方 法南 粳 9108是 含 有暗 胚 乳突变 基 因 Wx-mq和香 米 基 因 fgr的 水 稻 品种 ， 可 针对 这两 个 基 因进 行 分 子标 记检 测 ， 辅 助 辨 别 品 种 的 真 伪 。A.1 Wx-mq基 因 四 引 物 PCR分 子 标 记 检 测A.1.1 四 引 物 PCR 分 子 标 记 序 列稻 谷 出 苗 后 在 三 叶 期 按 单 株 提 取 基 因 组 DNA， 利 用 四 引 物 PCR 标 记 进 行 分 子 检 测 。 正向外 引 物 （ Wx-mq-O-F）序 列 为 5-ATGT
10、TGTGTTCTTGTGTTCTTTGCAGGC-3， 反向外 引物 （ Wx-mq-O-R）序列 为 5-GTAGATCTTCTCACCGGTCTTTCCCCAA-3， 正向内 引物 （ Wx-mq-I-F） 序列为 5-GGGTGAGGTTTTTCCATTGCTACAATCG-3， 反向内 引 物 （ Wx-mq-I-R）序列为 5-GTCGATGAACACACGGTCGACTCAAT-3。A.2 PCR 反 应 体 系 。20 L PCR 反 应 体 系 包 括 ： DNA ( 10 ng/L) 2.0 L， Primer (4 pmol/L) 2.0 L， 10PCR Buffer (
11、含 MgCl2 ) 2.0 L, dNTP( 2.5 mmol /L) 0.4 L， Taq 酶( 5U /L) 0. 5 L 和 ddH2O 13.1 L。 PCR 反 应 在 MJ Research PTC-200 热 循 环 仪 上 进 行 ， 反 应 程 序 如 下 ： 94 下 预 变 性 5 min， 每 个 循 环 94 下 变 性 30 s, 65 下 退 火 30 s， 72 下 延 伸 1 min， 共 35 个 循 环 ， 最 后 72 下 延 伸 10 min， 4 下 保 存 待 用 。A.1.3 产 物 分 析反 应 产 物 在 质 量 比 浓 度 为 1.5%的
12、琼 脂 糖 凝 胶 上 电 泳 ， 经 溴 化 乙 锭 染 色 并 于 凝 胶 成 像 系 统 下 观 察 分 析 。 利 用 Wx-mq 基 因 四 引 物 分 子 标 记 扩 增 水 稻 品 种 的 基 因 组 DNA， 南 粳 9108 标 准 稻 谷 能 同 时 扩 增 出 439bp 和 292bp 的 DNA 条 带 ， 而 非 南 粳 9108 标 准 稻 谷 则 同 时 扩 增 出 439bp 和 200bp 或 同 时 存 在 439bp、292bp 和 200bp 的 DNA 条 带 。2000 bpM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 101000 bp750 bp50
13、0 bp250 bp100 bp439 bp292 bp200 bp（ M： 分子 量标 准； 1、2 、5、7 、8 、9、 10为 南粳 9108稻 谷标 准带 型， 3、4 、 6为非 标准 带型。 ）A.2 香 米 基 因 fgr 的 分 子 标 记 检 测A.2.1 fgr 标 记 序 列将 稻 谷 进 行 幼 苗 DNA 提 取 ， 利 用 InDel 标 记 进 行 分 子 检 测 。 正 向 引 物 （ InDel-E2-F） 序 列 为 5-GGGAGGCGCTGAAGAGGA-3， 反 向 引 物 序 列 （ InDel-E2-R） 序 列 为 5-GGGTAGTCACCA
14、CCCTACCTTG-3。A.2.2 PCR 反 应 体 系 。20 L PCR 反 应 体 系 包 括 ： DNA ( 10 ng/L) 2.0 L， Primer (4 pmol/L) 2.0 L， 10PCR Buffer (含 MgCl2 ) 2.0 L, dNTP( 2.5 mmol /L) 0.4 L， Taq 酶( 5U /L) 0. 5 L 和 ddH2O 13.1 L。 PCR 反 应 在 MJ5DB32/T 2792-2015Research PTC-200 热 循 环 仪 上 进 行 ， 反 应 程 序 如 下 ： 94 下 预 变 性 5 min， 每 个 循 环 94
15、 下 变 性 30s， 55 下 退 火 30 s， 72 下 延 伸 1 min， 共 35 个 循 环 ， 最 后 72 下 延 伸 10 min, 4 下 保 存 待 用 。A.2.3 产 物 分 析反 应 产 物 在 8%的 非 变 性 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 上 电 泳 ， 经 硝 酸 银 染 色 并 于 凝 胶 成 像 系 统 下 观 察 分 析 。 利 用 fgr基 因 InDel分 子 标 记 扩 增 水 稻 品 种 的 基 因 组 DNA， 南 粳 9108标 准 稻 谷 能 扩 增 出 100 bp的 DNA条 带 ， 而 非 南 粳 9108标 准 稻 谷 则 扩 增 出 107 bp或 同 时 具 有 100 bp和 107 bp的 带 型 。M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10150 bp100 bp107 bp100 bp50 bp（ M： 分子 量标 准； 1、2 、3、4 、5 、6、 9、1 0为 南 粳9108 稻谷 标准 带型 ， 7、 8为非 标准 带型。 ）
