1、血痕检验,血痕检验需要解决的问题,送检检材是否是血痕 如果是血痕，是人血还是动物血 若是人血，则测定遗传标记进行个人识别 同时进行其他诸如出血量、出血时间及出血部位推断等问题,血痕检验的步骤,肉眼检查 预试验 确证试验 种属鉴定 血痕的个人识别（遗传标记测定以及性别鉴定） 其他检验（出血部位、出血量、血痕陈旧度等推断）,肉眼检查,肉眼检查主要观察血痕的数量、分布、位置、大小、形状、范围、色泽、它们的相互关系以及它们与现场其他物品的相互关系。目的：推断死亡时间、死亡原因以及案件发生经过等等。,预 试 验,目的：要从大量可疑血痕中筛除不是血痕的检材。 原理：血痕中的血红蛋白或正铁血红素具有过氧化
2、物酶活性，能使过氧化氢分解成水和新生态氧，后者使加入的化学物质氧化成有色物质。 方法：联苯胺试验、酚酞试验、邻联甲苯胺试验、鲁米诺试验、孔雀绿试验、氨基比林试验、愈创木酯试验。 性质：筛选试验。 优缺点：灵敏度高、特异性差、假阳性率高、直接破坏检材。,联苯胺试验,原理：Hb H2O2 H2O+O 联苯胺 联苯胺蓝 方法：取微量检材，依次滴加冰醋酸，联苯胺无水乙醇饱和溶液，12min无蓝色反应，再加3%过氧化氢，立即出现深蓝色为阳性反应。,酚酞试验,原理：Hb H2O2 H2O+O OH-还原酚酞 氧化酚酞 （红色）（无色） （无色）,确证试验,目的：证明检材是血痕。 原理：检测检材中是否含有血
3、红蛋白或其衍生物。若为阳性结果，则可以认定为血痕。 方法：氯化血红素结晶试验，血色原结晶试验，显微分光镜检查及显微镜下查找血细胞。 优缺点：灵敏度不高；霉菌生长、细菌污染、洗涤、日晒后的血痕，确证试验往往呈阴性反应。,氯化血红素结晶试验,原理： 血红蛋白 正铁血红素氯化血红素结晶 氯化钠+醋酸 Cl+醋酸钠 （褐色菱形结晶）,血色原结晶试验,原理：OH-血红蛋白 正铁血红素+变性珠蛋白还 （或吡啶、氨原 基酸等含氮化合物）血红素血色原结晶,显微分光镜检查,原理：有色物质能吸收一定波长的光线，在太阳光谱上出现黑色线条，称为吸收线。血红蛋白及其衍生物是有色物质并且具有很强的选择性吸收光线的性质。,
4、种属鉴定,目的：确定血痕是否为人血。 原理：通过检测人的种属特异性指标确证检材为人血。 方法：免疫学方法（沉淀反应、ELISA），生物化学和分子生物学方法（血红蛋白聚丙烯凝胶电泳、人类基因组中种属特异的 DNA序列的PCR检测）。 注意：现场提取的检材中非人类的生物性斑痕的干扰。,抗人血清沉淀素血清试验,原理及操作步骤： 免疫用人的血清免疫家兔，取兔血清； 纯化用近缘动物血清吸收兔血清，避免近缘反应； 检测用纯化过的兔血清和检材浸液反应。 注意：建立阳性对照和阴性对照。,抗人血红蛋白沉淀素血清试验,原理： 免疫用人血红蛋白免疫家兔，制备兔抗人血红蛋白血清； 检测用抗血清和检材浸液反应。,血型测
5、定,红细胞血型测定 ABO血型的测定1、ABO血型抗体测定2、ABO血型抗原测定（吸收试验、解离试验） MN、Rh及其它血型的测定 血清型测定 红细胞酶型测定 白细胞血型（HLA血型）测定,ABO血型抗体的测定,方法： 备三份检材，分别滴加0.2%的A、B和O型指示红细胞； 37C保温； 观察有无凝集现象。 缺点：抗体含量少且容易降解。,吸收试验,又称凝集抑制试验。 原理：测定加入检材的抗血清效价降低程度。 方法：1、备两份检材，分别加入抗A或抗B血清；2、37C温箱2小时或4 C冰箱过夜；3、离心取上清液；4、分别用生理盐水倍比稀释；5、加1%相应指示红细胞，离心后观察。,解离试验,又称吸附
6、洗脱试验。 原理：测定与检材结合的抗体的ABO血型。 方法：1、备血痕纤维两根，分别加抗A、抗B；2、4 C冰箱1小时；3、漂洗；4、解离分别加相应指示红细胞悬液，56 C温箱510分钟；5、取悬液镜检。,精 液（斑）检 验,精液的组成,固体成分（10%）：精子、睾丸细胞、白细胞、脱落柱状上皮细胞、前列腺卵磷脂小体等； 精浆（90%）：1、蛋白质：人血清共有的蛋白：白蛋白精浆中特有的蛋白：前列腺特异性抗原P30，-微精蛋 白， -精浆蛋白，2-精浆糖蛋白；2、酶类：酸性磷酸酶、乳酸脱氢酶；3、精胺、胆碱等其他有机物；4、无机成分：锌等。,新鲜精液检验,新鲜精液为乳白色粘稠液，有特殊腥臭味。正常
7、精子呈蝌蚪状。,精斑检验,肉眼检查 预试验 确证试验 种属鉴定 血型检查,肉眼检查,暗色布上呈硬固、灰白色浆糊斑状； 白色布上呈黄白色地图状； 放大镜观察可见黄白色小鳞片； 紫外线照射可发出特殊的紫白色荧光（可提示有精斑存在） 。,预试验,碘化碘钾试验 酸性磷酸酶试验 锌的检出 乳酸脱氢酶试验 苦味酸结晶试验,碘化碘钾试验,又称Florence试验。 原理： 胆碱+Florence试剂 褐色针状结晶 缺点： 1、灵敏度不高，仅1:400； 2、仅在一定时间内可能出现有意义的阳性结果； 3、假阳性率高，特异性低。,酸性磷酸酶试验,原理：酸性磷酸酶 Fe(CN)-4- 磷酸苯二钠 萘酚 红色醌类化
8、合物氨基安替比林 优点：含量高，灵敏度高(1:20,000)，适用于微量及降解陈旧检材。,锌的检出,原理及方法： 精液含锌量是所有人的体液中最高的； Zn+双硫腙试剂 红色。 注意：乳汁中锌含量也比较高，可先将检材浸液 稀释后再反应。,乳酸脱氢酶试验,原理： 只有人的精子才含有同工酶LDH-X。 方法： 淀粉凝焦电泳。,苦味酸结晶试验,又称巴贝里结晶试验（Barberio crystal test）原理：精素的分解产物与苦味酸结合，形成 精素苦味酸结晶（黄色十字形、柱状、 星形结晶）。特点：只有人类的精液才能形成，可用于鉴定种属。缺点：肝、脾、胰等器官浸液也可形成同样 结晶。,确证试验,精子的
9、检出：1、检材处理：生理盐水浸出法、氨水浸出法2、染色法：一般采用复染法。 苏木素-伊红染色法：头蓝、尾红。 Baecchi染色法：头紫红、尾蓝。3、检出时限： 活体：1.52天； 尸体：两周以上。,种属试验,原理及方法： 人精液免疫家兔制得兔抗； 纯化； 兔抗与可疑检材浸液进行沉淀反应。 P30试纸条,精斑的血型检验,原理： 分泌型的概念如果血液中的一种物质出现在该个体的其他体液（汗液、唾液、精液、组织液、乳汁、阴道液、尿液等）中，那么可称该个体为该物质的分泌型个体。 方法同血痕的吸收、解离试验。 注意：应取唾液作为对照。,精斑的其它检验,同血痕检验，包括红细胞酶型、血清型、白细胞血型以及遗传物质的检验。,
