1、板蓝根种子生产技术规程地方标准编 制 说 明1、立项背景板蓝根为十字花科植物菘蓝（ Isatis indigotica Fort.）的干燥根（中国药典2010 版） ，我国有着悠久的栽培历史，主产于河北和安徽等省，是 40 种常用大宗药材品种之一。在全国范围内每年药材消耗量一直居于前几位，其药用价值不仅在于治病，更重要的是应用于防病，如 1987 年上海突发流行性传染性肝炎、2003 年“非典” 、2005 年的“禽流感” 、2008 年的小儿手足口病、2010 年的“甲流”等疫情时，板蓝根是首选药材之一。由于板蓝根抗病毒效果明显，随着板蓝根冲剂以及各种中成药、针剂的大量应用，板蓝根市场需求进
2、一步增加,近几年来不断有企业推出以板蓝根为原料的生产的新药品，如板蓝根冲剂、板蓝根含片、板蓝根注射液、板蓝根解毒注射液等。此外，随着我国养殖业的蓬勃发展，牲畜及家禽各种疾病频频发生，如近年来频发的禽流感、口蹄疫等病。因此，板蓝根在兽药用量也不小。目前板蓝根市场年需求量应在 10 万吨左右，特别发生“非典” 、 “禽流感” 、甲型流感”以来，市场需求越来越大，呈逐年增加趋势，按平均 250 公斤/亩的产量计算，每年板蓝根种植面积应在 40 万亩左右。种植一年生板蓝根收益快，亩产值可达3000 元左右，且投入成本低，每亩种子费用仅 200 元左右，栽培技术易于被老百姓掌握，能规模化发展，这对贵州贫
3、困山区农业产业结构调整、增加农民收入，脱贫致富意义显著。然而目前贵州市场流通的板蓝根种子净度、纯度、真实性、含水量及发芽率等均存在不同程度的差异，直接导致老百性种植的板蓝根用种量大、出现不同程度退化、产量、有效成分含量不稳定甚至药用价值消失的情况，且至今为止，尚未见开展贵州省板蓝根种子生产技术规程研究与制定的相关报道。2012 年至 2014 年项目组在贵阳、松桃、安龙等地开展了板蓝根种子质量标准、栽培技术、优良品种筛选等研究，取得了良好的试验结果，为此，整理 2012 年以来的研究结果，开展板蓝根种子标准化研究与制定，使板蓝根种子实现标准化生产与管理，制定板蓝根种子生产技术规程（SOP） ，
4、对贵州板蓝根产业的健康、有序发展具有重要意义。本项目引用 GB/T3543.1-农作物种子检验规程（总则） ；GB/T3543.2-农作物种子检验规程（扦样） ；GB/T3543.3-农作物种子检验规程（净度分析） ；GB/T 3543.4-农作物种子检验规程（发芽实验） ；GB/T3543.6-农作物种子检验规程（水份测定） ；GB/T 3543.7-农作物种子检验规程（其它项目检验） ；GB7414-主要农作物种子包装；GB7415-主要农作物种子贮藏等国家标准，进行板蓝根种子的扦样、净度分析、发芽率、真实性和品种纯度鉴定、水份测定、其它项目检验、包装、贮藏等方面的研究，综合研究结果，制定
5、出板蓝根种子生产技术规程地方标准。2、工作简况项目组承担了贵州省农业动植物育种项目“板蓝根高产优质新品系筛选” （ 黔农育专字2013015 号） 、贵州省农业科学院院专项“板蓝根种质资源评价与优良品种选育” （黔农科院院专项【2014】009 号） 、剑河中药材产业科技合作专项 “剑河钩藤优良品系筛选以及间套作板蓝根、重楼技术研究与示范” （ 剑中药科合专项20132 号）等项目，从2012 年开始开展板蓝根资源多样性调查及评价研究、板蓝根种子质量研究、板蓝根生物学特性及栽培技术研究、板蓝根优良品种选育研究等。获得板蓝根种子质量标准及规范化栽培技术，选育出板蓝根优良品系 10 余份。发表相关
6、研究论文 3 篇。3、编制过程2014 年，贵州省现代中药材研究所开始酝酿编制本标准，成立了以李娟为主持人，逐步建立了吴明开、杨琳、刘海、罗鸣为主要成员的标准起草工作小组。起草人员分工协作，其中李娟负责调研、技术内容和结构的设置，标准起草和征询专家意见；吴明开、曾令祥负责技术指导；李娟、杨琳负责标准试验或验证方案的制定、实验数据总结分析；刘海、罗鸣等负责标准主要技术内容试验验证实施。在编制过程中，起草人员先后数次深入威宁、盘县、剑河等板蓝根产区，对标准主要内容进行实地调研，并对部分内容进行反复试验或验证。2015 年，标准起草工作小组向贵州质量技术监督局提出立项申请，获得批准。项目下达后，工作
7、小组召开编制会议，明确分工，收集、整理资料，编写标准草案。及时汇报工作进度，发现问题，提出解决方案，并于 2017 年初形成了征求意见稿。4、编制原则1、坚持科学的原则，标准的内容均来源科学研究和生产实践。2、坚持服务于生产的原则。标准的内容紧密结合生产实际，具有科学性、规范性和可操作性。3、标准的结构和编写按照 GB/T1.1-2000标准化工作导则制定。4、标准的内容以贵州自然条件为基础，为贵州板蓝根种植业发展服务。5、确定标准主要技术内容的论据5.1 关于板蓝根种源中华人民共和国药典2015 版收载药材板蓝根原植物为十字花科(Cruciferae) 菘蓝属（Isatis L.）二年生植物
8、菘蓝（Isatis indigotica Fortune ） ，分类依据中国植物志第三十三卷。5.2 关于引用标准种子质量标准的试验方法应符合中扦样、净度测定、千粒重测定、含水量测定、发芽率测定、生活力测定的相关标准，分别是GB/T3543.2 农作物种子检验规程（扦样）、GB/T3543.3 农作物种子检验规程（净度分析）、GB/T3543.4 农作物种子检验规程（发芽实验）、GB/T3543.6 农作物种子检验规程（水份测定）、GB/T 3543.7 农作物种子检验规程（其它项目检验）。5.3 关于种子生产技术措施与种子质量标准5.3.1 种子生产技术措施菘蓝种子生产主要依靠种植母株，待次
9、年开花后隔离繁殖制种。一般选择植株性状表达一致、健壮、无病虫害的植株留种，种子采收后去除杂质及秕籽,发芽率在75%以上。春、夏、秋播分别3-4 月、5-6 月和9-10 月进行。在播种前，现将土地深翻20 cm-30 cm，每667 m2施用腐熟的农家肥1500 kg-2000 kg，复合肥（N:P:K=15:15:15）15 kg-20 kg，整平耙细，做成宽3.0 m左右的厢。播种采用种子直播的方式，按行距20 cm开条沟，沟深5-8 cm,按粒距8-12 cm将种子播入沟内，覆细土3-5 cm。每667 m2 播种量为 1.5 kg-2 kg。待苗高6-10 cm时，按株距20 cm间苗
10、定苗。幼苗出土后及时中耕除草，植株封行后，不需再中耕。大雨过后，锄松表土。定苗后，结合中耕除草追施1次经无害化处理的人畜粪水，亩施1500-2000 kg；入冬前，根据植株长势亩施尿素6-7 kg或复合肥15-20 kg，施后中耕培土。播种后，若土壤水分不足，应浇透水；久旱未雨叶片出现萎蔫时，应及时浇水。雨季，勤疏通排水沟及时排水。5.3.1.1 播期的确定编制起草小组对种子生产技术中播种时间的选择做了研究，选择春播和秋播两种方式进行试验，分别设3个重复。对其结实后的单株有效角果数与千粒重，其方差分析结果见表1、表2 。表1 单株有效角果数单因素方差分析平方和 df 均方 F P组间 218.
11、407 1 218.407 0.003 0.958组内 275239.947 4 68809.987总数 275458.353 5 注：组间 P 值 0.958，大于 0.05，没有显著性差异。表2 千粒重单因素方差分析平方和 df 均方 F P组间 0.374 1 0.374 3.412 0.138组内 0.438 4 0.110总数 0.812 5注：组间 P 值 0.138，大于 0.05，没有显著性差异。综上所述，通过对结实后的单株有效角果数和千粒重等分析，春播与秋播对菘蓝种子结实和种子质量没有显著的影响，故春播、夏播均可进行菘蓝种子生产。5.3.1.2 株距的确定2013 年，编制起
12、草小组对菘蓝种子生产技术中菘蓝母株的适宜株距进行了研究，于菘蓝结实期获得其株高、茎粗、根长、根粗等性状的测量数据，试验结果见表 3。表 3 不同株距菘蓝结实期各性状测量值株距/cm 株高/cm 茎粗/cm 根长 /cm 根粗 /cm10 105.30a 9.53a 23.41a 1.08a20 111.24b 12.38b 25.58ab 1.48b30 116.49b 13.24b 26.47b 1.64b注：差异显著性分析水平为=0.05 ，同列中含有不同字母者表示差异显著。通过对不同株距菘蓝结实期各性状测量值的分析结果得知，在根长性状上，株距为10cm 的处理与株距为 20cm 的性状差
13、异不显著，与株距为 30cm 的处理差异显著，株距20cm 和株距 30cm 的两个处理间差异也不显著；在株高、茎粗、根粗性状上，株距为10cm 的处理与株距为 20cm 与 30cm 的处理间均达到显著差异，而 20cm 与 30cm 的处理间差异不显著。综上所述，由于株距为 20cm 的处理密度更大，能获得的生物产量更高，因此，将菘蓝种子生产技术中菘蓝母株的适宜株距确定为 20cm。5.3.2 病虫害防治技术措施此技术措施主要根据 2012 年至 2016 年田间栽培与病虫害防治技术经验所制定。5.3.2 花粉管理技术措施菘蓝种子生产要求花期与其他十字花科植物进行花粉隔离，在地理环境隔离不
14、理想时，采用网室隔离，因菘蓝花粉较其他十字花科植物（如油菜、白菜等）小，故采用的隔离网密度为100目（油菜种子生产时，一般采用的隔离网密度为80目）。在网室中放置蜜蜂进行传粉,蜂群应静养一周后入网室，且蜂桶应均匀放置在网室内。5.3.3 种子质量标准的制定 5.3.3.1 检验方法5.3.3.1.1 扦样按GB/T 3543.2农作物种子检测方法执行。种子批的最大重量为5 kg，分装10袋，0.5kg/袋。用单管扦样器每袋都扦样，抽取送验样品 100g，混合均匀，按检验项目要求分样。5.3.3.1.2 净度分析净度分析：按GB/T 3543.3农作物种子检测方法执行。采用四分法分取样：于试验台
15、上放置3张白纸，将40 g种子均匀的摊到中间的纸上，摊成正方形或者长方形，然后用2根直尺从一侧两角对角线方向延伸交汇于中心点，往外将1/4 的种子拨到一张的纸上，同样将另一侧1/4的种子拨到另一张纸上，将拨出的种子分别放入种子袋中。再将中间剩余的种子混匀成正方形或者长方形，按以上方法再一次进行划分取样，同样左右两侧上的种子分别装入种子袋中，而留下中间的种子进行净度测定。5.3.3.1.3 千粒重测定按GB/T 3543.7农作物种子检规程其他项目检验重量测定进行测定。将净度检验后的种子均匀混合，利用四分法，分成4份，从每份中随机取出250粒，共1000粒为1组，重复3次。分别称重记录。5.3.
16、3.1.4 含水量测定按GB/T 3543.6农作物种子检测方法执行。5.3.3.1.5 发芽率测定按GB/T 3543.4农作物种子检测方法 执行。菘蓝的发芽试验以滤纸作纸床， pH值为6.07.5，温度在2025条件下进行。在混合均匀的净种子中数取90粒种子，以30粒为1个重复，重复3次。5.3.3.1.6 生活力测定按GB/T 3543.7农作物种子检规程其他项目检验重量测定进行测定。采用TTC法测定菘蓝种子生活力。将30时浸泡过夜的种子沿胚的中线纵切成两半，置于1.0%的TTC溶液在 30时避光染色2-4 h，胚染成红色的种子为有生活力的种子。 100个半粒为1次重复，重复4次。 5.
17、3.3.2 种子感官要求菘蓝种子经多次解剖及显微观察，得出结论：菘蓝种子形状长椭圆形，基部具有一突状种柄，两侧面具有纵沟；种子表面为黄褐色，基部黑褐色。收集安徽、河北、吉林、贵州、湖南、云南等不同来源的菘蓝进行种子大小测量，结果见表4。表4 菘蓝种子大小 编号 种子长（mm） 种子宽（ mm）编号 种子长（mm）种子宽（mm）1 4.02 1.23 18 3.22 1.272 3.53 1.48 19 3.71 1.213 4.04 1.21 20 3.40 1.134 3.62 1.45 21 4.32 1.565 4.05 1.32 22 3.83 1.366 4.03 1.15 23 3
18、.41 1.307 3.51 1.38 24 4.20 1.468 3.40 1.26 25 3.71 1.449 3.07 1.21 26 3.62 1.5010 4.02 1.27 27 3.56 1.4311 3.91 1.48 28 3.89 1.2312 3.33 1.23 29 3.40 1.4013 3.72 1.55 30 3.61 1.214 3.32 1.17 平均值 3.64 1.3415 3.05 1.47 最大值 4.32 1.5616 3.54 1.33 最小值 3.05 1.1317 3.23 1.42 变异系数（CV）9.15% 9.47%5.3.3.3 质量指
19、标的制定对安徽、河北、吉林、贵州、湖南、云南等不同来源的菘蓝种子进行种子质量测定，结果见表5。表5 14份菘蓝种子各项指标检测值编号 净度（ %） 水份(%) 千粒重(g) 生活力(%) 发芽率(%)1 85.10 7.75 7.653 98.4 96.702 82.06 7.24 7.301 91.2 70.003 86.61 8.23 7.764 88.9 73.304 84.35 6.32 7.360 92.3 83.305 88.29 8.81 7.725 95.7 90.006 79.91 7.71 7.053 89.2 73.307 84.94 7.63 7.148 88.3 70
20、.008 83.31 8.26 7.215 67.8 43.309 92.56 8.06 8.764 93.6 50.0010 90.75 7.23 8.648 92.4 56.7011 91.67 7.66 8.626 86.3 36.7012 79.96 8.36 8.614 96.7 86.6713 89.66 7.57 8.535 98.3 90.0014 93.21 7.89 9.283 97.0 93.30平均 86.60 7.77 8.00 91.2 72.38根据以上14份菘蓝种子的各项指标检测值，试用K值聚类分析方法，以发芽率与千粒重为主要分级依据，以种子生活力为次级分级标准
21、，净度为参考指标，得到菘蓝种子3个等级的分级标准，见表6。以此分得的等级比例合适、且能真实反映菘蓝种子的内在品质分级方法采用最低定级原则，即任何一项指标不符合规定标准都不能作为相应等级的合格种子。由于级别的发芽率指标太低，故舍弃。鉴于此，将级种子的质量标准作为菘蓝种子合格的质量指标。表6 菘蓝种子质量分级标准级别 发芽率（%）千粒重（g） 生活力（%）净度（%） 含水量（%） 83.3 8.535 93.6 89.66 13% 70 7.650 86.3 83.31 13% 36.7 7.053 67.8 79.91 13%数据来源详见已发表论文：(1) 刘海,吴沿友,李娟,等.板蓝根种子质量
22、标准及CaCl 2、NaCl对种子萌发的影响J.种子, 2013,32（5）：73-76.(2) 李娟，刘海,罗鸣 ,等.菘蓝种子夏播全生育期农艺性状研究J. 湖北农业科学,2014，53（22）：5450-5452,5473.(3) 李娟,杨琳,刘海,等.不同来源菘蓝田间生长动态及遗传相关分析J. 时珍国医国药,2016，27(12):3013-3015.六、专利及涉及知识产权无七、分歧意见的处理经过在标准的起草过程中未发生重大分歧意见。八、标准作为强制性或推荐性地方标准的建议本标准为板蓝根种子生产技术标准，适用于板兰根（菘蓝）种子的生产及种子质量的检验验收，建议本标准作为推荐性的地方标准发布实施。九、贯彻标准的要求和措施建议加强对标准的宣传和执行，以标准来规范生产和销售。本标准中的技术要素是科研与生产紧密结合的结果，建议在实施标准过程中对所发现的问题应及时反馈，以利于标准的修订和完善。十、废止现行有关标准的建议本标准为首次制定，无废止现行有关标准的建议。
