1、美國藥典微生物試驗說明 Essentials of USP Microbiological Testing,研討會大綱,基礎微生物學 良好微生物實驗室規範 藥典協同之改變 滅菌與無菌保證 微生物方法之確效,微生物學,研究微小生命形式的生物學分支。典型的微小生命形式是單細胞的生命形式,也包括非常少的多細胞生物體 新陳代謝基本需求 能(如光、一氧化碳或氨) 碳、氮、鈣、磷、鎂、鉀和鈉 水(即使真菌也需要0.6 Aw以上的游水),分類學,生物環境多樣性,嗜低溫菌,嗜中溫菌,嗜高溫菌,生物環境多樣性,嗜酸性菌,嗜中性菌,嗜鹼性菌,依DNA在細胞中的情況可將細胞分為大:,真核細胞 Eukaryotic
2、cells 原核細胞 Prokaryotic cells,原核生物 Prokaryotic cells,大部分細菌對人體無害 如: 乳酸菌 但, 也有微生物會致病,細菌(分2界) 古細菌 真細菌,原核生物革氏分類法,Hans C.J. Gram 麥細菌學家(1853-1938). 發現細胞學上的染色和染色技術(革氏染色),用於區分細菌的分學組群。,革氏陽性結構,革氏陰性結構,脂多糖(相對耐熱) 如果進入人體,能導致發燒、白血球減少、腹瀉、休克(熱原Pyrogen)(內毒素Endotoxin),麼是芽孢?,在的環境條件下產生的有再生能的細胞或細胞群。 特徵: 厚壁耐環境 非常緩慢的代謝速,分 4
3、 界 原生動物 動物 植物 真菌,真菌-特徵,皆為化學營菌 (腐生或寄生) 具強大的酵素 比細菌酸性的生活環境(pH5) 高鹽、高環境中生長 黴菌和蕈是多細胞 酵母是單細胞,新陳代謝 Metabolism 依據分解代謝是否能夠使用O2,為麼解微生物對新陳代謝的需求很重要?,為的是想培養微生物生長為的是防止微生物生長,USP微生物相關 務必遵守章節, 防腐效力/Antimicrobial Preservatives Effectiveness 生物指示劑耐受測試Biological Indicators Resistance Performance Tests 非無菌產品的微生物檢驗:微生物計試
4、驗 Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests 特定菌的微生物檢查 / Microbiological Procedures for Absence of Specified Microorganisms 無菌試驗 / Sterility Tests 細菌內毒素試驗 Bacterial Endotoxins Test,USP微生物相關章節 建議遵循, 滅菌生物指示劑 消毒劑與菌劑 非無菌產品的微生物評估 水活性應用 清淨室和其他管制環境的微生物評估 微生物實驗室規範 無菌產品包裝
5、完整性評估, 滅菌化學和物化學指示劑,及綜合指示劑 滅菌與無菌保證 最終滅菌藥品放 微生物方法確效 藥物的微生物回收確效 製藥用水 微生物計試驗營養和膳食補充劑 特定菌的微生物檢查營養和膳食補充劑 非無菌營養和膳食補充劑的微生物評估,EP & USP & JP 藥典方法的國際協合 International Harmonization of Pharmacopoeia,EP & USP & JP 藥典方法的國際協合 International Harmonization of Pharmacopoeia,時限 現的EP 只維持到200812月31日 USP 將維持至20094月 影響 各藥廠將
6、必需提早因應,並需重新進適用性試驗( Suitability Test),以至少 3 批產品測試其一致性. 此協合後的方法僅在產品( non-sterile )的稀釋液及預試驗,生長試驗上有改變,在部份培養基的組成有所改變,甚至新增一些檢驗項目與培養基,在有些品管菌株及接種都有改變,微生物限量(USP & EP 2.6.12) Microbial Enumeration Test,TAMC = Total aerobic microbial count (on TSA, incl. fungi) TYMC = Total combined yeast/mould count (on Sab.4
7、%- Dextrose Agar, incl. bacteria),特定微生物 USP & EP 2.6.13 Tests for Specific Microorganisms,目前 Escherichia coli Salmonella Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus,協調後 Escherichia coli Salmonella Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Clostridia 產芽孢梭菌 Bile-tolerant Gram-negative bacteria 耐膽鹽
8、革氏陰性菌 Candida albicans白色珠菌,Test for Escherichia coli: Presence/Absence (Current USP Method),Test for Escherichia coli: Presence/Absence (Harmonized Method),非無菌劑型微生物合格標準, 水活性應用,水活性是麼? 產品中水的蒸氣壓 P 與相同溫下純水中的蒸氣壓 Po的比。 測物質中自由或游的濕氣 低水活性對微生物生長的影響: 停滯期較長、生長速較慢、穩定期較少的 微生物、減少微生物產生毒素 然而,低水活性後,微生物的耐熱性會提高 注意: 水活性
9、 水分含,為麼想要以水活性 減少微生物限檢驗?,許多非無菌藥品的微生物污染可能性很 低,因此檢驗的價值大 微生物檢驗延長產品的放周期,增加 庫存成本和市場缺貨的機會,微生物生長需要的水活性 (Aw),Growth Promotion and Suitability of Method,ISO 11133 Part 2 Methods for Solid Culture Media,Productivity,Most important change ! Productivity 70% for non selective media 50% for selective media,實驗數據判讀
10、,不合格原因 實驗室錯誤 產品失敗 無上述何種情況,管階層必須即被告知 OOS調查 據偏的程(嚴重性?) 實驗室環境 取樣方法 物的特性(存活的污染微生物?) 樣的評估,滅菌和無菌保證,每批產品是通過無菌試驗就可得到無菌保證。 而是通過適當滅菌工程或無菌充填過程確效,並嚴格執製程規定(cGMP)才可得到的。 環境的微生物控制 原和組成分的微生物控制 所有微生物控制的整合 人員的微生物控制 製程的微生物控制 最終成品的微生物控制,無菌的概率possibility,每批產品的無菌性是根據概推定的,即有產品被污染的可能性也是微乎其微的 通常被接受的無菌保證(SAL)是 10-6 的微生物存活或低,即
11、保證經滅菌的物品或劑型中有活的微生物的可能性超過百萬分之一。 我們能做到比 10-6 好嗎?,滅菌前的生物負荷,對熱安定的物品,透過解滅菌前物品的生物負 荷,經過適當的時間週期,及足夠的滅菌前產品批 ,才足以建滅菌製程。 麼是 “D值”? 減少微生物90%或1個log所需要的時間(分鐘) 許多滅菌製程確效使用生物指示劑,以決定物品在滅菌條件下的時間,才能達到至少 10-6 的無菌保證(SAL) 過滅菌 於12個D值,就造成典型的 “過滅菌” 生物指示劑,適當的生物指示劑是:121時D值為1.5 分鐘, 含1010 芽孢,滅菌與無菌充填,濕熱滅菌 (蒸氣滅菌) 乾熱滅菌 氣體滅菌 游射滅菌 過滅菌 膜過 以Brevundimonas diminuta (ATCC 19146) 挑戰確效,最 終滅菌是保證微生物污染最小化的首選 無法使用最終滅菌,則須藉由一系無菌充填步驟進行 無菌充填是設計防止活的微生物進入產品,微生物 一旦進入產品,沒有任何後續步驟可將之去除,無菌充填重點考量,直接接觸產品的微生物環境,如 何將預先已滅菌的產品組成部分,以無菌充填 工程生產成產品 合設計及有效維護的空調系統,使空氣環境沒有活的微生物 環境監控 經培訓的操作人員穿戴適當的衣物和裝備 人員監控,The End 感謝您的傾聽,