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类型第十四章唾液及唾液斑检验(教案).doc

  • 上传人:weiwoduzun
  • 文档编号:4907383
  • 上传时间:2019-01-22
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    第十四章唾液及唾液斑检验(教案).doc
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    1、昆 明 医 科 大 学 教 案课程名称:法医物证学 授课对象:法医专业五年级本科生一、 讲授题目 第十四章 唾液斑检验二、 讲授时数 2 学时三、 讲授人: 聂胜洁 职称:副教授 职务:四、 本课目的、要求 1.掌握唾液斑检验的目的、意义及程序。2.了解唾液斑的特点。3.掌握确证唾液斑的原理和方法。4.掌握唾液斑 ABO 血型测定的原理及方法。5.了解唾液斑中其它遗传标记测定的原理和方法。五、 本章节重点、难点重点:1.唾液斑检验的目的、意义及程序;2.确证唾液斑的原理和方法;3.唾液斑 ABO 血型测定的原理及方法难点:唾液斑 ABO 血型测定的原理及方法六、教学方法(请打勾)传统式、提问式

    2、、学导式、病案分析式、直观教学式(幻灯、手术、录像) 、自学式、其它:七、使用教具:多媒体八、思考题:1唾液及唾液斑有何特点? 2唾液斑检验需解决的问题有那些? 3唾液的多态性蛋白和酶有那些?九、要求参考书目及章节:1.法医 DNA 分析 ,郑秀芬著2.司法鉴定学 ,李利华 主编十、讲课内容及时数安排时间:25min多媒体幻灯片笫一节 概述 概念:唾液斑(Saliva Spot)是唾液干燥后形成的斑痕。 发现:唾液斑是法医物证检验中常见的生物检材之一。现场的烟蒂、手帕、口罩、纸巾、瓜子皮、果核、喝过水的茶杯、尸体皮肤及其他物品上的咬痕等均可遗留有唾液斑。一、唾液及唾液斑的特点 组成:唾液是唾液

    3、腺的分泌物(Saliva is secretion of the salivary glands),唾液腺包括腮腺、颌下腺、舌下腺以及口腔粘膜的无数小唾液腺等。唾液中水分约占 99.4%,其余为固体物。腮腺分泌浆液,其他各腺分泌粘液。唾液中含有大量的有机物质,如粘蛋白及球蛋白、氨基酸、尿素、尿酸、大量的唾液淀粉酶及麦芽糖酶等,还有血型物质。无机物质有钠、钾、氯、钙、铵、磷酸盐、碳酸盐及硫氰酸盐等。 唾液中还有口腔粘膜脱落上皮细胞、大 量细菌及食物残渣等。 理化性质:正常纯净的唾液无色,无味,接近中性,pH6.67.1,低渗。正常成年人每日分泌唾液约 1.01.5 升,分泌量及性质受精神因素、刺

    4、激的强度和性质影响,与食物种类亦有一定关系。含粘蛋白多时,唾液呈粘液状,含粘蛋白少时则较稀薄。 吸烟者唾液中硫氰酸化合物含量明显增多。 龋齿患者, 唾液中乳酸含量增加。 唾液斑在白色背景上常呈淡黄色,在紫外线下发淡青色荧光(Saliva stain is light yellow on the white background, paler blue fluorescence under the ultraviolet radiation.)。 二、检验的目的与要求 唾液及唾液斑检验的主要目的是个人识别。 唾液中含有的血型物质及口腔粘膜脱落上皮细胞中的 DNA,在斑痕中能长期保存,少量唾液斑即

    5、可进行个人识别。(As there has the epithelial cells shed from the mouth mucosa, we can do the personal identification.)唾液斑检验首先要求确定检材是否唾液斑,确证唾液斑后再作个人识别,判定斑痕的个体来源。由于含唾液斑的检材通常出现在人们日常生活用品或物品上,例如口杯,烟头,果核等,故确证唾液斑后,可直接进行个人识别,不必进行种属鉴定。但在鉴定咬痕的唾液斑时,首先要确定是人咬痕还是动物咬痕。三、唾液及唾液斑的提取 采取新鲜唾液样本:要求被鉴定人先漱口, 再将纱布或棉拭子放入口中,浸湿后取出,立即置

    6、通风干燥处晾干,分别包装,作好有关的记录。也可将自然流出的唾液,置干净容器内,立即放水浴中煮沸 10min,灭活唾液中的血型分解酶活性,然后置冰箱保存。 现场发现与提取:唾液斑是常见的法医物证检材,勘验现场时,必须注意寻找、收集唾液斑。烟蒂、瓜子皮、果核、口罩、手帕等检材,注意用镊子夹取。茶杯、易拉罐、酒瓶等应戴手套提取,不可直接用手触摸, 以防检时间:15min多媒体幻灯片时间:35min多媒体幻灯片材被取材人的汗液污染。因为分泌型汗中含有的 ABH 物质,会影响 ABO 血型测定结果;而皮肤脱落细胞的 DNA 可干扰唾液斑 DNA 分型结果。现场发现可疑痰迹、尸体皮肤及其他物体上咬痕部位的

    7、可疑唾液斑,应用少量生理盐水浸湿的纱布擦取,晾干后备检。 第二节 唾液斑的证明 唾液中含有大量的淀粉酶,要分析检材是否唾液(斑)时,可检查淀粉酶。但人体粪便、几乎所有的植物、发芽种子和真菌中均含淀粉酶,人体其他分泌液如鼻涕、尿、精液等也含少量淀粉酶,因此单测出斑痕中含有淀粉酶,不能确证唾液(斑) 。如果在检材中同时检出口腔粘膜脱落上皮细胞,可确证唾液斑。 一、淀粉酶的检测 淀粉-碘试验是检查唾液斑中淀粉酶常用的方法。唾液中的淀粉酶较稳定,自然干燥、保存几个月的唾液斑仍可测出。 1. 原理 淀粉遇碘呈蓝色(It is turns blue when starch meets Iodine)。唾液

    8、中含有大量淀粉酶,能将淀粉分解为糖,糖与碘不呈蓝色反应。因此,将已知淀粉溶液与唾液斑作用后,再加碘,若不显蓝色,说明反应体系中淀粉已被唾液淀粉酶分解。然后再利用糖的还原作用验证淀粉分解产物糖的存在,便可判断检材中含有淀粉酶。2. 方法 首先证明斑痕中是否含有淀粉酶。取斑痕约 0.2cm 2 ,同时取无斑 痕检材作对照,分置于试管内。加 0.01%淀粉溶液 0.1ml,将试管放入37温箱 中 60min,加碘液 1 滴,观察颜色变化。对照管立即出现蓝色,检材管无色或呈 淡黄色,为阳性反应,证明检材中含有淀粉酶,可疑斑痕可能为唾液斑。若检材管出现蓝色,则为阴性,证明检材不含淀粉酶或酶已失活,不能证

    9、明检材是唾液 斑。 淀粉-碘反应阳性者可进一步证明糖的存在。取上述检材淀粉液 2 滴置于试 管中,加碱性铜溶液 2 滴,在火焰上短时加热至液体出现气泡时止。出现红至棕 红色沉淀为阳性反应,不出现沉淀为阴性反应。也可在检材淀粉液中加 1%氯化 三苯基四氮唑液 2 滴,短时加热,出现红色沉淀为阳性反应,无色透明或浅红色 为阴性反应。 本试验灵敏度较高,5 年以上的唾液斑,或唾液斑经 100加热 20min 或 200300加热 15min,均呈阳性反应。检测烟头唾液斑的淀粉酶时,要注意烟 草浸出液所出现的假阳性。陈旧检材,酶的活性减弱甚至消失,可出现假阴性结果。 二、口腔粘膜脱落上皮细胞的检查 I

    10、nspect the epithelial cells shed from the mouth唾液中含有口腔粘膜脱落上皮细胞,将检材用生理盐水充分浸泡, 弃去载体,离心,取沉淀物涂片,干燥后 HE 染色,显微镜下检查。如发现口腔粘膜脱落上皮细胞,结合淀粉酶试验阳性结果,可判断为唾液斑,如同时查见食物残渣,则更支持此结论。 三、其他方法 唾液斑证明亦可采用抗腮腺素血清,与斑痕浸液作沉淀试验;或对检材中的微量元素作综合分析,确证唾液斑。 笫三节 唾液斑的个人识别 Personal Identification of Saliva spot唾液(斑) 的个人识别,传统的方法是检测唾液(斑) 中的 A

    11、BO 血型,70 年代有用电泳方法检测唾液蛋白和酶的遗传多态性,目前主要用 DNA 分析法。 一、唾液(斑) 的血型测定 (一)中和试验(Neutralization Test)测定 ABO 血型 唾液属人体分泌液,和精液一样含有水溶性 A、B、H 血型物质。分泌型人含量很大,非分泌型人也含有少量,可用中和试验检测,测定原理及方法同精斑 ABO 血型测定。(二)酶标抗体免疫测定法检测 ABO 血型(简) 酶标抗体免疫测定法灵敏度极高,适用于测定非分泌型唾液中的 ABH物质。如用该方法测定分泌型唾液,需将唾液样本适当稀释,以免背景着色过深,影响结果判断。因此,对未知检材,最好先用中和试验分型,结

    12、果阴性时,才用酶标抗体免疫测定法。 测定唾液(斑)的 ABO 血型还可用与测定精斑 ABO 血型相同的解离试验、混合凝集试验等方法,亦可进行 ABO 基因分型。 二、唾液多态性蛋白和酶测定(简)人类唾液中含有许多具有遗传多态性的酶和蛋白质。 检测这些遗传标记,进一步提高了唾液(斑)在个人识别中的应用价值。 三、唾液(斑)的 DNA 分析 唾液中含有口腔粘膜脱落上皮细胞,可从中提取 DNA,进行基因组DNA 与线粒体 DNA 多态性分析。(Use the epithelial cells shed from the mouth to analysis the DNA.)唾液检材可以是新鲜唾液,用

    13、无菌生理盐水漱口的漱口水、唾液拭子、及烟头等。由唾液和漱口水提取的 DNA 量相对较大,由烟头、唾液斑及唾液拭子提取的 DNA 量较少。 提取唾液斑DNA,因检材加入量不易量化,故应结合检材具体情况调整。 分析 DNA 多态性是目前进行唾液(斑)个人识别的有效手段。四、唾液(斑) 的性别鉴定 唾液斑的性别鉴定可检查口腔粘膜脱落上皮细胞中的 X、Y 染色质,也可通过 DNA 分析进行。由于前者灵敏度及准确性都欠理想,目前己被后者所替代。课堂小结(幻灯片,5min)十一、课堂总结唾液斑是唾液干燥后形成的斑痕,是法医物证检验中常见的生物检材之一。 唾液斑检验首先要求确定检材是否唾液斑,确证唾液斑后再作个人识别,判定斑痕的个体来源。由于含唾液斑的检材通常出现在人们日常生活用品或物品上,例如口杯,烟头,果核等,故确证唾液斑后,可直接进行个人识别,不必进行种属鉴定。但在鉴定咬痕的唾液斑时,首先要确定是人咬痕还是动物咬痕。唾液及唾液斑检验的主要目的是个人识别。 唾液中含有的血型物质及口腔粘膜脱落上皮细胞中的 DNA, 在斑痕中能长期保存, 少量唾液斑即可进行个人识别。十二、课后预习内容安排混合斑检验十三、课后辅导内容的准备唾液斑的组成唾液及唾液斑的提取唾液斑检验的目的与要求

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