1、试卷第 1 页，总 10 页土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、单选题1下图为从土壤中分离纯化尿素分解菌的过程。下列有关叙述错误的是A. 培养基都应以尿素为唯一氮源B. 图中所用培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌C. -过程是梯度稀释，稀释溶剂是无菌水D. 可用酚红染料鉴定，菌落周围是否出现红色圈【答案】C【解析】尿素分解菌可以产生脲酶将尿素分解，从而能利用尿素，其它微生物不能，因此要分离纯化尿素分解菌，培养基都应以尿素为唯一氮源，A 正确；对培养基的灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌法，B 正确；-过程是梯度稀释，该过程用来选择培养尿素分解菌，因此稀释溶剂应该是含有尿素为唯一氮源的培养基，而不是无
2、菌水，C错误；分解尿素的菌能将尿素转化成氨气，使培养基碱性增强，PH 升高，酚红指示剂会变红，因此可用酚红染料鉴定，菌落周围是否出现红色圈来鉴定，D 正确。2下列有关生物工程与技术的叙述不正确的是A PCR 技术可用于目的基因的获取B选择单核居中期向单核靠边期过渡的花粉进行离体培养成功率高C在以尿素为唯一碳源的培养基上长出的菌落一定是尿素分解菌D “三北防护林”建设中，应遵循协调与平衡原理和物种多样性原理【答案】C【解析】试题分析：PCR 可以用于外源目的基因的大量扩增，故 A 正确。在花粉选择进行离体培养时应选择单核靠边期的成功率高，故 B 正确。在以尿素为唯一碳源的培养基上长出的菌落有可能
3、是尿素分解菌也有可能是以氮气为主的细菌，还要加入酚红指示剂进行鉴别，故 C 错误。 “三北防护林”建设中，应遵循协调与平衡和物种多样性原理，故试卷第 2 页，总 10 页D 正确。考点：本题考查现代生物技术相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。3下列属于菌落特征的是( )菌落的形状 菌落的大小 菌落的多少 隆起程度 颜色 有无荚膜A. B. C. D. 【答案】B【解析】一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间） ，同种微生物表现出稳定的菌落特征，这些特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面，因此正确选项为，故本题正确答案为 B。4有关生物技术的操作过程或应
4、用的叙述，错误的是 (双选 )A. 测定泡菜中亚硝酸盐含量时需要标准显色液B. 利用凝胶色谱柱分离蛋白质时，相对分子质量小的蛋白质早一些从层析柱中洗脱出来C. 胚胎分割技术可看做是动物无性繁殖的方法D. 以尿素作为唯一碳源的培养基用于鉴别细菌【答案】BD【解析】试题分析：测定泡菜中亚硝酸盐含量时需要标准显色液，观察亚硝酸盐溶液颜色的梯度变化，故 A 正确。利用凝胶色谱柱分离蛋白质时，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度较慢，分离较慢；相对分子质量大的蛋白质无法进入凝胶内部通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，较快分离，故 B 错。胚胎分割技术是将动物早期胚
5、胎分割为几等份，利用细胞全能性，移植获得同卵多胎，为无性繁殖，故 C 正确。以尿素作为唯一氮源的培养基用于筛选分解尿素的细菌，故 D 错。考点：本题考查生物技术相关知识，意在考查考生能独立完成“生物知识内容表” 所列的生物实验，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并试卷第 3 页，总 10 页能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用能力。5下列有关微生物的叙述正确的是（ ）A不同的微生物对营养物质的需要不完全相同B以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基中加入尿素和酚红的目的是相同的C检验某培养基具有选择作用应在该种培养基中加入等量蒸馏水作空白对照D利用平板划线法或稀释涂布平板
6、法可对微生物进行接种、纯化、分离和计数【答案】A【解析】微生物代谢类型不同，对营养物质的需要也不完全相同，A 正确；尿 素 分 解菌 的 氮 源 是 尿 素 ， 其 他 不 能 利 用 尿 素 的 菌 就 不 能 生 长 ， 所 以 以 尿 素 为 唯 一 氮 源 的培 养 基 上 可 以 选 择 尿 素 分 解 菌 ， 尿 素 分 解 菌 可 以 将 尿 素 分 解 为 氨 ， 可 以 使 酚 红 指示 剂 变 红 ， 来 鉴 定 该 微 生 物 ， 因 此 两 者 的 目 的 不 同 ， B 错 误 ； 检验某培养基具有选择作用，应另用一个完全培养基进行对照，C 错误；释涂布平板法才可以对
7、微生物进行计数，D 错误。【考点定位】微 生 物 的 分 离 和 培 养【名师点睛】1 微 生 物 的 分 离 利 用 该 分 离 对 象 对 某 一 营 养 物 质 的 “嗜 好 ”， 专 门 在 培 养 基 中 加 入 该 营 养 物质 ， 使 该 微 生 物 大 量 增 殖 这 些 物 质 主 要 是 一 些 特 殊 的 碳 源 、 氮 源 ， 如 纤 维 素可 用 来 富 集 纤 维 素 分 解 微 生 物 ， 尿 素 可 用 来 富 集 尿 素 分 解 微 生 物 。 利 用 该 分 离 对 象 对 某 种 抑 制 物 质 的 抗 性 ， 在 混 合 培 养 物 中 加 入 该 抑
8、制 物 质 ， 经培 养 后 ， 由 于 原 来 占 优 势 的 它 种 微 生 物 的 生 长 受 到 抑 制 ， 而 分 离 对 象 却 可 趁 机 大量 增 殖 ， 使 之 在 数 量 上 占 优 势 如 筛 选 酵 母 菌 和 霉 菌 ， 在 培 养 基 中 加 入 青 霉 素 ，因 青 霉 素 可 抑 制 细 菌 和 放 线 菌 的 细 胞 壁 的 合 成 ， 从 而 抑 制 两 类 微 生 物 的 生 长 ， 而酵 母 菌 和 霉 菌 正 常 生 长 增 殖 。2、 微 生 物 的 营 养 物 质 主 要 有 碳 源 、 氮 源 、 水 和 无 机 盐 等 。6牛或山羊的瘤胃中生活
9、着多种微生物，若想从瘤胃中分离出能够分解尿素的细菌，下列操作错误的是A. 以尿素为唯一氮源 B. 以葡萄糖作为碳源C. 将培养基调至酸性 D. 培养环境有充足 02【答案】D【解析】制备以尿素为唯一氮源的选择培养基，A 错误；培养基中可以以葡萄糖作为碳源，B 正确；牛或山羊的瘤胃内为酸性环境，所以需要将培养基调至酸性，C 正确；牛或山羊的瘤胃中是一个相对缺氧的环境，所以筛选分离牛或山羊的瘤胃能够分解尿试卷第 4 页，总 10 页素的微生物需要保证在缺氧条件下培养，D 错误。7下列关于高中生物学实验的原理、方法或选材的叙述，正确的是A. 制作果醋时，通氧不足或温度过低会使发酵受影响B. 利用稀释
10、涂布平板法对细菌计数时需借助于显微镜C. 只要生物材料中含丰富的葡萄糖和果糖，就可直接用于还原糖的鉴定D. 利用二苯胺试剂鉴定细胞提取物，若产生蓝色变化即表明有 RNA 存在【答案】A【解析】试题分析：制作果醋时，醋酸杆菌的代谢类型为需氧型，通氧不足时会使发酵受影响，故 A 正确；利用稀释涂布平板法对酵母菌计数时，只需要计数培养基中的菌落数，不需要显微镜，故 B 错误；生物材料中含有还原糖，并且材料接近无色，才可用于还原糖的鉴定，故 C 错误；二苯胺试剂可以用来鉴定 DNA，故 D 错误。考点：本题考查生物实验的有关知识，意在考查考生理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能
11、将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用的能力。8下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是A KH2P04、Na2HP04、MgS04 7H20 、葡萄糖、尿素、琼脂、水BKH2P04、Na2HPO4 、MgS047H20、葡萄糖、琼脂、水GKH2P04、Na2HPO4 、MgS047H20、尿素、琼脂、水DKH2P04 、Na2HPO4 、MgS047H20、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水【答案】A【解析】在以尿素为唯一氮源的培养基中，只有能合成脲酶的细菌才能分解尿素，才能在该培养基中生长，而且欲将分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方中应加有凝固剂琼脂，以配制成固体培养基。综上分析，A 项正确，B、C、
12、D 三项均错误。【考点定位】微生物的分离与计数9欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是（）A将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌C同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板D可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照【答案】B【解析】试题分析：从土壤中分离分解尿素的细菌时，由于土壤浸出液的微生物种类和数量较试卷第 5 页，总 10 页多，因此需要用无菌水进行一系列梯度稀释，故 A 正确；用尿素为唯一氮源的培养基可以筛选出分解尿素的细菌，加入刚果红指示剂只能鉴定出分解尿素的细菌，而不能筛选，故 B 错误；同一浓度的土壤浸出液至少涂布
13、三个平板，防止偶然因素对实验结果的影响，故 C 正确；未接种的培养基在相同条件下培养为对照组，可以判断培养基是否灭菌彻底，故 D 正确。考点：本题考查微生物的实验室培养的有关知识，意在考查考生识记能力和理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。10在做分离分解尿素的细菌实验时，A 同学从对应 106 培养基上筛选出大约 150 个菌落，而其他同学只选择出大约 50 个菌落。产生 A 同学结果的原因可能有（ ）土样不同 培养基污染 操作失误 没有设置对照A. B. C. D. 【答案】A【解析】在做分离分解尿素的细菌实验时，A 同学获得的菌落远大于其他同学，可能是由于其所取的土样不同，含有
14、的细菌数较多，正确；也可能操作过程中没有保证无菌操作，如培养基灭菌不彻底、被杂菌污染，导致获得的菌落数较多，正确；没有设置对照不会导致其获得的菌落数明显增加的，错误。综上所述，以上说法正确的有，故选 A。11为了从土壤中分离出尿素分解菌，某同学按照下列配方配制培养基。下列叙述中，错误的是：培养基成分 重贵KH2PO4 L.4gNa2HP04 2.lgMgS047H20 0.2g葡萄糖 lO.Og尿素 lOg水 定容到 lOOOmLA. 该培养基缺少琼脂试卷第 6 页，总 10 页B. 该培养基中，尿素是唯一的氮源C. 该培养基属于选择培养基D. 需要用刚果红染色法对分离的细菌进行鉴定【答案】D
15、【解析】根据培养基成分可知，该培养基为选择培养基，选择培养基属于固体培养基，因此需要加入琼脂作为凝固剂，A 正确；尿素分解菌能分解尿素，因此在该培养基中，尿素是唯一的氮源，B 正确；该培养基以尿素为唯一氮源筛选尿素分解菌，属于选择培养基，C 正确；刚果红染色法用于鉴定纤维素分解菌，D 错误。12在做分离分解尿素的细菌实验时，A 同学从对应 106 培养基上筛选出大约 150 个菌落，而其他同学只选择出大约 50 个菌落。A 同学的结果产生原因不可能有 ( )A. 由于土样不同 B. 由于培养基污染C. 由于操作失误 D. 没有设置对照【答案】D【解析】根据生物实验应遵循对照原则、等量原则、单一
16、变量原则和控制无关变量原则分析，已知 A 同学的实验结果可能是培养基污染造成的， 还可能是 A 同学实验操作过程中污染造成的，也可能是与其他同学所取土壤样品不同造成的， 关键是设法排除影响结果的因素，所以实验应该设计对照组，但是实验结果的出现并不是没有设置对照组导致的。所以 D 选项是正确的13下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，正确的是A. 分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解产生氮气B. 将实验组和对照组平板倒置，25恒温培养 2448 小时C. 统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在 300 以上的平板进行计数D. 用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，
17、指示剂变红【答案】D【解析】分解尿素的细菌能产生脲酶，将尿素分解为氨和二氧化碳，A 错误；将实验组和对照组平板倒置，3037 恒温培养 2448 小时， B 错误；统计尿素分解菌的数目时，以菌落数在 30300 间的平板进行计数，求其平均值，C 错误；用尿素为唯一氮源、加有酚红指示剂的培养基培养尿素分解菌，指示剂变红，D 正确。14下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的是（ ）A利用稀释涂布平板法只能分离微生物不能对微生物进行计数B接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落C以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌试卷第 7 页，总 10 页D用大白菜腌制泡菜的过程中亚
18、硝酸盐含量变化是先增加后减少【答案】A【解析】试题分析：稀释涂布平板法既能分离微生物也能对微生物进行计数，在稀释涂布平板法计数时，选择“菌落数在 30-300 的实验组平板进行计数”以减少实验误差，A 错误；接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落，B 正确；尿素分解菌的氮源是尿素，其他不能利用尿素的菌就不能生长，所以以尿素为唯一氮源的培养基上可以选择尿素分解菌，尿素分解菌可以将尿素分解为氨，可以使酚红指示剂变红，故 C 正确；大白菜腌制泡菜的过程中亚硝酸盐含量变化是先增加后减少，D 正确考点：微生物的分离和培养；微生物的利用【名师点睛】 1微生物的分离利用该分离对象对某一营养物
19、质的“嗜好” ，专门在培养基中加入该营养物质，使该微生物大量增殖这些物质主要是一些特殊的碳源、氮源，如纤维素可用来富集纤维素分解微生物，尿素可用来富集尿素分解微生物利用该分离对象对某种抑制物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物质，经培养后，由于原来占优势的它种微生物的生长受到抑制，而分离对象却可趁机大量增殖，使之在数量上占优势如筛选酵母菌和霉菌，在培养基中加入青霉素，因青霉素可抑制细菌和放线菌的细胞壁的合成，从而抑制两类微生物的生长，而酵母菌和霉菌正常生长增殖2、接种方法平板划线法和稀释涂布平板法3、计数方法显微镜直接计数和稀释涂布平板法15用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数，在对应稀释
20、倍数为 106 的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是。A. 涂布了一个平板，统计的菌落数是 230B. 涂布了两个平板，统计的菌落数分别是 251 和 260，取平均值 256C. 涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 21、212、256，取平均值 163D. 涂布了三个平板，统计的菌落数分别是 210、240 和 250，取平均值 233【答案】D【解析】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布 3 个平板，确定对照组无菌后，选择菌落数在 30300 的进行记数，求起试卷第 8 页，总 10 页平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数故选：D。【考点定位
21、】测定某种微生物的数量。二、非选择题16在 “分离以尿素为氮源的微生物”的实验中，配制好的尿素固体培养基加上封口膜后用_方法灭菌，冷却后加入用 G6 玻璃纱漏斗过滤的尿素溶液。玻璃纱漏斗角后需用适宜浓度的_浸泡，再用_冲洗，干燥后保存。【答案】 高压蒸汽灭菌 HCl 蒸馏水【解析】试题分析：消毒和灭菌：根据以上分析可知，微生物的培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；玻璃纱漏斗角后需用适宜浓度的 HCl 浸泡，再用蒸馏水冲洗，干燥后保存。17在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂(含氮有机化合物 )在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌(
22、已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明)。(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行 处理。(2)要在长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、用途方面来看，上述培养皿中的培养基应具有的特点是：在 的培养基中加入_。试卷第 9 页，总 10 页(3)在划线培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是_。(4)在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是_，有透明带菌落利用的氮源主要是 ，据此可筛选出目的菌。(5)若实验接种时用的是稀释涂布平板法，在统计菌落数目时得到 4 个平板，统计的数目分别为 21、213 、25
23、7 、278，则对数据处理后取平均值计数为 ，该方法往往比活菌的实际数目偏 （高/低） 。【答案】(1)稀释 (2)无氮固体 该种除草剂 (3)培养基中缺少这些细菌可利用的氮源 (4)氮气 该除草剂 (5) 249 低【解析】试题分析：(1)制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。(2)从物理性质方面来看，题图培养皿中培养基属于固体培养基；从用途方面来看，该培养皿中培养基属于选择培养基。该除草剂为含氮有机化合物，降解该除草剂的细菌可以除草剂为氮源。故该培养基中除加入除草剂外，不再含有其他氮源，以选择出能降解该除草剂的细菌。(3)在以该除草剂为唯一氮源的培养基上，不能降解该
24、除草剂的细菌(除具有固氮能力的细菌外)是不能生长的。(4)含一定量该除草剂的培养基不透明，形成透明圈是由于该除草剂被某些细菌降解。从所给的 4 个数据可以看出，21 的数目太少，误差很大应该舍弃，剩余三个平板的菌落平均值大约是 249，由于有的菌落是一个或者多个细菌生活在一起，因此平板划线法记录的细菌数量比实际数目少。考点：本题主要考查微生物计数，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系和识图、图文转化的能力。18某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到 1000mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。（1
25、 ）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌?_（填“能”或“不能”） ，原因是_。（2 ）培养基用_ 方法灭菌，培养皿用_方法灭菌，待培养基冷却到_ （填“20”、 “30”、 “40”或“50”）左右时，在_附近倒平板，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止_，以免造成污染。试卷第 10 页，总 10 页（3 ）要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用_法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的_就能大约推测出样品中活菌数。（4 ）培养分解尿素的细菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。（5 ）实验中使用过的培养基
26、及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止微生物的扩散。【答案】（1）不能 培养基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源，不能选择出只以尿素为氮源的微生物（培养基含蛋白胨，蛋白胨中含有氮元素） （2 分）（2）高压蒸汽灭菌 干热灭菌 50 酒精灯火焰 培养皿盖上的水珠落入培养基（ 2分）（3） （稀释）涂布平板（2 分） 菌落数目（4）将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生（2 分）（5）灭菌【解析】试题分析：（1）分离土塘中分解尿素的细菌尿素应为唯一氮源，配方中蛋白胨也是氮源。（2）培养基一般用高压蒸汽灭菌；培养皿耐高温可以采用干热灭菌；培养基温度过低会凝固，所以在 50左右开始倒平板；倒平板时要无菌操作，一般在酒精灯火焰处操作；培养基倒置能防止培养皿盖上的水珠落入培养基。（3） “活”菌数目，说明应采用稀释涂布平板计数法；一般认为每个细菌能增殖为一个菌落，根据菌落数目即可统计活菌数目。（4）检测培养基是否被污染的方法一般是：将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。（5）为防止微生物的扩散，应灭菌后才能丢弃。考点：本题考查微生物培养、无菌操作、微生物计数的相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。
