1、 编号：022020品种名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)(Nutrient Agar)用 途：用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003 中 4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002 和 GB15981-1995)。原 理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。图鉴：配方(每升)：蛋白胨 10g牛肉膏粉 3g氯化钠 5g琼脂 15g最终 pH 7.30.2使用方法：1、 称取本品 33g，加入蒸馏水或去离子水 1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121
2、高压灭菌 15min，备用。2、 (食品)以无菌操作称取检样 25克(或 25mL)，放入含有 225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为 1：10 的均匀稀释液。依次做 1：100，1：1000稀释液。3、 根据对样品污染情况的估计，选择 23个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取 1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做 2个平皿。4、 稀释液移入平皿后应及时将凉至 46左右的培养基注入平皿约 15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有 1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照。待琼脂凝固后，倒置于 361温箱中培养 48
3、2h。5、 观察结果。6、 菌落计数方法：做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。7、 菌落计数的报告：选取菌落数在 30-300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一
4、个菌落计A：稀释度的选择：应选择平均菌落数在 30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见附表)。若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在 30-300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于 2，则应报告其平均数;若大于 2则报告其较小的数字(见表中例 2及 3)。若所有稀释度的平均菌落数均大于 300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例 4)。若所有稀释度的平均菌落数均小于 30，则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例 5)。若所有稀释度均无菌落生长，则以小于 1乘以最底稀释倍数报告之(见表中例 6)。若有稀释度的平均菌菌落数均不在 30-30
5、0之间，其中一部分大于 300或小于 30时，则以最接近 30或 300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例 7)。菌落数的报告：菌落数在 100以内时，按其实有数报告，大于 100时，采用二位有效数字，在二位数字后面的有效数值，以四舍五入法计算。为了缩短数字后面的零数，也可以用 10的指数来表示(见表中“报告方式栏”)。稀释度选择及菌落数报告方式例次 稀释液及菌落数 两稀释液之比 菌落总数个/g或 mL 报告方式个/g 或 mL10-1 10-2 10-31 多不可计 164 20 16 400 16 000或 1.61042 多不可计 295 46 1.6 37 750 3 8000或
6、 3.81043 多不可计 271 602.2 27 100 27 000或 2.71044 多不可计 多不可计 313 31 300 31 0000或 3.11055 27 11 5 270 270或 2.71026 0 0 0 110 107 多不可计 305 12 30 500 31 000或 3.1104质量控制：本品接种下列菌株，置于 361恒温箱中培养 482h，结果如下：菌 名 菌 号 生长状况 菌落特征大肠埃希氏菌 ATCC25922 良好 白色灰白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润。金黄色葡萄球菌 ATCC6538 良好 黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑、湿润，不透明。贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。贮存期三年。规 格： 250g（来源：广东环凯微生物）
