1、 ICS G 中华人民共和国 国 家标准 GB 29706 2013 食品安全国家标准 动物性食品中氨苯砜残留 量的测定 液相色谱 -串联质谱法 Determination of Dapsone residues in animal derived food by Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometric method （电子版本仅供参考，以标准正式出版物为准） 2013-09-16 发布 2014-01-01 实施 中华人民共和国农业部 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 发布 I 目 次 目 次 . I 前 言 II 动物性食品中氨
2、苯砜残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 1 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 原理 . 1 4 试剂和材料 1 5 仪器和设备 2 6 试料的制备与保存 . 2 6.1 试料的制备 2 6.2 样品的保存 2 7 测定步骤 2 7.1 提取 . 2 7.2 净化 . 3 7.3 标准曲线的制备 . 3 7.4 测定 . 3 7.5 空白试验 4 8 结果计算与表述 . 4 9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 . 4 9.1 灵敏度 4 9.2 准确度 5 9.3 精密度 5 附录 A . 6 II 前 言 本标准的附录 A 为资料性附录。 本标准系国内首次发布的国家标准。 1
3、 动物性食品中氨苯砜残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法 1 范围 本标准规定了动物性食品中氨苯砜残留量检测的制样和液相色谱 -串联质谱 测定 方法。 本标准适用于猪 和 牛 的 肌肉及肝 组织 中氨苯砜残留量的 检测 。 2 规范性引用文件 下列文件中的 条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件， 其 随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版 本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 1.1-2000 标准化工作导则 第 1 部分：标准的结构和编写规则 GB/T 6
4、682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 试料中残留的氨苯砜，用乙腈萃取，正己烷除脂， MCX 柱 净化，液相色谱 -串联质谱测定， 外标法定量。 4 试剂和材料 以下所用的试剂，除特别注明外均为 分析 纯试剂，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1 氨苯砜 标准品： 含量 98%。 4.2 乙腈： 色谱纯 。 4.3 正己烷 4.4 浓氨水 4.5 盐酸 4.6 MCX 固相萃取 柱： 60 mg/3 mL，或相当者。 4.7 1 mol/L 盐酸溶液： 取浓盐酸 8.4 mL， 用 水 溶解并稀释 至 100 mL。 4.8 0.1 mol/L 盐酸溶液： 取浓盐酸
5、0.84 mL，用 水 溶解并稀释至 100 mL。 4.9 5 mmol/L 乙酸铵溶液： 取 乙酸铵 0.385 g，用水溶解 并 稀释至 1 000 mL， 滤膜 过滤。 4.10 5%氨化乙腈： 取浓氨水 5 mL，用乙腈溶解并稀释至 100 mL。 4.11 1 mg/mL 氨苯砜 标准贮备液 ： 精密 称取 氨苯砜 10 mg，于 10 mL 量瓶中， 用甲醇 溶解并 稀释至刻度 ，配制 成浓度为 1 mg/mL 的 氨苯砜 标准贮备液。 -20 避光保存，有效期 6 个月。 4.12 10 g/mL 氨苯砜标准 工作 液 ： 精密 量 取 1 mg/mL 氨苯砜 标准贮备液 0.
6、1 mL，于 10 mL 量瓶中， 用甲醇 稀释至刻度 ，配制成浓度为 10 g/mL 的氨苯砜标准 工作 液 。 -20 避光保存，2 有效期 6 个月。 4.13 100 ng/mL 氨苯砜标准 工作 液 ： 精密 量 取 10 g/mL 氨苯砜 标准 工作 液 0.1 mL，于 10 mL量瓶中， 用甲醇 稀释至刻度 ，配制成浓度为 100 ng/mL 的氨苯砜标准 工作 液 。 -20 避光保存，有效期 6 个月。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱 -串联质谱 仪 ：配有 ESI 源。 5.2 分析天平 ： 感量 0.000 01g。 5.3 天平 ： 感量 0.01g。 5.4 离心
7、机 5.5 氮气吹干装置 5.6 旋涡混合器 5.7 固相萃取装置 5.8 超声波清洗机 5.9 均质机 5.10 滤膜： 0.22 m。 5.11 离心管 ： 50 mL。 6 试料的制备与保存 6.1 试料的制备 取新鲜或冷冻空白或供试组织， 绞碎， 并使均质。 取均质后的供试样品，作为供试试料 。 取均质后的空白样品，作为空白试料。 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准 工作 液，作为空白添加试料。 6.2 样品的保存 -20 以下 保存。 7 测定步骤 7.1 提取 称取试料（ 20.05） g， 于离心管中，加乙腈 10 mL，旋涡混合 2 min，加正己烷 5 mL， 漩涡混合
8、1 min，超声 5 min， 5 000 r/min 离心 10 min， 弃 上层正己烷 液 。 取 乙腈 液 于 另一离心管中，加3 1 mol/L 盐酸溶液 10 mL，旋涡混匀，备用。 7.2 净化 MCX 柱依次用甲醇 5 mL和 水 5 mL活化，取 备用液 过柱 ，控制流速小于 1 mL/min，用 0.1 mol/L盐酸溶液 5 mL 和 甲醇 5 mL 淋洗，抽干，用 5%氨化乙腈 5 mL 洗脱， 于 40 水浴氮气吹干，用流动相 1.0 mL 溶解残余物，旋涡混匀， 供液相色谱 -串联质谱测定 。 7.3 标准曲线的制备 精密 量 取 100 ng/mL 氨苯砜 标准
9、工作 液适量，用甲醇稀释 ，配制 成浓度分别为 0.5、 1、 2、5、 10 和 20 g/L 的系列标准溶液 。 供液相色谱 -串联质谱测定。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，对照溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线 ， 求回归方程和相关系数 。 7.4 测定 7.4.1 液相色谱条件 色谱柱： C18（ 150 mm2.1 mm，粒径 5 m） ，或相当者； 流动相：乙腈 +5 mmol/L 乙酸铵 （ 50+50， v/v）； 柱温： 40 ； 进样量： 20 L。 7.4.2 质谱条件 离子源： ESI 源； 扫描方式：正离子扫描； 检测方式：选择反应监测； 喷雾电压： 4 800 V；
10、离子传输管温度： 350 ； 鞘气压力： 40 arb； 辅助气压力： 5 arb； 表 1 氨苯砜选择反应监测的优化参数 药物名称 定性离子对 定量离子对 碰撞能量 V 氨苯砜 249.0108.1 249.092.2 249.0108.1 21 23 7.4.3 测定 7.4.3.1 定性测定 4 通过 试样 色谱图的保留时间与 相应标准品 的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度 标准溶液 各色谱峰的特征离子相对照定性。 试样 与标准 品 保留时间的相对偏差不大于 5； 试样 特征离子的相对丰度 与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 2 的规定，则可判断 试样 中存
11、在相应的被测物 。 表 2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50% 20%至 50% 10%至 20% 10% 允许的相对偏差 20% 25% 30% 50% 将供试试样和标准溶液的定量离子面积之比作单点校正定量。 7.4.3.2 定量测定 取试样溶液和 标准溶液 ，按外标法 ，以峰面积 定量，标准 溶 液及试样 溶 液中的 氨苯砜 响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱 -质谱条件下， 氨苯砜 标准溶液 、空白组织试样 和 空白组织 添加 试样溶液 中特征离子质量色谱图 见附录 A。 7.5 空白试验 除不加试料外，采用完全相同的步骤进行平行操作。 8 结果计算与表
12、述 试料中氨本砜的残留量（ g/kg）：按 下 式计算 m As VCsAX 式中： X 供试 试料中 氨本砜 残留量， g/kg； A 试样溶液中 氨本砜 的峰面积； AS 标准工作液中 氨本砜 的峰面积； CS 标准工作液中 氨本砜 的浓度， g/L； V 溶解残余物所用流动相的 体积， mL； m 供试试料 质量， g。 注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 检测方法灵敏度、准确度、精密度 9.1 灵敏度 本方法的 检测限为 0.1 g/kg， 定量限 为 0.5 g/kg。 5 9.2 准确度 本方法在 0.5 2 g/kg 添加浓度水平上的 回收率 为 60% 120%。 9.3 精密度 本方法 批内 相对标准偏差 30%， 批间 相对标准偏差 30%。 6 附 录 A （资料性附录） 图 A1 氨本砜标准溶液特征离子质量色谱图 （ 0.5 g/L） 图 A2 猪肝 脏 组织 空白 试样 特征离子质量色谱图 图 A3 猪肝 脏组织 空白 添加氨本砜 试样 特征离子质量色谱图 （ 0.5 g/kg）
