1、第一章 基本设备和实验技术,准备室,培养室,细胞学实验室,生化分析室,无菌室,一、 实验室设置,基本实验室,辅助实验室,实验准备, 培养基的 配制,洗涤 与灭菌等,离体材料 的无菌操 作,又称 接种室,控制条件 下的离体 培养,常规设备：天平、冰箱、酸度计、离心机、纯水器,二、实验室所需的设备、用具,灭菌设备：高压灭菌锅、干热消毒柜 过滤灭菌装置,二、实验室所需的设备、用具,培养容器：培养瓶、培养皿等,二、实验室所需的设备、用具,无菌操作设备：超净工作台,二、实验室所需的设备、用具,接种器具：镊子、剪刀、解剖刀等,二、实验室所需的设备、用具,cm,60cm,14cm,定时器,培养设备：培养箱、
2、培养架等,三、常用技术,（一）洗涤技术,新购玻璃器皿的洗涤：1%HCl浸泡过夜 洗衣粉刷洗 自来水冲洗 蒸馏水漂洗 使用过的玻璃器皿的洗涤：去除酸洗步骤，其它同上 有污染物的玻璃培养器皿：高压灭菌 洗衣粉刷洗 自来水冲洗 蒸馏水漂洗 金属器具：用酒精擦洗，并保持干燥。,（二）灭菌技术,1) 接种室的灭菌,接种室灭菌 紫外灯照射(无菌室、超净台)：波长260nm，距离小于1.2m，15-30min。每周一次. 熏蒸灭菌(无菌室):100ml/20m2甲醛+5g/20m2 高锰酸钾；新的实验室或长期不用的实验室.湿度较大的季节要定期进行. 喷雾消毒(超净台;无菌室)：75%酒精或3%来苏儿,2)接
3、种工具、容器的灭菌,干热灭菌：160-180,1.5-2.0h 湿热灭菌：121, 20-30min 在无菌操作时，把镊子、剪刀、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精灯火焰上灼烧灭菌。冷却后，立即使用。操作中可采用250或500ml的广口瓶，放入95%的酒精，以便插入工具。,3) 培养基的灭菌,高压湿热灭菌：121, 18-20min,4)不耐热类物质的灭菌,过滤灭菌（ Filter sterilization）：某些激素（如天然生长素IAA、玉米素ZT、赤霉素GA等）、维生素、抗生素等不耐热或射线照射的物质。,Filter sterilization-过滤灭菌,滤膜0.45m以下,
4、1.过滤器先灭菌，灭菌温度121，20min。 2.细菌滤膜的网孔直径一般小于0.45m和0.22m,Filter sterilization,灭菌的原则：消毒剂与外植体应接触足够长的时间以除去外植体表面的微生物，但应尽量减少对外植体细胞的破坏。,4)外植体的灭菌,常用外植体灭菌步骤,冲洗植物材料除去泥土等大的颗粒； 切成适宜的大小;浸入70-75乙醇，0.5-1min；用2-5NaClO溶液（加1滴表面活性剂）表面消毒5-30min；或HgCl2 (0.1 0.2%) 2-10 min用无菌水冲洗至少3遍,每次1-2min;灭菌的材料可用无菌纸吸干。,（三）无菌接种技术,1. 外植体的选择,
5、常用外植物体的来源,自然环境下 生长的植物,无菌环境下 生长的植物,温室环境下 生长的植物,1.外植体的选择来源：健壮、无病虫害、发育正常大小：视培养目的而定 部位（生理状态及发育年龄） 取材季节：生长开始的季节。（苹果）,组织清洗70%酒精浸1030s灭菌剂处理无菌水涮洗,Note:此步骤应在超净台上完成,2、外植体无菌处理,3、无菌接种,接种前的准备,酒精擦拭,旋转灼烧,取外植体,接种,盖好瓶塞,修剪外植体,接种,培养物污染可能的原因,培养容器培养基本身外植体接种室的环境操作用的器械培养室的环境操作过程,首次接种降低污染率的对策 首次接种：小容器，多数量，尽量分散，互相隔离，效果最好。,录相:菊花的组织培养(上),
