1、 ICS G 中华人民共和国 国 家标准 GB 29683 2013 食品安全国家标准 动物 性 食品 中对乙酰氨基酚残留 量的测定 高效液相色谱法 Determination of Paracetamol residues in animal derived food by High Performance Liquid Chromatographic method （电子版本仅供参考，以标准正式出 版物为准） 2013-09-16 发布 2014-01-01 实施 中华人民共和国农业部 中华人民共和国 国家卫生和计划生育委员会 发布 I 目 次 目 次 I 前 言 . II 动物性食品中对
2、乙酰氨基酚残留量的测定 高效液相色谱法 1 范围 . 2 规范性引用文件 . 3 原理 . 4 试剂和材料 . 5 仪器和设备 . 6 试料的制备与保存 . 6.1 试料的制备 . 6.2 样品的保存 . 7 测定步骤 . 7.1 提取 . 7.2 净化 . 7.3 标准曲线的制备 . 7.4 测定 . 7.5 空白试验 . 8 结果计算和表述 . 9 检测方法的灵敏度、准确度、精密度 . 9.1 灵敏度 . 9.2 准确度 . 9.3 精密度 . 附 录 A . II 前 言 本标准的附录 A 为资料性附录。 本标准系国内首次发布的国家标准。 动物性 食品 中对乙酰氨基酚残留量的测定 高效液
3、相色谱法 1 范围 本标准规定了动物 性食品 中对乙酰氨基酚残留量检测的制样和高效液相色谱测定方法。 本标准适用于猪、牛 和 羊 的 肌肉、肝脏和肾脏组织中对乙酰氨基酚残留量 的 检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其 随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些 文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 1.1-2000 标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写规则 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
4、3 原理 试料中残留的乙酰氨基酚， 用乙酸乙酯提取， HLB 柱净化，甲醇洗脱，氮气吹干，流动相溶解，高效液相色谱测定，外标法定量。 4 试剂和材料 以下 所用试剂，除特别注明者外均为分析纯；水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 对乙酰氨基酚标准品 ： 含量 99%。 4.2 甲醇 ： 色谱纯 。 4.3 乙酸乙酯 4.4 正己烷 4.5 HLB 固相萃取柱 ： 60 mg/3 mL，或相当者 。 4.6 5%甲醇水溶液 ： 取 甲醇 5 mL，用水 溶解并稀释 至 100 mL。 4.7 0.05 mol/L 乙酸铵溶液 ： 取乙酸铵 3.15 g，用水溶解并稀释 至 1 0
5、00 mL， 滤膜 过滤。 4.8 1 mg/mL 对乙酰氨基酚标准贮备液 ： 精密 称取对乙酰氨基酚 10 mg， 于 10 mL 量瓶中， 用甲醇溶解 并稀释至刻度 ， 配制 成 浓度为 1 mg/mL 的 对 乙酰氨基酚 标准贮备液 。 -20 以下 保存，有效期 3 个月。 4.9 10 g/mL 对乙酰氨基酚标准工作液 ： 精密量取 1 mg/mL 对 乙酰氨基酚 标准贮备液 1.0 mL， 于 100 mL 量瓶中， 用流动相 溶解并 稀 释 至刻度，配制 成浓度 为 10 g/mL 的 对乙酰氨基酚 标准工作液 。 现配现用。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪 ： 配紫外检
6、测器 。 5.2 分析天平 ： 感量 0.000 01 g。 5.3 天平 ： 感量 0.01 g。 5.3 冷冻高速离心机 5.4 匀浆机 5.5 旋涡混合器 5.6 循环水真空泵 5.7 具塞离心管： 50 mL。 5.8 滤膜： 0.45 m。 6 试料的制备与保存 6.1 试料 的制备 取新鲜或冷冻 的 空白 或 供试组织，去除筋膜，绞碎，并使均质。 取 均质后的供试样品 ，作为供试 试料 。 取 均质后的 空白样品，作为空白 试 料。 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准 工作 液，作为空白添加试料。 6.2 试料 的保存 -20 以下保存 。 7 测定步骤 7.1 提取 称取试料
7、（ 50.05） g， 于具塞离心管中，加乙酸乙酯 20 mL 旋涡 2 min， 6 000 r/min 离心 15 min，取上清液 ， 于 另一 离心管中， 残渣中 加乙酸乙酯 10 mL， 重复提取一次 ， 合并 两次 上清液， 6 000 r/min离 心 10 min，取 上清液 ， 于 45 水浴 蒸发 至干， 用 甲醇 3 mL 溶解 残余物 ， 加 正己烷 5 mL，混匀 ， 静置分层， 弃 正己烷层 液 ， 取 下 层 液 ， 于 45 水浴氮气吹干， 用 水 6 mL 溶解 残余物 ， 10 000 r/min 离心10 min，取上清液，备用。 7.2 净化 HLB 柱
8、依次 用甲醇 3 mL 和水 3 mL 活化， 取 备用液过柱，控制流速小于 2 mL/min。 用 水 3 mL 和5甲醇 3 mL 淋洗，甲醇 4 mL 洗脱，收集洗脱液 ，于 40 45 水浴 氮气吹干， 用 流动相 1.0 mL 溶解残余物 ， 10 000 r/min 离心 5 min，取上清 液 ， 供高效液相色谱 测定 。 7.3 标准曲线的制备 精密量取 10 g/mL 对乙酰氨基酚标准工作液适量，用流动相 稀释 ，配制 成浓度 为 10、 25、 50、100、 200、 400、 800 和 1 600 g/L 的 系列 标准 溶液 ，供高效液相色谱 测定 。 以 测 得
9、峰面积为纵坐标，对应的标准溶液 浓度为横坐标，绘制标准曲线。 求回归方程和相关系数。 7.4 测定 7.4.1 液相色谱条件 色谱柱： C18（ 250 mm4.6 mm，粒径 5 m） ， 或相当者 。 流动相：甲醇 +0.05 mol/L 乙酸铵溶液 （ 20+80， v/v）。 流速： 1.0 mL/min。 紫外检测波长： 250 nm。 进样量： 50 L。 柱温： 30 。 7.4.2 测定法 取试样溶液和相应的 标准 溶液，作单点或多点校准，按外标法以峰面积计算 。 标准 溶液及试样溶液中对乙酰氨基酚响应值应在仪器检测的线性范围之内。在上述色谱条件下， 标准 溶液 空白 添加 试
10、样溶液 的高效液相色谱图分别见附录 A。 7.5 空白试验 除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。 8 结果计算和表述 试料中对乙酰氨基酚 药物 的残留量（ g/kg）：按 下式 计算 mAs VCsAX 式中： X 供试 试料中对 乙酰氨基酚 药物残留量 ， g/kg； A 试样溶液中对 乙酰氨基酚 的峰面积； AS 标准工作液中对 乙酰氨基酚 的峰面积； CS 标准工作液中对 乙酰氨基酚 的浓度 ， g/L； V 溶解残余物所 用流动相 体积 ， mL； m 供试试料 质量 ， g。 注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 检测方法的灵
11、敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法的 检测限为 3 g /kg， 定量限为 10 g /kg。 9.2 准确度 本方法在 10 100 g/kg 添加 浓度 水平上的 回收率为 70% 110%。 9.3 精密度 本方法批内 相对标准偏差 15%， 批间 相对标准偏差 15%。 附 录 A (资料性附录 ) acetaminophenAU- 0 .0 0 10 .0 0 00 .0 0 10 .0 0 20 .0 0 30 .0 0 4分钟2 .0 0 4 .0 0 6 .0 0 8 .0 0 1 0 .0 0 1 2 .0 0图 A1 对乙酰氨基酚标准 溶 液 色谱图 （ 10 g /L） AU0 .0 0 00 .0 1 00 .0 2 00 .0 3 00 .0 4 0分钟2 .0 0 4 .0 0 6 .0 0 8 .0 0 1 0 .0 0 1 2 .0 0图 A2 猪 肌肉 组织 空白 试样 色谱图 acetaminophenAU0 .0 0 00 .0 1 00 .0 2 00 .0 3 00 .0 4 0分钟2 .0 0 4 .0 0 6 .0 0 8 .0 0 1 0 .0 0 1 2 .0 0图 A.3 猪 肌肉 组织 空白 添加对乙酰氨基酚 试样 色谱图 （ 10 g/kg）
