1、论 著文 章 编 号 : 1005 - 2224 (2007) 03 - 0192 - 04脑 脊 液 细 菌 16S rRNA荧 光 定 量 PCR快 速 诊 断 儿 童 化 脓 性 脑 膜 炎杨 祖 钦 1 ,尚 世 强 2a ,吴 亦 栋 2a ,杜 立 中 2b作 者 单 位 : 1. 温 州 医 学 院 附 属 育 英 儿 童 医 院 新 生 儿 科 ,浙 江 温州 325027; 2. 浙 江 大 学 医 学 院 附 属 儿 童 医 院 a中 心 实 验 室 b新生 儿 科 ,浙 江 杭 州 310003通 讯 作 者 :尚 世 强E2mail: shangsq33mail. hz
2、. zj. cn【 摘 要 】 目 的 探 讨 儿 童 化 脓 性 脑 膜 炎 (化 脑 )新 的 快 速 诊 断 方 法 。 方 法 2003208 2005212采 用 16SrRNA荧 光 定 量 法 对 浙 江 大 学 儿 童 医 院 49例 临 床 疑 似 化 脑 患 儿 脑 脊 液 (CSF)的 细 菌 DNA进 行 测 定 ;监 测 化 脑 患 儿 脑脊 液 细 菌 DNA拷 贝 数 ,同 期 进 行 CSF细 菌 培 养 的 对 照 。 结 果 (1)荧 光 定 量 PCR ( FQ2PCR)检 测 49份 脑 脊 液 标本 发 现 17份 阳 性 ,阳 性 率 为 3417%
3、 (17 /49) ,明 显 高 于 脑 脊 液 培 养 的 阳 性 率 1012% (5 /49) ,差 异 具 有 显 著 性 ( P 0101)。 (2)对 17份 FQ2PCR阳 性 标 本 进 一 步 测 定 细 菌 DNA的 拷 贝 数 ,发 现 患 儿 病 情 与 其 DNA拷 贝 数 呈 正 相关 ,与 其 Ct值 (指 每 个 反 应 管 内 的 荧 光 信 号 到 达 设 定 的 阈 值 时 所 经 历 的 循 环 数 )呈 负 相 关 , Ct值 越 低 ,脑 脊 液 细菌 DNA拷 贝 数 越 高 ,患 儿 的 预 后 越 差 。 (3) FQ2PCR、 CSF细 菌
4、培 养 同 时 阳 性 的 仅 为 5例 。 (4)对 2例 脑 脊 液 FQ2PCR的 产 物 测 序 , Ct值 1719的 测 序 提 示 为 大 肠 埃 希 菌 ,符 合 CSF细 菌 培 养 结 果 ; Ct值 3118的 ,测 序 未 果 。 结 论 荧光 定 量 PCR特 异 性 强 、 敏 感 性 高 ,需 标 本 量 少 ,是 早 期 快 速 诊 断 儿 童 化 脑 的 可 靠 方 法 ,具 有 较 大 的 应 用 价 值 。【 关 键 词 】 荧 光 定 量 聚 合 酶 链 反 应 ;化 脓 性 脑 膜 炎 ;脑 脊 液中 图 分 类 号 : R72 文 献 标 志 码 :
5、 AA rap id d iagnosis of purulen t m en ing itis in ch ildren by 16S rRNA FQ2PCR in CSF. YANG Zu2qin, SHANGShi2qiang, WU Yi2dong, et al. Yu Ying Childrens Hospital A ffiliated to W enzhou M edical College, W enzhou 325027, ChinaAbstract O bjective To exp lore a new technique of rap id diagnosis of p
6、urulent meningitis in children. M ethods Ce2rebrosp inal fluid ( CSF) specimens from 49 cases of suspected purulent meningitis were detected by 16S rRNA FQ2 PCRin the Children Hosp italAffiliated to Zhejiang University from August, 2003 to December, 2005. The copy numbers of bac2terial DNA in CSF we
7、re detected, and the bacterial cultures of CSF were done as controls at the same time. Results (1)Of the 49 cases, 17 were positive by FQ2 PCR, the positive rate (3417% ) (17 /49) was significantly higher than that ofCSF culture 1012% (5 /49) ( P 0101). (2) The copy numbers of bacterial DNA in CSF w
8、ere determ ined among theseventeen FQ2 PCR positive specimens, and they were found to have positive correlation with the state of illness in chil2dren; the number of Ct found negative correlation with the illness. The lower the Ct numbers, the higher the DNA copynumbers, and the p rognosis of childr
9、en would be worse. (3) Of the 49 samp les, only 5 caseswere both positive by FQ2PCRand routing bacterial culture of CSF. (4) Two p roducts of FQ2PCR in CSF were sequenced. Bacterium coli were shown inthe sequence result of Ct 1719; it corresponded with the result of CSF culture. Sequencing failed in
10、 Ct 3118. ConclusionFQ2PCR with higher specificity and sensitivity, demanding less CSF, is rap id and reliable for diagnosing purulent men2ingitis in children. So it has considerable value of app lication.Keywords Fluorescence quantitative polymerase chain reaction; PurulentMeningitis; CSF儿 童 化 脓 性
11、脑 膜 炎 (化 脑 )在 确 诊 前 常 有 不 正 规 的 抗生 素 治 疗 使 脑 脊 液 改 变 不 典 型 ,给 早 期 诊 断 带 来 一 定 的 困难 。 为 快 速 、 可 靠 地 诊 断 化 脑 ,我 们 对 浙 江 大 学 医 学 院 附 属儿 童 医 院 疑 似 化 脑 的 49例 患 儿 进 行 脑 脊 液 细 菌 16SrRNA基 因 荧 光 定 量 PCR测 定 ,监 测 化 脑 患 儿 脑 脊 液 细 菌 DNA拷 贝 数 ,同 期 进 行 CSF细 菌 培 养 的 对 照 ,效 果 较 好 ,现 报 道如 下 。1 对 象1. 1 标 准 菌 株 选 择 10种
12、 菌 属 12个 菌 株 为 标 准 菌 株 ,其中 革 兰 阳 性 菌 株 6株 ,革 兰 阴 性 菌 株 6株 。 选 择 17个 菌 属291 中 国 实 用 儿 科 杂 志 2007年 3月 第 22卷 第 3期23种 菌 株 为 临 床 培 养 菌 株 ,其 中 革 兰 阳 性 菌 株 12株 ,革 兰阴 性 菌 株 11株 (表 1、 2)。 标 准 菌 株 由 浙 江 省 临 床 检 验 中心 及 军 事 医 学 科 学 院 微 生 物 、 流 行 病 学 研 究 室 提 供 。1. 2 2003208 2005212浙 大 附 属 儿 童 医 院 新 生 儿 、 重 症 监护
13、室 ( ICU)、 15综 合 病 区 临 床 拟 诊 为 化 脓 性 脑 膜 炎 (均 有化 脑 的 易 感 因 素 和 临 床 表 现 1 )的 住 院 患 儿 (年 龄 1 30d24例 , 1 3个 月 10例 , 4个 月 至 1岁 5例 , 2 3岁 3例 ,4 8岁 5例 , 9 10岁 1例 , 11 13岁 1例 )共 49例 ,每 例均 抽 取 脑 脊 液 2mL,其 中 1mL做 脑 脊 液 细 菌 培 养 , 1mL做细 菌 DNA荧 光 定 量 测 定 。2 方 法2. 1 细 菌 实 时 荧 光 定 量 PCR2. 1. 1 仪 器 与 试 剂 PE25700型 荧
14、 光 定 量 PCR分 析 仪 ,SIGMA1215K低 温 高 速 离 心 机 ; dNTP, Taq酶 购 自 Takara公司 。2. 1. 2 通 用 引 物 和 Taqman探 针 设 计 从 Genbank中 获 得各 种 不 同 细 菌 的 16S rRNA基 因 序 列 ,应 用 MegA lign软 件分 析 其 基 因 序 列 ,根 据 引 物 和 探 针 的 设 计 原 则 ,在 这 些 细 菌保 守 区 域 筛 选 到 一 对 具 有 相 同 碱 基 序 列 的 通 用 引 物 ,并 在该 引 物 的 扩 增 的 区 域 内 设 定 一 条 通 用 的 荧 光 探 针
15、。引 物 和 探 针 的 序 列 :上 游 引 物 TGTGTAGCGGTGAAAT2GCG 6902708; 下 游 引 物 CATCGTTTACGGCGTGGAC 8292811;通 用 探 针 (UnProbe) TCTAATCCTGTTTGATCCCCACG8002778。2. 1. 3 实 时 荧 光 定 量 PCR反 应 离 心 弃 其 上 清 液 , Ep2pendorf管 底 部 见 白 色 DNA 沉 淀 , 加 入 50 L 裂 解 液(10mmol/L Tri2HCl pH 716, 5mmol/L EDTA, 015% SDS) ,煮沸 10m in,低 温 离 心 ,
16、抽 取 上 清 液 4 L 作 为 反 应 模 板 ,在AB I 5700检 测 仪 ,按 下 列 程 序 进 行 PCR反 应 。2. 1. 4 PCR 反 应 程 序 94 预 变 性 4m in后 , 94 20 s、60 60 s为 一 循 环 ,共 循 环 40次 。 每 次 PCR循 环 均 设 阳 性和 空 白 对 照 。 阳 性 对 照 为 大 肠 埃 希 菌 ATCC11775和 金 葡菌 ATCC25923;空 白 对 照 为 不 加 DNA模 板 。 同 时 设 置 4个标 准 滴 度 质 粒 作 为 阳 模 ,拷 贝 / L分 别 为 103、 104、 105、 10
17、6。2. 2 脑 脊 液 细 菌 培 养 使 用 抗 生 素 之 前 抽 取 脑 脊 液 1mL,注 入 含 血 液 增 菌 液 20mL的 培 养 瓶 ,混 匀 后 放 入 隔 水 式 恒温 培 养 箱 , 3515 维 持 , 3d后 置 于 血 平 板 和 巧 克 力 平 板 上做 细 菌 培 养 , 24h后 观 察 有 无 细 菌 生 长 ,采 用 V ITEK260系统 鉴 定 细 菌 。 培 养 瓶 、 培 养 仪 及 细 菌 鉴 定 系 统 均 购 自 法 国生 物 2梅 里 埃 公 司 。2. 3 统 计 学 处 理 SPSS1115软 件 包 对 计 数 资 料 进 行 2
18、检 验 , P 0101为 差 异 有 非 常 显 著 意 义 。2. 4 CSF细 菌 DNA的 PCR产 物 序 列 测 定 抽 取 2份 CSF细 菌 DNA的 PCR产 物 40 L,上 海 英 骏 生 物 技 术 有 限 公 司完 成 测 定 。3 结 果3. 1 16S rRNA基 因 FQ2PCR扩 增 结 果 及 引 物 的 特 异 性 标 准 菌 株 与 临 床 培 养 菌 株 经 FQ2PCRUnProbe的 检 测 结 果均 阳 性 (表 1, 2) ,其 Ct值 (指 每 个 反 应 管 内 的 荧 光 信 号 到达 设 定 的 阈 值 时 所 经 历 的 循 环 数
19、)在 14124 25108之 间 。对 照 组 巨 细 胞 病 毒 、 EB病 毒 、 乙 肝 病 毒 、 人 基 因 组 DNA等检 测 均 阴 性 。 即 16S rRNA基 因 FQ2PCR对 细 菌 有 高 度 的特 异 性 ,与 人 基 因 、 真 菌 或 病 毒 之 间 无 交 叉 反 应 。3. 2 16S rRNA基 因 荧 光 定 量 PCR的 敏 感 性 在 100 107拷 贝 / L范 围 内 ,荧 光 定 量 Rn vs Cycles曲 线 所 测 的 Ct值依 次 递 增 ,最 低 可 以 检 测 到 10个 拷 贝 数 ,即 相 当 于 2个 细菌 , Ct值
20、为 3812;空 白 对 照 阴 性 ,其 所 测 Ct值 均 为 40。3. 3 脑 脊 液 FQ2PCR与 细 菌 培 养 的 检 测 取 baseline为0102, Ct值 小 于 35为 FQ2PCR阳 性 ,结 果 FQ2PCR阳 性 为17例 ,阳 性 率 3417% (17 /49) ,而 脑 脊 液 培 养 阳 性 为 5例 ,阳 性 率 仅 1012% (5 /49) ,前 者 明 显 高 于 后 者 。 用 配 对 计 数资 料 2 检 验 对 FQ2PCR 与 CSF培 养 结 果 相 比 较 , 2 =101481, P = 01005, P 0101,差 异 有 非
21、 常 显 著 意 义 。 其 中5例 CSF培 养 阳 性 的 ,其 对 应 FQ2PCR结 果 均 阳 性 ;另 12例FQ2PCR阳 性 的 ,其 CSF细 菌 培 养 均 阴 性 ,但 结 合 临 床 症状 、 外 周 血 常 规 和 脑 脊 液 常 规 ,最 后 确 诊 为 临 床 化 脑 ;在 剩余 32例 FQ2PCR阴 性 中 ,无 一 例 CSF细 菌 培 养 阳 性 。3. 4 FQ2PCR的 Ct值 、 拷 贝 数 的 比 较 细 菌 DNA的 拷 贝数 、 Ct值 存 在 差 异 , Ct值 越 高 ,对 应 细 菌 DNA拷 贝 数 越 低 ,两 者 之 间 呈 负 相
22、 关 关 系 (表 3)。表 1 UnProbe检 测 革 兰 阳 性 菌 结 果革 兰 阳 性 菌 株 UnProbe UnProbe Ct金 黄 色 葡 萄 球 菌 1) + 17. 28表 皮 葡 萄 球 菌 1) + 20. 43溶 血 葡 萄 球 菌 1) + 19. 62肺 炎 链 球 菌 1) + 22. 15枯 草 杆 菌 1) + 15. 98藤 黄 微 球 菌 1) + 18. 26金 黄 色 葡 萄 球 菌 + 15. 68表 皮 葡 萄 球 菌 + 19. 68溶 血 葡 萄 球 菌 + 20. 28人 葡 萄 球 菌 + 23. 78腐 生 葡 萄 球 菌 + 23.
23、 09肺 炎 链 球 菌 + 20. 42溶 血 性 链 球 菌 + 23. 06无 乳 链 球 菌 + 17. 59产 单 核 李 斯 特 菌 + 14. 58类 白 喉 棒 状 杆 菌 + 16. 21痤 疮 丙 酸 杆 菌 + 19. 26结 核 杆 菌 + 23. 47注 : 1)为 标 准 菌 株391中 国 实 用 儿 科 杂 志 2007年 3月 第 22卷 第 3期表 2 UnProbe检 测 检 测 革 兰 阴 性 菌 结 果革 兰 阴 性 菌 株 UnProbe UnProbe Ct大 肠 埃 希 菌 1) + 14. 24肺 炎 克 雷 伯 菌 1) + 17. 85产
24、气 肠 杆 菌 1) + 14. 95绿 脓 杆 菌 1) + 22. 75鲍 氏 志 贺 菌 1) + 17. 26黏 质 沙 雷 菌 1) + 21. 58大 肠 埃 希 菌 + 16. 58肺 炎 克 雷 伯 菌 + 18. 7阴 沟 肠 杆 菌 + 22. 06流 感 嗜 血 杆 菌 + 25. 08脑 膜 炎 球 菌 + 22. 09脆 弱 拟 杆 菌 + 17. 26铜 绿 色 假 单 胞 菌 + 17. 24普 通 变 形 杆 菌 + 19. 58醋 酸 钙 不 动 杆 菌 + 18. 57费 劳 地 枸 橼 酸 杆 菌 + 21. 08鼠 伤 寒 沙 门 菌 + 23. 06注
25、 : 1)为 标 准 菌 株 ; Ct值 小 于 40的 为 阳 性 , Ct值 为 40为 阴 性 ,baseline的 基 线 为 0102表 3 FQ2PCR阳 性 病 例 CSF中 细 菌DNA拷 贝 数 与 对 应 Ct值编 号 FQ2PCR 细 菌 培 养 DNA拷 贝 数 ( copy/ L) Ct值1 + 肺 炎 克 雷 伯 菌 7. 12 106 18. 52 + 大 肠 埃 希 菌 8. 32 104 25. 83 + 大 肠 埃 希 菌 3. 16 103 28. 94 + 大 肠 埃 希 菌 3. 78 104 26. 55 + 大 肠 埃 希 菌 2. 56 107
26、17. 96 + - 7. 11 102 32. 67 + - 5. 56 102 33. 18 + - 9. 37 101 34. 39 + - 4. 22 102 33. 810 + - 4. 81 102 32. 211 + - 6. 63 102 33. 512 + - 1. 31 102 31. 813 + - 5. 01 102 30. 414 + - 7. 11 102 32. 615 + - 1. 89 102 34. 216 + - 2. 76 102 31. 917 + - 8. 65 102 32. 33. 5 CSF荧 光 定 量 与 测 序 的 对 照 1份 Ct值
27、低 ,为 1719,其 CSF细 菌 培 养 阳 性 ,测 序 显 示 为 大 肠 埃 希 菌 序 列 ,支 持其 FQ2PCR Ct值 ,符 合 CSF细 菌 培 养 大 肠 埃 希 菌 阳 性 的 报告 ;另 1例 测 序 未 果 ,其 Ct值 为 3118,提 示 细 菌 DNA拷 贝数 较 低 ,测 序 未 能 完 成 ,与 其 Ct值 高 、 CSF细 菌 培 养 阴 性 均相 符 合 。4 讨 论化 脑 病 原 学 诊 断 的 分 子 生 物 学 方 法 近 几 年 得 到 较 快 发展 。 如 Shang等 2 2001年 采 用 细 菌 16SrRNA基 因 PCR与反 向 杂
28、 交 技 术 ; 2003年 运 用 细 菌 16S223S rRNA基 因 特 异DNA图 谱 3 , 2004年 开 展 16S rRNA基 因 PCR与 基 因 芯 片杂 交 技 术 研 究 426 , Feuillet等 7 采 用 16S rRNA基 因 序 列 分析 研 究 等 均 取 得 一 定 的 成 果 。16S rRNA基 因 是 细 菌 染 色 体 上 编 码 RNA 相 对 应 的DNA序 列 ,存 在 于 所 有 细 菌 的 染 色 体 基 因 中 ,也 存 在 于 衣原 体 、 立 克 次 体 、 支 原 体 等 原 核 生 物 中 ,但 不 存 在 于 非 原 核
29、生 物 如 病 毒 、 真 菌 等 体 内 。 实 时 荧 光 定 量 PCR技 术 已 广 泛用 于 基 因 表 达 研 究 ,病 原 体 检 测 等 诸 多 领 域 8 。 其 基 本 原理 :利 用 Taq酶 的 5 23外 切 酶 核 酸 活 性 ,在 普 通 引 物 5端和 3端 中 添 加 一 条 荧 光 双 标 记 探 针 ,分 别 标 记 上 荧 光 报 告基 团 (R)和 淬 灭 基 团 (Q )。 当 这 条 探 针 保 持 完 整 时 , R基团 的 荧 光 信 号 被 Q基 团 抑 制 ,一 旦 探 针 被 切 断 ,抑 制 作 用消 失 , R基 团 的 荧 光 信
30、号 就 可 以 被 检 测 到 。FQ2PCR检 测 细 菌 不 仅 检 测 耗 时 少 ,整 个 过 程 可 在 23h完 成 ,同 时 可 准 确 灵 敏 地 反 映 病 原 体 感 染 数 量 ,对 细 菌感 染 的 诊 断 和 疗 效 的 观 察 具 有 重 要 的 指 导 作 用 。 对 49份化 脑 标 本 对 照 培 养 的 结 果 表 明 : FQ2PCR 检 测 阳 性 率 为3417% (17 /49) , CSF细 菌 培 养 阳 性 率 为 1012% (5 /49) ,前者 明 显 高 于 后 者 , P 0101差 异 有 非 常 显 著 意 义 。本 实 验 中
31、FQ2PCR阳 性 17例 中 FQ2PCR与 CSF细 菌培 养 同 时 阳 性 的 5例 ,其 余 12例 脑 脊 液 培 养 均 阴 性 ,这 12例 培 养 阴 性 的 原 因 可 能 为 : ( 1) CSF细 菌 DNA拷 贝 数 低 ;(2)可 能 为 抗 生 素 的 使 用 抑 制 了 细 菌 生 长 。 ( 3)细 菌 培 养只 能 检 测 活 细 菌 ,不 能 检 测 死 细 菌 ;而 FQ2PCR均 能 检 测 。对 FQ2PCR产 物 测 序 ,证 实 测 序 结 果 与 FQ2PCR、 CSF细 菌培 养 结 果 均 一 致 。 由 于 FQ2PCR可 以 检 测 C
32、SF的 细 菌 DNA拷 贝 数 ,对 照 各 自 Ct值 与 其 对 应 的 拷 贝 数 ,可 以 发 现 二 者呈 负 相 关 关 系 , Ct值 越 低 ,细 菌 DNA拷 贝 数 越 高 ,其 对 患儿 脑 损 伤 的 程 度 越 重 ,检 测 CSF细 菌 DNA拷 贝 数 可 以 成 为判 断 化 脑 病 情 的 指 标 之 一 。16S rRNA基 因 荧 光 定 量 PCR检 测 可 疑 化 脑 患 儿 CSF细 菌 DNA不 需 要 细 胞 培 养 等 技 术 操 作 ,大 大 缩 短 了 诊 断 时间 ;有 效 解 决 了 PCR污 染 问 题 ,终 点 测 量 定 量 准
33、 确 。 此 项技 术 为 儿 童 化 脓 性 脑 膜 炎 提 供 了 快 速 、 可 靠 的 病 原 学 诊 断依 据 ,具 有 较 大 的 临 床 应 用 价 值 。参 考 文 献 1 吴 希 如 ,化 脓 性 脑 膜 炎 M . / /王 慕 荻 . 儿 科 学 . 5版 . 北 京 :人491 中 国 实 用 儿 科 杂 志 2007年 3月 第 22卷 第 3期民 卫 生 出 版 社 , 2002: 3952396. 2 Shang S, Chen Z, Yu X. Detection of bacterial DNA by PCR andreverse hybridization
34、in the 16S rRNA gene with particular refer2ence to neonatal sep ticem ia J . Acta Paediatr, 2001, 90 ( 2 ) :1792183. 3 Shang SQ, FU JF, Dong G, et al. Establishment and analysis ofspecific DNA patterns in 16S 223S rRNA gene spacer regions fordifferent bacteria J . Chin Med J, 2003, 116 (1) : 129 213
35、3. 4 Shang S, Chen G,W u Y, et al. Rap id diagnosis of bacterial sep siswith PCR amp lification and m icroarray hybridization in 16S rRNAgene J . Pediatr Res. 2005, 58 (1) : 1432148. 5 童 美 琴 ,尚 世 强 ,吴 亦 栋 ,等 . 16S rRNA基 因 PCR加 基 因 芯 片杂 交 快 速 诊 断 新 生 儿 败 血 症 J . 中 华 儿 科 杂 志 , 2004, 42(9) : 6632667. 6
36、 郑 季 彦 ,尚 世 强 ,吴 亦 栋 ,等 . 16SrRNA基 因 芯 片 诊 断 新 生 儿败 血 症 J . 中 华 传 染 病 杂 志 , 2005, 23 (3) : 1872190. 7 Feuillet L, Carvajal J, Sudre I, et al. First isolation of bacteroidesthetaiotaom icron from a patient with a cholesteatoma and experi2encing meningitis J . J Clin M icrobiol, 2005, 43 ( 3 ) : 14672
37、1469. 8 Pas SD, Fries E, DeMan RA, et al. Development of a quantitativereal2time detection assay for hepatitis B virus DNA and compari2son with two commercial assays J . J Clin M icrobiol, 2000, 38(8) : 289722901.(2006 - 09 - 02收 稿 2006 - 12 - 04修 回 )(本 文 编 辑 :邓 文 军 )短 篇 报 道儿 童 交 替 性 偏 瘫 1例 报 告马 艳 艳
38、作 者 单 位 :青 海 大 学 附 属 医 院 儿 科 ,青 海 西 宁 810001E2mail: xnmayanyan126. com患 儿 男 , 1岁 8个 月 , 因 阵 发 性 双 眼 斜 视 伴 肢 体 无 力10个 月 ,间 断 抽 风 3个 月 于 2002208212就 诊 。 患 儿 于 10个 月 前 无 明 显 诱 因 在 玩 耍 时 出 现 双 眼 向 右 侧 斜 视 ,口 角 向右 偏 ,表 情 痛 苦 ,持 续 约 10m in。 8个 月 前 同 样 在 清 醒 状 态下 ,出 现 左 侧 肢 体 无 力 ,不 能 抓 物 及 行 走 ,伴 双 眼 斜 视
39、和 口角 歪 斜 ,持 续 约 1h缓 解 。 之 后 患 儿 反 复 发 作 肢 体 无 力 ,有时 表 现 为 单 侧 肢 体 ,有 时 双 侧 肢 体 交 替 出 现 ,上 肢 较 下 肢重 ,有 时 伴 有 斜 视 、 意 识 模 糊 和 吞 咽 困 难 ,每 次 持 续 约 12h,间 隔 3 7d复 发 ,睡 眠 时 无 发 作 。 3个 月 前 ,患 儿 突 然出 现 抽 风 ,表 现 为 双 眼 凝 视 ,口 吐 白 沫 ,四 肢 伸 直 ,约 5m in缓 解 ,并 间 隔 2 5d发 作 1次 。 到 当 地 医 院 就 诊 ,查 头 颅CT、 核 磁 共 振 均 未 发
40、现 异 常 ,曾 先 后 按 佝 偻 病 和 原 发 性 癫疒 间 给 予 维 生 素 D3、 钙 剂 和 丙 戊 酸 钠 等 治 疗 ,效 果 不 佳 。 此次 症 状 再 次 发 作 ,出 现 左 侧 肢 体 无 力 ,前 来 就 诊 。 患 儿 智 力发 育 落 后 。 父 母 亲 非 近 亲 结 婚 ,家 族 中 无 类 似 病 史 ,无 遗 传代 谢 病 史 及 偏 头 痛 史 。 查 体 : T 37 ,神 志 清 ,精 神 差 ,心 、肺 、 腹 查 体 未 见 异 常 。 神 经 系 统 查 :颅 神 经 检 查 未 见 异 常 。左 侧 肌 力 3级 ,肌 张 力 略 低 ,
41、病 理 征 阴 性 。 查 血 沉 、 血 常 规 、血 清 电 解 质 、 乳 酸 、 丙 酮 酸 、 甲 状 旁 腺 功 能 测 定 、 脑 脊 液 检查 、 钩 端 螺 旋 体 乳 胶 凝 集 试 验 均 无 异 常 。 查 头 颅 磁 共 振 血管 成 像 (MRA)、 数 字 减 影 动 脉 造 影 (DSA )及 多 次 复 查 动 态脑 电 图 监 测 ,均 未 见 异 常 结 果 。 临 床 诊 断 为 儿 童 交 替 性 偏瘫 (AHC) ,给 予 氟 桂 利 嗪 2. 5mg,每 日 2次 口 服 ,症 状 明 显减 轻 ,随 访 半 年 无 复 发 。讨 论 :儿 童 交
42、 替 性 偏 瘫 (AHC)是 一 种 少 见 病 。 此 病 病因 迄 今 尚 不 清 楚 ,目 前 多 数 学 者 认 为 可 能 与 遗 传 因 素 有 关 。AHC的 诊 断 标 准 是 由 A icardi 1 1987年 提 出 : (1)起 病年 龄 小 于 18个 月 ; (2)反 复 发 作 、 程 度 不 等 的 偏 瘫 ,累 及 身体 的 任 何 一 侧 或 双 侧 ; (3)偏 瘫 发 作 间 期 或 发 作 时 常 伴 其他 发 作 性 症 状 ,如 瘫 痪 侧 肢 体 强 直 、 肌 张 力 不 全 性 姿 势 异常 、 舞 蹈 手 足 徐 动 、 眼 球 震 颤
43、、 眼 球 活 动 异 常 及 植 物 神 经 功能 紊 乱 ; (4)进 行 性 智 力 障 碍 和 神 经 机 能 缺 陷 。 本 例 患 儿开 始 有 发 作 性 眼 及 姿 势 异 常 ,曾 被 诊 断 为 低 钙 性 抽 搐 ,给 钙剂 治 疗 无 效 。 之 后 又 诊 断 为 癫 疒 间 合 并 Todd麻 痹 ,抗 癫 疒 间 治疗 无 效 后 又 想 到 脑 血 管 病 ,行 MR I、 MRA检 查 无 异 常 ,不 支持 脑 血 管 病 后 ,一 直 长 期 抗 癫 疒 间 治 疗 ,直 到 此 次 就 诊 才 做 出诊 断 ,故 在 诊 断 此 病 时 应 注 意 与
44、下 列 疾 病 鉴 别 : (1)脑 血 管疾 病 ; (2)癫 疒 间 ; (3)线 粒 体 脑 病 2乳 酸 酸 血 症 2卒 中 样 发 作 综合 征 (MELAS) ; (4)遗 传 代 谢 性 疾 病 。氟 桂 利 嗪 是 一 种 平 滑 肌 松 弛 剂 ,是 非 选 择 性 的 电 压 依赖 性 钙 通 道 阻 断 剂 ,其 治 疗 AHC的 机 制 尚 不 清 楚 ,可 能 与其 阻 断 钙 离 子 通 道 有 关 ,有 待 于 进 一 步 研 究 。参 考 文 献 1 Am inian A, Strashun A, Rose A. A lternating hem ip legia ofchildhood: studies of regional cerebral blood flow using99mTchexamethylp ropylene am ine oxime single2photon em issioncomputed tomography J . Ann Neurol, 1993. 33: 43247.(2006 - 11 - 10收 稿 2007 - 01 - 15修 回 )(本 文 编 辑 :邓 文 军 )591中 国 实 用 儿 科 杂 志 2007年 3月 第 22卷 第 3期
