1、基本原理超声波细胞粉碎机是利用超声波在液体中的分散效应，使液体产生空化的作用，从而使液体中的固体颗粒或细胞组织破碎。超声波细胞粉碎机由超声波发生器和换能器二大部分组成。超声波发生器将市电转变成 18-21KHz 交变电能供给换能器。锆钛酸钡压电振子是换能器的心脏，它随交变电压以 18-21KHz 频率作伸缩弹性形变，换能器随之作纵向机械振动。振动波通过浸入在生物溶液中的钛合金变幅杆产生空化效应，激发介质里的生物微粒剧烈振动。主要用途超声波粉碎机能用于粉碎动物细胞、植物细胞、细菌、牙孢或组织。分散稀土和各类无机矿物粉。超声波粉碎机是加速化学、生物学、物理学的反应速度和加速液体脱气的理想装置。超声
2、波粉碎机能配制近乎微米的百分之一大小的乳胶体；匀化“难混溶”的混合液；聚合一些物质，析出另一些物质。总之，超声波粉碎机能实现提取、粉碎、乳化、匀化、悬浮液、变异、气悬体、加速脱溶、晶化及在电子显微镜下配制各种生物样本之多种功能超声波破碎细胞的常见问题大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有 1%triton-X-100 的 PBS 悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100 的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。 细菌沉淀直接加样品 1buffer，再加 5ul 的巯基乙醇，混匀，离心，煮沸 10min，直接上样，染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微
3、波炉里加热 1min(下次适当补点醋酸即可),将染色液换成大量的水(自来水即可)在微波炉煮 10min 就可以。在表达重组蛋白后超声波破碎细胞，采用冰浴，400w，破 2s 停 1s，但是不一会就产生大量泡沫，影响了破碎功率，pbs 和 tris 缓冲液都是这样，最后都是破碎不完全，而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。1*会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部，约 1cm（我一般是距底部 0.5mm）。功率根据仪器不同会有所不同，但你可以观察液面，有波动但不要太剧烈就好。2*破 3S 停 10S，破个二三十次看看。 3*变幅杆位置摆放也要注意，听声音如果不对的话就要及时调整。
4、另外可以从菌浓度方面考虑。 在破碎时试着加大体积,强度最好不要超过 60%. 4*尝试超 8s 停 8s,对有些菌体蛋白来说，你的方法很难散热，导致蛋白变性产生气泡，最好停顿时间稍长一些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。链霉菌（放线菌）超声破碎的，用的方法条件是什么？前处理一般就是配置成一定浓度的菌悬液。使用超声破碎时采用的具体条件是：(1)取细菌的 24 h 培养液于 5 000 rmin 下离心 5 min 收集菌体(2)用 pH 75 的 Na2HPO -NaH2PO 缓冲液洗涤 3 次，再用该缓冲液将菌体配成 1：3 的菌悬液置于 40 mL 大塑料试管内(3)将大塑料试管置于冰浴中，
5、采用超声波破碎(功率 200 W，12”探头，破碎 30 s，间歇 30 S)(4)破碎液于 12 000 rmin 下高速冷冻离心 30 min，收集细胞碎片和上清夜超声破菌流程与 上述基本一致，就是洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或 pH8 的 TrisHCl，洗涤一次就可以。另外，超声剂量随样品量、菌体改变比较大，功率可以到 400600w，超 5s，停 5s，冰浴，要加终浓度 1 mM 的 PMSF。为确定合适的超声强度和次数，有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。 放线菌属于原核生物系统进化树上的（GC）摩尔百分含量（mol）高的革兰氏阳性菌（Eubacteria）分枝类群，它虽然具有原
6、核生物特有的分子生物学特性，但在其不同类群中，细胞壁的化学组分变化很大。在做大肠杆菌超声时，采用的是 400W，超 5 停 5 的方法，效果不错，但是用在链霉菌上，似乎没什么效果。会不会就是由于细胞壁组成差异造成的呢，因为大肠杆菌式属于革兰氏阴性菌的。再有镜检是检验破碎效果,但是细胞破碎程度和我需要的酶获得之间有正比关系吗？破碎时间长也会影响到酶的活性。所以想问问 anaisai 战友，你提供的“功率 200 W，12”探头，破碎 30 s，间歇 30 S”的条件好像是用于破碎链霉菌孢子的，也可以用于发酵离心后的菌泥吗？如果可以，你破碎的全程时间大概是多少呢？ 如果你需要的是胞内酶，细胞破碎程
7、度和需要的酶获得之间基本上有正比关系。破碎时间长的确会影响到酶的活性。这就需要在最佳的破碎时间和酶活性之间做出判断，最直接的办法是先绘制相关曲线（酶活性和时间的关系曲线）。实验中，破碎的是棒状杆菌（也是很难破壁的 G+菌），破碎时间控制在 30min 左右，酶活较好。如果是基质菌丝的话,好可以考虑用溶菌酶处理一下.一般来讲这几种方法读可以的:一,液氮研磨二,用 french press 破碎三，超声波破碎四，溶菌酶处理预处理超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它既是一种波动形式,又是一种能量形式。超声对细胞的作用主要有热效应，空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时，摩擦力阻碍了由超声
8、引起的分子震动，使部分能量转化为局部高热（4243）。空化效应是在超声照射下，生物体内形成空泡，随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡。另外，空化泡破裂时产生瞬时高温（约 5000）、高压（可达500104Pa），可使水蒸气热解离产生.OH 自由基和.H 原子，由.OH 自由基和.H 原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应，超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化，引起细胞结构损伤。损伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。100g 大肠杆菌溶于 1L 破碎液里（破碎掖：50mM Tris-Cl(PH8.5)
9、 5mM EDTA 0.14M NaCl），搅拌，发现菌液发粘，菌体不能够很好分散，用高压匀质机破碎，加压后，菌液不能进入匀质机，速度很慢，请问是何原因？能有好的办法解决，很好用匀质机快速破碎菌体？ 将破碎液的量加大，不能很好分散可能是量太大 。超声处理 510 分钟，菌液粘度即可大大降低，也可促进菌体分散。不同型号的设备功率不一样，功率的大小决定了使用变幅杆的大小范围（直径 2mm 至几十毫米），你使用多大的变幅杆就在设备的上调至该刻度（很简单的）！变幅杆的大小决定了处理量 5ml 一下选3mm，550ml 可选 68mm，50ml 以上选 10mm 的变幅杆，依此类推！占空比不用关心的，主
10、要是指超声时间和停顿时间的比值。 酵母破碎的问题一般的 PROTOCOL 都是用 glass beads 破碎酵母细胞 sigma G-8772 酵母破碎效果好的我所做过的方法中还是玻璃珠，效率很高，而且对目的蛋白活性不会有什么影响。一般应该用这个方法。 化学裂解的方法，10g 酵母 加 1ml 的乙酸乙酯，充分搅拌至液体状。此法的裂解效果不错的加尿素裂解液（尿素 8mol/L, NaCl 0.5mol/L,Tris 20mmol/L, EDTA 20mmol/L, 2%SDS, PH 值8.0），据说效果可以。 毕氏酵母细胞破碎法在破碎遇到的问题是菌体浓度太低，OD620nm 在 4-6 之
11、间。细胞破碎仪的最低破碎体积为 4ml 左右，这样再稀释一倍，OD 就到 2-3 啦，我们怀疑破碎完溶出蛋白和酶活测定时会测不准。所以请教大家细胞破碎时最低的菌浓多少为下限？我们的菌是一种棒杆菌。 破碎后，你可将液体放入透析袋中浓缩。我们所做的方法是按照 1：20 的比例将离心后的菌体（e.coli）溶解于超声缓冲液（50mM 磷酸 pH 8.0 ）300w 10s/10s 破碎 20 分钟。做了镜检！基本全被破碎了！我做蛋白纯化的，做的包涵体。实验中我们的菌体浓度相对独立，与培养液中的菌体 od 无关，不收其限制，便于操作者调控。一般按每 g 湿菌体加 5-10ml 裂菌缓冲液。超声肯定会产热，所以一定要有降温装置，除非你需要得成分耐高温。
