1、 分类号： R393 密 级： 公开 U D C： 610 编 号：201310027攻 读 硕 士 学 位 研 究 生 毕 业 论 文儿童扁桃体组织 IL-4、MMP-9mRNA 的表达及意义论 文 起 止 时 间 ： 2012.062013.03指 导 教 师 ： 杨 英 教 授 学 生 姓 名 ： 万 贝 贝 论 文 类 型: 应用基 础 研 究 学 科 专 业 名 称： 耳鼻咽喉学 研 究 方 向 ： 耳鼻咽喉基础与临床 学 院 ( 系 、 部 )： 医 学 院 青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 2 页 共 33 页目 录中文摘要（3）英文摘要（4）前言（6）材
2、料与方法（9）结果（12）讨论（15）结论（18）参考文献（19）附录（22）致谢（24）综述（25）攻读学位期间取得的研究成果（30）学位论文独创性声青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 3 页 共 33 页明（31）学位论文知识产权权属声明（32）中文摘要儿童扁桃体组织中 IL-4、MMP-9 mRNA 的表达及意义目 的 探讨白细胞介素 -4（lnterleukin4） 、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9）在儿童炎性扁桃体组织、生理性肥大扁桃体组织表达程度的差异性，进一步探讨两者在儿童慢性扁桃体炎病程中的临床意义。方 法 选取青
3、海大学附属医院的住院患儿，其中 45 例为慢性扁桃体炎观察组，40 例为扁桃体生理性肥大对照组。观察组，男性 22 例，年龄 4-12 岁，对照组，男性 19 例，年龄 3-10 岁。采用 RT-PCR 方法检测收集样本中的 IL-4、MMP-9mRNA 基因的表达情况，应用统计软件把所得数据进行相应统计学的分析。结 果 IL-4、MMP-9 在慢性扁桃体炎组织及扁桃体生理性肥大组中均有表达，IL-4 在炎性扁桃体组织中的表达水平的半定量测值为（ 1.0940.264 ）明显高于其对照组（ 0.6340.148） ，MMP-9 在炎性扁桃体组织中的表达水平的半定量测值为（ 0.8510.239
4、）明显高于其对照组（ 0.5470.122） （p0.05） 。青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 4 页 共 33 页结 论 与儿童生理性肥大扁桃体组织比较 IL-4、MMP-9 mRNA 表达水平在炎性扁桃体组织中表达水平有显著提增，IL-4、MMP-9 可能在慢性扁桃体炎病程改变中发挥着重要作用。提示干预 IL-4、MMP-9 可能是治疗慢性扁桃体炎的一种可行思路。关 键 词 白细胞介素-4；基质金属蛋白酶-9；慢性扁桃体炎论文类型 AAbstractExpression And Significance Of IL-4、MMP-9mRNA In Children
5、TonsilWanBeibeiObjective To investigate the difference expression of lnterleukin4（IL-4）and matrixmetalloproeinase-9（MMP-9）gene intissue of the chronic tonsillitis group and normal tonsil group，and then do relative analysis and to investigate its clinical significance in the patients.Methods Collecti
6、ng 45case of chronic tonsillitis and 40 case of normal tonsil as control group in Affiliated Hospital Of Qing Hai University, and the chronic tonsillitis group,the male 22, aged from 4 to 12, the control group, 19 cases of male, aged from 3 to 10 years old. RT-PCR was used to detect the expression o
7、f samples of IL-4, 青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 5 页 共 33 页MMP-9mRNA gene , application of statistical software to analysis the corresponding statistical data.Result IL-4 and MMP-9 were all expressed in the tissue of chronic tonsillitis and tonsillar physiological hypertrophy group , semi-quantitativ
8、e expression level of IL-4 in inflammatory tonsillar tissue in the measurement was (1.094 0.264) and significantly higher than that of the control group (0.634 0.148), semi-quantitative expression level of MMP-9 in inflammatory tonsil tissues measurements as (0.851 0.239) was significantly higher th
9、an that of the control group (0.547 0.122) (p0.05).Conclusion Compared with childrens physiological hypertrophy tonsil tissue ,the expression in inflammatory tonsil tissue of IL-4 and MMP-9 were increased significantly, which may play an important role in changing the course of chronic tonsillitis.P
10、rompt intervention IL-4, MMP-9 may be is an effective way of treating chronic tonsillitis.Key Words IL-4; MMP-9; chronic tonsillitisThesis type A青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 6 页 共 33 页前 言慢性扁桃体炎是耳鼻咽喉头颈外科最常见的疾病之一，其具有导致肾脏、心脏及关节等多处免疫损伤的潜在危害。其病理分型为3型：增生型、纤维型、隐窝型。它的临床特点是反复发作的扁桃体感染，目前认为其发病为多种因素共同作用的结果，至今国内
11、外对于慢性扁桃体炎的确切发病机制尚不清楚，而机体免疫功能紊乱在其发生发展中占有重要地位 1。无炎症情况下，扁桃体组织内无IgE +细胞，一旦出现人们推测有变态反应的发生。近年来有研究表明，扁桃体的反复炎症会造成组织中出现较多的IgE +B淋巴细胞，研究推测变态反应在扁桃体炎的发病过程中有可能起着非常重要的作用 2。研究表明Th1/Th2平衡的紊乱是慢性扁桃体炎反复感染的主要因素之一。T淋巴细胞及其亚群在机体识别外来抗原，促使机体产生相应细胞因子并且参与细胞免疫应答过程中起着非常重要的作用，CD4 +在调节机体免疫系统中的作用非常重要，它通过自身分泌的细胞因子对免疫系统中不同细胞生物学活性起着相
12、应调节作用，对何时启动机体免疫反应、何时终止反应以及反应的强弱调节起青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 7 页 共 33 页着关键性作用 3。CD4 +细胞根据自身细胞因子分泌模式的差异将分为Th1和Th2两大不同功能的亚群，Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-r等Th1类因子，主要参与由细胞毒性T淋巴细胞介导的细胞免疫，有效的Th1类细胞反应在清除机体外来病原微生物的刺激过程中有着非常重要的作用。Th2细胞以分泌IL-4、IL-5等细胞因子为主，主要参与机体体液免疫环节的调控 4。当机体未受外来病原刺激的情况Th1/Th2处于平衡调节状态，若Th1/Th2失衡就将引发机
13、体免疫功能的紊乱，结合其他外在因素可导致机体发生免疫性疾病 5。在有关Th1/Th2平衡紊乱的研究中多以Th1类炎性因子的主要代表IFN-，Th2类的主要代表为IL-4 6。机体Th1/Th2的紊乱可导致出现大量外来病源微生物的入侵感染及自身免疫性疾病的发生、肿瘤细胞的逃逸免疫以及移植手术后排斥反应的发生。有研究结果表明慢性扁桃体炎患儿外周血T细胞免疫功能紊乱，Th1类细胞因子产生水平不足，功能低下，而Th2细胞功能状态的报道尚不多见 7。有研究证实在变态反应性疾病的病程中有着非常重要作用的是Th2类细胞因子分泌的IL-4。它在Tho细胞分化为Th2细胞过程中担当着相当大的调节控制作用，使得淋
14、巴细胞以及嗜酸性粒细胞的游走功能大大增强 8，是机体病理免疫改变反应发生的中心。人IL-4、IL-5主要有激活CD4 +T细胞产生IgE的能力，它在IgE的合成分泌释放中起着主要调节功能，目前理论已证实变态反应的核心介质是IgE，因此对于IL-4的分泌调控治疗有可能成为抑制变态反应发生的强有力方法9-10。炎性扁桃体组织细胞中分泌的IL-4是通过介导T细胞上的IL-4R受体从而进一步引发Th细胞的信号转导途径，启动机体Th2样病理性免疫反应的发生，从而引发扁桃体组织中的变态反应。金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPS)是主要参与降解机体各种组织细胞外基质的蛋白
15、酶类家族,包括弹性蛋白酶以及整合于细胞外基质中的各类胶原酶等,它们的活性需要Zn 2+、Ca 2+等金属离子来激活。基质金属蛋白酶-9(marix metallproteinases, MMP-9)作为此酶类家族中的主要代表,具有超强的降解细胞外基质和基底膜的功能。目前研究表明，基质金属蛋白酶与许多免疫系统疾病有着密切的联系。其中研究的最热点集中在基质金属蛋白酶9在类风湿关节炎中的表达。而国外的最新研究也表明基质金属蛋白酶参与扁桃体组织降解细胞外基质的病理生理过程。特别是基质金属蛋白酶9与扁桃体细胞外基质青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 8 页 共 33 页炎症变化有着
16、密切联系。研究表明基质金属蛋白酶家族中，基质金属蛋白酶9可以精确的调节T细胞的活化。随着基质金属蛋白酶的表达被抑制，细胞外基质特异性t细胞反应也随之下调 11。慢性扁桃体炎作为耳鼻咽喉头颈外科最常见的疾病之一，它的起病原因目前暂无明确定论。近年来国内外学者对慢性扁桃体炎的发病机制进行了许多方面的研究。最新的研究显示，在慢性扁桃体炎的发病过程中细胞因子有着不可或缺的作用。人们在不断的研究中发现许多新的与此病有着密不可分联系的细胞因子。IL-4作为Th2类细胞代表因子，参与扁桃体的免疫反应。其二者的关系已经得到国内外学者的实验论证，但MMP-9作为近几年出现的一类新的细胞因子，其在扁桃体组织中的表
17、达研究甚少。由于它特有的具有降解基底膜和细胞外基质的生物学功能，使得它在免疫反应中的作用越来越受到重视。IL-4与MMP-9都参与免疫病理过程。所以研究二者在扁桃体组织中的表达对深入探讨慢性扁桃体炎的起病原因及治疗手段有重大的意义，可以为防治儿童慢性扁桃体炎提供新的研究依据。本实验采用RT-PCR方法检测慢性扁桃体炎患儿及扁桃体生理性肥大的OSAHS患儿的扁桃体组织中IL-4和MMP-9的表达，探讨二者在儿童慢性扁桃体炎的发病机制中所起的作用。青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 9 页 共 33 页材料和方法1.临床资料选取2012年39月在青海大学附属医院耳鼻喉科住院行
18、扁桃体摘除术的45例扁桃体炎患儿的扁桃体组织作研究对象（观察组），年龄412岁，男性20例。根据2007年儿童阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）诊疗指南草案（乌鲁木齐）标准诊断 12，同期取40例因单纯增生肥大的OSAHS患儿的扁桃体组织作为对照组其中，年龄310岁，男性21例。2.实验方法2.1 标本取材与保存术中取扁桃体组织，用无菌去酶蒸馏水冲洗，每份扁桃体组织用高温灭菌的手术刀片切割成小组织块，用灭菌无酶的锡纸迅速将组织包裹，暂时保存在液氮保温杯中，之后快速将保温杯中组织放进实验室-80冰箱中冻存。2.2 实验试剂与来源青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第
19、10 页 共 33 页试剂名称 来源提取RNA试剂 Invitrogen 逆转录试剂盒 Invitrogen GoTapGreen mastermix TIANGEN 引物合成 Invitrogen 2.3 引物设计方法用IL-4、MMP-9、内参因子-actin mRNA序列作为模板，应用引物设计软件合成引物完整序列。将完整序列交由生物制剂公司合成。IL-4 F：5-CAGTTCTACAGCCACCATGAGA -3,R:5-CATGATCGTCTTTAGCCTTTCC -3；扩增片段长度为201bp；MMP-9 F:5-CGCAGACATGGTCATCCAGT-3，R:5- GCATTGG
20、CCTTGGAAGATCA- 3；扩增片段长度为406bp；-actin F:5- TGGGACGACATGGAGAAAA -3 ，R:5- CAGGAAGGAAGGCTGGAAG -3,扩增片段长度为567bp。 2.4 组织RNA的提取冰盒中迅速称取之前冻存备用的扁桃体组织80100mg，在超净工作台上用Trizol试剂提取扁桃体组织的RNA。用移液器取1mL Trizol试剂加入已放置称取的扁桃体组织的匀浆器中快速进行冰上匀浆。匀浆之后将组织液体转移至1.5mL的EP管中室温放置5min，后放置离心机中进行4，12000g离心10min，待离心完毕取上层液转至另一EP管中，按体积比计算，
21、加入1/5体积的氯仿，用力颠倒混匀后室温静置23min,之后进行4，12000g离心15min，吸取上层无色水相，加入等体积的异丙醇提纯RNA，混匀后室温静置20min，再次4，12000g离心10min，弃上清液，管底可见RNA沉淀。沉淀中加入1mL预冷的75%乙醇（DEPC水配）洗脱，弃上清，放置室温干燥。提取的RNA用2050L DEPC水溶解，质检RNA的浓度和纯度，通过质检的RNA将用来进行后续实验或放置-80冰箱冻存。2.5 逆转录的合成取质检合格的RNA 5L，分别加入dNTP和oligo(dT)各1L，取3L DEPC水调配总体积至10L，颠倒混匀后放入65的温箱中，5min后
22、迅速置于冰盒中青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 11 页 共 33 页冷却1min；取出新的0.5mL EP管，如下配置混合液：4L,Mgcl 2；2L，10*RT；1L，RNase抑制剂；2L,MDTT；将两管液体混匀后放置在42温箱中，孵育2min后再加入1L,GoldscriptRT， 42温箱中放置5min；在70温箱中放置15min，快速冰上冷却，终止反应；短暂离心后收集反应液。2.6 RT-PCR反应PCR反应分别是2L逆转录产物 、12.5L GoTap Green mastermix 、上下游引物各加入1L最后加入灭菌无酶的双蒸水调配至25L体系，设定反
23、应程序，95 5min预变性，然后开始以下循环：94加热15s，退火温度为60（MMP-9退火温度为64）30s，72进行40s的延伸，34个循环（MMP-9为35个循环）后进行72 5min的延伸。分别取Marker 8L以及PCR的反应产物8L，在调配好的2.0琼脂糖凝胶中进行30 min的电泳,将电泳好的凝胶放入紫外成像分析仪中进行拍照,用仪器自带的分析软件计算每个标本的IL-4/-actin和MMP-9/-actin光密度比值,对检测因子的表达进行半定量分析。3.统计学方法采用 SPSS17.0 统计软件进行相应的数据分析, 观察指标用均数标准差（S）表示。用 t 检验来进行两组间均数
24、的比较。检验水准为 =0.05。 x青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 12 页 共 33 页结 果1.组织总RNA鉴定结果检测组织中初步提取的RNA纯度，通过检测仪测得RNA的OD260/OD280比值，数值均处于1.82.0之间。配置1%琼脂糖凝胶，电泳后，紫外灯下拍照保存，图1中可以清晰看见28s、18s条带， 且28s条带的亮度大体为18s条带的两倍，提示组织中完整的RNA被提取，RNA并未发生降解。青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 13 页 共 33 页1 2 3 41、2 为观察组，3、4 为对照组图 1 组织 RNA 电泳图Figur
25、e 1 Total RNA electrophoresis map2. PCR产物凝胶电泳图PCR 产物进行 2.0%琼脂糖凝胶电泳 30 min，IL-4、MMP-9、-actin 的目的条带分别为 201 bp，406 bp，567 bp（图 23） 。1 2 3 4 51：Marker；23 对照组，45 为观察组图 2 IL-4 在两组中的 RT-PCR 表达图100bp250bp500bpIL-4-actin5S18S28S青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 14 页 共 33 页Figure 2 Expression of IL-4 RT-PCR in the
26、 two group M 1 2 3 4 1：Marker；23 对照组，45 为观察组图 3 MMP-9 在两组中的 RT-PCR 表达图Figure 3 Expression of mmp-9 RT-PCR in the two group3.两组IL-4和MMP-9 mRNA的表达水平比较结果观察组IL-4 mRNA的半定量检测表达水平明显高于对照组。差异有统计学意义( P0.05)。观察组MMP-9 mRNA的半定量检测表达水平明显高于对照组。差异有统计学意义( P0.05)。见表1。表两组IL-4、MMP-9的mRNA半定量表达水平的比较（xs）Table 1 Comparison
27、of IL-4 mRNA and MMP-9 mRNA between two groups组别 例数 IL-4 MMP-9观察组 45 1.0940.264 0.8510.239对照组 40 0.6340.148 0.5470.122t - 10.025 7.474MMP-9-actin100bp250bp500bp青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 15 页 共 33 页P - P0.05 P0.05表 1 显示，在观察组及对照组中都能发现 IL-4 及 MMP-9mRNA 的半定量表达，且被检因子在观察组中半定量的表达水平明显高于其对照组（ P0.05）。讨 论机体
28、的免疫系统由非常复杂的调控机制组成，其中在免疫应答的方向调控中T 细胞亚群起着不可或缺的作用 13。T 细胞属于免疫活性细胞之一，它的存在对于细胞免疫防御甚至全身机体免疫防御的调控中都有着非常重要的意义。辅助性 T 细胞 1（Th1）/辅助性 T 细胞 2（Th2）是由不同细胞因子产生的不同生物学功能来划分的。T 淋巴细胞亚群主要负责全身机体免疫防御反应的调节，炎症产生的主要原因在于 Th1/Th2 细胞因子的平衡紊乱 14。作为全身机体免疫防御的重要免疫器官之一的扁桃体，它担负着首先为机体捕获各种病原体、继而产生各亚型淋巴细胞及相应抗体，将不同的介质传递到相应的淋巴器官，从而激发全身免疫系统
29、的一系列协同防御机制。当机体未受外来病原刺激时，机体中 Th1/Th2 细胞因子是处于整体平衡状态中，互相抑制，互相介导 15。患儿反复炎症的扁桃体组织中 T 细胞互相抑制，互相介导的平衡状态被打破，出现了紊乱的调节，患儿的免疫力下降，扁桃体的炎症演变成记忆性，导致一直迁青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 16 页 共 33 页延不愈 16。当人体免疫力出现下降，特别适合外来的病原微生物繁殖，扁桃体隐窝上皮被大量毒素侵蚀，病原微生物侵入扁桃体实质而导致炎症的发生。此时机体咽黏膜及咽淋巴组织会伴随出现一定程度的的炎症反应。这种炎症反应会反复发作，并且容易触发局部或全身其他相
30、关并发症的发生 17。既往研究主要集中于慢性扁桃体炎患者 B 细胞和免疫球蛋白水平的变化情况，对于 T 细胞及其相关因子的研究则比较少，主要报道也只集中在将扁桃体组织进行免疫组化方面的研究进展 18-19。 IL-4 是辅助性 Th2 细胞的自分泌生长因子，B 细胞的增殖分化是由其参与调控的。免疫球蛋白 IgE 是 IL-4 刺激 B 细胞产生的。血管细胞粘附因子-1 由 IL-4 诱导内皮细胞产生，继而引起淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞与血管细胞粘附因子-1 发生反应。这种级联反应在 EOS 介导的炎症反应中有着非常重大的意义。它能有效抑制 EOS 的大量凋亡。研究表明机体的炎症反应就是由
31、大量具有趋化活性的 EOS 导致的。基质金属蛋白酶（MMPS）通过不断的对细胞外基质进行裂解，大大促进了肥大细胞、EOS 等炎性细胞分泌的多种不同的炎性因子在细胞传导之间的发生的级联作用，使组织结构不断的发生损伤与重塑，再损失再重塑的恶性循环。基质金属蛋白酶家族中目前已有 40 多个成员被人类探索发现，它们几乎能把细胞外基质中的所有蛋白类成分都一一降解。研究表明机体各种免疫防御反应过程都能发现有 MMPS 的参与 20-21 。这类酶在机体各种组织中都有着广泛的表达，当机体未受外来病原感染时其表达水平和活性都处于较低状态，但当人体受到外来病原微生物刺激或机体处于任何病理状态时这类酶的表达水平会
32、明显升高22-23。基质金属蛋白酶这一大家族都有着相似的功能元件结构但基因组成又有着各自的特点。成纤维母细胞和多种不同的炎性细胞是这类酶的主要合成分泌者。20 多种不同的序列高度保守的依赖 Ca2+、Zn 2+的蛋白内切酶是基质金属蛋白酶类家族的主要成员。这一家族中的酶类区别其他不同类别酶类的关键在于它们有着依赖金属离子的特性，并且它们需要不同的 Ph 值来激发活性。MMPS参与正常和异常组织的损伤和修复过程是主要是通过裂解细胞外基质（ECM）的多种不同成分如（层黏连蛋白、蛋白多糖、纤维结合素、胶原和弹性蛋白等）来实现其功能的 24。在 pH 值为中性时 MMP-9 通常能将活性发挥的最强，当
33、然这也需要内源性金属离子同时在体内浓度达到最佳 25 。青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 17 页 共 33 页细胞外基质（ECM）被 MMP-9 作为底物，并且其能把细胞的表面分子以及细胞周围其他的蛋白基质成分逐一分解从而来调节不同细胞所具有的不同分泌功能。基质金属蛋白酶类极少在正常的机体组织中表达，但它们的表达量会因体内不同炎性因子、激素、各类生长因子的刺激而呈现不断上升的趋势，并且其活性也会增加。这使得机体组织细胞的 ECM 遭到大量破坏，细胞的损伤和重塑在不断进行中 20。MMPS 的一般特征有 6 项：金属酶螯合剂及抑制剂会对其产生抑制作用；MMPs 降解不同
34、的底物，大致可分为四类（间质胶原酶、明胶酶类、基质溶解素和膜型基质金属蛋白酶） ；能把多种不同细胞外基质成分逐一裂解；催化结构、信号肽结构以及前肽结构是组成这类酶的 3 类相似的结构域；以酶原的方式释放，水解酶的活性在酶原被激活后达到峰值，其相对分子量将会减少大概 10000；含 Zn2+的活化中心主要负责将酶类进一步催化；基质金属蛋白酶的氨基酸序列同源性高度可达到 40%-50%；明胶酶类中的主要代表为 MMP-9，它也是 MMPS 超家族成员中现阶段最热点研究的炎性因子之一 27。它的分子量大约有 92000，VII、IV、V、I 型胶原及天然的纤维蛋白原等都可被其降解导致发生变性。MMP
35、-9 主要由中性粒细胞和巨噬细胞以无活性的前酶原形式分泌和合成28-29 。作为基底膜的主要成分 IV 型胶原及 ECM 都会被 MMP-9 快速降解，从而导致原本无法进入细胞间质的大分子物质进入血浆中，组织细胞的水肿继而引发，新生的毛细血管进一步导致更多的炎性细胞渗出。基因表达的调节、活化无活性的酶原调节以及酶原进一步活化的调节是 MMP-9 在机体组织细胞中调节的三大主要表现。当人体受到大量外来病原微生物感染如炎症时，MMP-9 表达水平会由于其基因转录表达活性的增强而增高。机体最先分泌的 MMP-9 是无活性，经过蛋白酶水解或有机汞的作用下激活，发挥其降解细胞或细胞外基质的作用。本研究通
36、过实时荧光定量 RT-PCR 方法更加准确的表明，IL-4 和 MMP-9 在扁桃体组织中均有表达，且在慢性扁桃体炎的扁桃体组织中二者的表达水平高于生理性肥大组的扁桃体组织，两者在慢性扁桃体炎的病理改变中可能有着重大意义。当人体受到大量外来病源微生物刺激时，IL-4 和 MMP-9 的基因表达量会迅速增多，导致嗜酸性粒细胞的快速聚集，Th2 炎症反应会变得更加强烈。不断加重的 Th2 炎症反应又反作用于上述两个因子的表达。Th2 炎症反应过程中青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 18 页 共 33 页不仅可产生具有代表性的 IL-4，也能产生大量其他具有协同作用的炎性因子
37、如IL-5、GM-CSF 和 TNF-a 等，这些细胞因子与 IL-4 互相作用，加剧了扁桃体组织内的炎性反应。IL-4 和 MMP-9 在慢性扁桃体炎的病理改变中可能发挥着重要作用。由于本研究观察样本例数不多，IL-4 和 MMP-9 在儿童扁桃体炎病程发展中的确切机理目前无法得出定论，我们下一步将会扩大样本的收集，进行更加深入的研究。对于 IL-4 和 MMP-9 的继续探索研究，可能为今后儿童慢性扁桃体炎的预防、诊断和治疗提供更多的理论依据和参考指标。结 论1.本研究采用RT-PCR方法完成IL-4和MMP-9 mRNA在观察组和对照组中基因表达水平的半定量测定，证实观察组IL-4和MM
38、P-9 mRNA的基因表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（ P0.05）。2. 本实验结果表明，IL-4 和 MMP-9 在儿童慢性扁桃体炎的发病过程中起了一定的作用，二者相互影响，提示干预 IL-4、MMP-9 可能是治疗慢性扁桃体炎的一种可行思路。青海大学医学院 2010 级攻读硕士学位研究生毕业论文第 19 页 共 33 页参考文献1 朱南方，关克涛，赵春玲，等.拔火罐穴位注射对反复扁桃体炎 T 淋巴细胞亚群的影响J.中医药学刊，2003,21（5）：660-661.2 杨珍 扁桃体组织中 IL-4 和 IL-5 的表达及意义J.内蒙古医学杂志，2011,43（4）：398-400.
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