1、河北北方学院 病理生理学实验教学中心,王小荣 email: ,家兔实验性肺水肿,相关理论知识,水肿概念,过多的液体积聚于组织间隙或体腔。,水肿机制,1.血管内外液体交换失衡（组织液生成增多或淋巴回流受阻）,2.体内外液体交换失衡（摄入大于排出，钠、水潴留）,血管内外液体交换示意图,平均有效滤过压=有效流体静压-有效胶体渗透压(平均毛细血管流体静压-组织间静水压)-(血浆胶体渗透压-组织间胶渗压),组织液生成过多,1.毛细血管流体静压升高2.毛细血管胶体渗透压降低3.血管壁通透性增高4.淋巴回流受阻,实验目的,1. 掌握肺水肿动物模型复制方法。2. 观察肺水肿时呼吸、心率、中心静脉压的变化及典型
2、体征。3. 通过实验加深对肺水肿发生机制的理解。,实验原理,实验中家兔大量快速输液，可使血容量明显增加，血浆胶体渗透压下降，有利于水肿的发生。,在此基础上，输注肾上腺素，可引起外周血管广泛收缩，导致血液由体循环急速转移到肺循环，加之毛细血管通透性增高，未能为左心所代偿，结果使左心房压力和肺毛细血管流体静压突然升高，液体进入肺泡及间质增多，影响肺呼吸功能，而出现肺水肿。,实验对象家兔,器械与药品,常规手术器械，气管插管，婴儿秤，听诊器，天平，兔固定台。 20ml注射器，输液装置，Power Lab信号采集处理系统，压力换能器，滤纸，烧杯，丝线，粗棉线。 20%乌拉坦，注射用肾上腺素。,步骤与方法
3、,实验分组：PE组家兔4只，Sham组2只。,称重后经耳缘静脉注入20%乌拉坦（5ml/kg.bw） 进行全身麻醉,1. 称重、麻醉与固定：,步骤与方法,2.手术（备皮，在颈部正中做长6cm的纵切口。）,步骤与方法,2.手术（钝性分离气管和一侧的颈浅静脉并分别插管。）,步骤与方法,3. 观察呼吸、心率、中心静脉压的变化，听诊呼吸音。,步骤与方法,4. 输入生理盐水100ml/kg.bw，速度150180滴/分。输液瓶中加入肾上腺素以0.5mg/kg，继续滴注。,密切观察各指标变化。（有无明显呼吸困难，湿罗音，以及粉红色泡沫痰溢出）,步骤与方法,5.当出现肺水肿典型表现时，用止血钳夹闭气管，将
4、肺取出，观察肺大体变化并用滤纸吸干肺表面水分后， 准确称取肺重量，计算肺系数。,肺系数=肺重量（g）体重（kg）。正常肺系数为45。,取右肺上叶放入盛满4%多聚甲醛液的EP管中，保 存于4冰箱，用于组织形态学观察和免疫组织化 学染色分析。,实验拓展,抽取颈总动脉全血标本5 ml置于一次性使用真空 采血管中，低速离心（3000 rpm，10 min）后， 取血浆放入-80冰箱保存留作检测。,取右肺下叶用于肺干湿比测定。,左肺用于制备肺泡灌洗。,标本留取（实验组与对照组分别留取）,实验拓展,常规方法，进行乙醇梯度脱水、透明、浸蜡、包埋等程序制作组织蜡块；连续切片（5 m），在摊片机48水中展片和捞
5、片，然后在68恒温烤箱中烘烤4 h；然后按我室常规步骤进行HE染色。,1.肺组织形态学,肺组织HE 染色（100）,Sham组,PE组1,PE组2,实验拓展,准确称取固定位置肺组织的湿重，并记录；置烤箱80C连续烘烤72 h后，再用称湿重的同一电子太平称取干重，计算湿重/干重的重量比（W/D）。,2. 肺组织干湿比,PE组肺组织湿干重比显著高于Sham组,实验拓展,制备支气管肺泡灌洗液：使用10 ml无菌注射器抽取6ml生理盐水，针尖插入左肺主干气管并结扎，将生理盐水缓慢注入右肺内，再倒置，留取支气管肺泡灌洗液（BLAF），放入标识好的EP管中在恒温高速离心机中离心（4C，3000转速，5 m
6、in）后-80C冰箱保存。,3.肺通透性指数,应用全自动生化分析仪检测血浆总蛋白浓度。,计算肺通透性指数：BLAF总蛋白浓度/血浆总蛋白浓度。,应用BCA方法检测总蛋白浓度。,PE组家兔肺通透性指数显著高于Sham组。,注意事项,1. 不能使用实验前有肺水肿指征（罗音、喘息、气 促）的动物，否则会影响实验结果。 2. 控制好输液速度和输液量，过慢时实验组和对照 组均不发生肺水肿，而过快时对照组也会发生肺水肿。 3. 如一次给肾上腺素肺水肿指征不明显需重新给药时，两次间隔宜在1015分钟，不易过频。 4. 取肺时要小心，防止肺组织破裂和水肿液流出，否则影响肺系数的准确性。,讨论,1.本实验中为什么要大量快速输液？ 2.输入肾上腺素导致肺水肿的机制是什么？ 3.实验中为什么会出现粉红色泡沫痰？ 4.临床上可以选用血管扩张剂，利尿剂，血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）， 受体阻滞剂（-b），洋地黄制剂，非洋地黄类正性肌力药物，醛固酮拮抗剂对肺水肿进行治疗，如呋塞米、654-2、氯丙嗪、地塞米松明白不同药物的作用机理、选择几种药物对肺水肿家兔进行治疗并观察对比治疗效果。,
