1、操作规程文件管理系统操作规程 第 1 页 共 2 页文件名称 枯草芽孢杆菌活菌数的测定操作规程 文件编号编 制 人 编制日期 年 月 日 颁发部门审 核 人 审核日期 年 月 日 印制份数批 准 人 批准日期 年 月 日 生效日期 年 月 日分发部门 质量管理部、生产部目 的：建立枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定标准操作规程范 围：本方法适用于的枯草芽孢杆菌活芽孢的测定责 任 人：内 容：1.仪器与工具：电子天平、生物显微镜、摇床、18180mm 试管、500ml 三角瓶、10ml 刻度吸管、 1ml 刻度吸管2试剂与试液：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、无菌蒸馏水、等。3.检测培养基配方：牛肉膏
2、3g、蛋白胨 10g、琼脂 16g、氯化钠 5g、蒸馏水1000ml，调至 PH7.2， 121灭菌 30min。4.检测步骤：4.1 菌液制备：采样量不少于 500g，从所采的样品中精确称取 10.00g 试样，加入已灭菌的带玻璃珠（玻璃珠在 80 个左右）的 500ml 锥形瓶中，加入 90ml 已灭菌的无菌水，在摇床上 200r/min 摇动 60min，即成母液的菌悬液。4.2 用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 上述母液的菌悬液，加入 9ml 无菌水混匀成1：110 2稀释的菌悬液，这样依此稀释，直至得到1：10 6；1 ：10 7；1：10 8；1：10 9等浓度（每个稀释度必须更换
3、无菌吸管）。4.3 向每个灭菌培养平皿中倒入约 12ml 培养基，混合均匀，待凝固后备用。4.4 用 1ml 无菌吸管分别吸取不同稀释浓度菌悬液 0.2ml，加至已凝固好的培养基中，用涂布棒涂匀，在无菌操作台中静置 30min 后，倒置于 37的恒温培养箱内培养 18h24h。每个样品取 3 个连续适宜稀释度，每个稀释度重复 3 次，同时加入无菌水的空白对照，每个稀释度取 5 个到 10 个菌落的菌体，涂片染色，显微镜观察识别后计数菌落。操作规程文件管理系统操作规程 第 2 页 共 2 页5.菌落计数：5.1 以平板上出现 20 个200 个菌落数的稀释度平板为记数标准，并确定为稀释倍数。5.2 当只有一个稀释度，其平均菌落数在 20 个200 个之间时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数。5.3 若有两个稀释度，其平均菌落数在 20 个200 个之间时，应按两者菌落数之比值来决定。6、结果统计与计算根据菌落数特征判定，分别数出平板中的枯草芽孢杆菌菌数及杂菌数（杂菌是指除枯草芽孢杆菌外的其他菌种）。统计算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数（B）和杂菌数（E）。6.1 有效活菌总数按式（1）计算；A=10BC5 (1)式中：A有效活菌总数，cfu/gB菌落活菌数；C稀释倍数。6.2 杂菌率按式（2）计算：D= 100(2)式中：D杂菌率，%E杂菌数。EE+A
