微生物鉴定技术在药品检验及监管中的应用-上海药检所-徐+伟+东.ppt

1、上海市食品药品检验所,2010年5月27,徐 伟 东,微生物鉴定技术在药品检验 和监管中的应用,微生物鉴定技术平台的建设,二,样品微生物的鉴定及同源性分析,三,微生物实验室能力建设,微生物新技术的应用,四,微生物污染监管方式的思考,五,背景介绍,一,一、背景介绍,在1993-1998年间，美国FDA报告的由微生物污染引起的召回案件达到1370件，占所有产品召回案件的36% 我国药品微生物污染的调查数据较少，但微生物污染仍居首位，近期披露的黑龙江完达山刺五加注射液受微生物污染的问题，已经造成了十分严重后果和无法挽回的损失。 药品安全管理仍存在监管漏洞，造成定性难、溯源难、应变慢等问题，以及新的致

2、病微生物或变异体的出现，导致药品受到微生物污染 我国各大城市不断承办国际大型体育赛事和国际会议尤其是2010年在我国召开的上海世界博览会，也进一步增强了对药品的监督管理水平的要求。,对微生物分类水平较低，只能鉴定 到“属”，鉴定微生物种类有限,传统微生物鉴定方法的局限,分子方法,分子生物学技术研究的是微生物DNA序列信息，常用于细菌分类的16S r DNA也有1500个碱基，每个碱基位置由ATGC四种核苷酸中的一种组成，多样性可达种可能（约）10900。 新版的伯杰氏系统细菌学手册微生物DNA变异信息为主,传统方法,人类已知的土壤微生物已达到10万种 现在常用的微生物鉴定用生化反应只有20多种

3、，实际经过研究形成一致标准的、有意义的生化鉴定结果仅2000多种。 微生物生化鉴定金标准的API鉴定系统仅能鉴定550种细菌 通过碳源利用进行微生物鉴定的Biolog系统也仅能鉴定2000种微生物,微生物变异能力强，生化反应准确 度不高，错检漏检现象普遍,传统微生物鉴定方法的局限,生化反应鉴定主要是利用不同微生物自身所特有的不同酶系统，根据微生物利用分解底物的种类和营养来源进行分类鉴定。在大多数情况下，同“属”微生物的酶系统基本相同，可以达到鉴定的目的微生物DNA突变能力强，如果这些突变点涉及到微生物酶系统的表达，就会造成酶活性降低甚至酶缺陷，导致鉴定失败 在现行国家标准中，只有血浆凝固酶阳性

4、反应才会被确证为金黄色葡萄球菌阳性，阴性反应的微生物则被作为无害菌处理。然而，近几年引起高度关注的血浆凝固酶阴性金黄色葡萄球菌的流行使得金黄色葡萄球菌被漏检，血浆凝固酶阴性金黄色葡萄球菌往往含有肠毒素和其他毒素，是引起医院感染、社区食物中毒的重要污染源。,不能对微生物污染进行准确溯源分析,传统微生物鉴定方法的局限,在进化过程中生物DNA分子会形成大量DNA多态性区域和非编码DNA序列。不会造成生物种属归类争议 也不会造成任何形态上或酶系统表达的改变 通过生化鉴定方法无法对这类变化进行有效的分析,DNA位点变化却包含大量重要的微生物所独有的进化信息，可以与其他来源的同种微生物相区别，也是微生物种

5、内差异的来源,如常用于真菌种类鉴定的ITS基因 ITS片段能保持相对稳定的变异频率 亲缘关系非常接近的2个种都能在ITS序列上表现出差异，显示最近的进化特征,微生物鉴定技术平台的建设,二,样品微生物的鉴定及同源性分析,三,微生物实验室能力建设,微生物新技术的应用,四,微生物污染监管方式的思考,五,背景介绍,一,2.1 技术手段,2.2 方法比较,2.1 技术手段,2.2 方法比较,按照标准进行 传统的生化反应鉴定,API试剂条 菌鉴定国际金标准,半自动细菌鉴定仪 （ATB Expression）,微生物鉴定手段,Mini VIDAS筛选系统,免疫凝集/免疫沉淀实验,微生物检测手段,荧光定量PC

6、R(BAX),色谱、光谱分析技术,分子生物学技术,传统筛选方法,2.1 技术手段,分子杂交,阳性菌分子水平上的鉴定,1,2,3,4,1.形态学鉴定,3.核糖体水平上的鉴定,APIVITEK,16S rDNA序列分析分子杂交（Dupont RiboPrinter）,2.生化鉴定,傅里叶红外光谱,Rep-PCR (DiversiLab),4.全基因组水平上的鉴定,5.脉冲场电泳技术(PFGE),多位点序列分析(MLST),多位点重复串联序列分析(MLVA),随机扩增多态性分析技术（RAPD),API试剂条菌鉴定国际金标准,无需专用仪器，标准化手工方法完成细菌的生化鉴定，为低成本替代传统手工细菌生化

7、鉴定的最佳产品。特点： 完整的鉴定谱：15种试条，可鉴定的细菌多于550种 简单方便：标准化方法，成本低廉，判读结果简单 快速结果：4-24小时。,半自动细菌鉴定仪（ATB Expression）,检测项目：可鉴定由环境、原料及制成品分离出的菌种和药敏试验（包括：肠杆菌、非发酵G（-）杆菌、葡萄球菌、链球菌、酵母菌、厌氧菌）。可鉴定770种细菌和分析近80种抗生素药敏实验。,原理：鉴定试条包含风干底物的反应孔，经标准浊度的菌液活化，于指定温度培养4小时/24小时后即可。计算机根据阅读器检测到的结果自动调用相应试剂条数据库，得出生化/同化结果和药敏试验结果。系统将所得编码跟数据库的典型菌株生化谱

8、比较，以客观的2个参数（鉴定百分率及T-值）计算鉴定结果特点： 速度快捷ATB Expression提供自动化接种，阅读及分析试条结果。 准确可靠的结果ID 32及快速ID 32 试条由金牌标准API试条改良而成，配合自动化概念，结合成完整的细菌鉴定系统,全自动细菌鉴定仪（VITEK 2）,检测项目：根据需要鉴定的微生物的种类的不同，设计了不同的鉴定卡片，比如革兰氏阴性菌卡，革兰氏阳性菌卡，酵母菌卡等。可鉴定405种细菌，70多种药物约50多种药物组合的药敏卡。,原理：仪器的原理其实就是我们进行细菌鉴定中使用的生化反应。仪器把30个对细菌鉴定必需的生化反应培养基固定到卡片上，然后通过培养后仪器

9、对显色反应进行判断，利用数值法进行判定。 特点： 快速：鉴定结果平均只需4-6小时。对与快速生长细菌(大肠埃希氏、粪肠球菌、变形杆菌、克雷伯氏菌等)鉴定可提前到2小时。 操作简便：全部操作自动化，简单而方便 资料处理：bioLIAISON软件集中管理实验室资料 获得AOAC 国际认证：保证提供的微生物鉴定结果是公认的,全自动荧光免疫分析仪(mini-VIDAS),检测项目：食品及环境中最常见致病性细菌（李斯特菌属、单核增生李斯特菌、弯曲菌属、大肠杆菌O157、沙门氏菌属、葡萄球菌肠毒素检测）的快速筛检。,原理： 以免疫技术捕获目标微生物，应用酶联免疫法，最后测蓝色荧光（ELFA）。包被针上有抗

10、体包被，所测得的荧光与标本中抗原的含量成正比。特点： 结果准确：对每个标本做两次免疫反应，保证结果的可靠。灵敏度比可见光方法高出1000倍。已获得美国FDA、日本厚生省、AOAC、USDA、中国进出口商品检验局等政府及权威机构认可。 可同时进行12个相同或不同的测试。每天进行约6080项测试 特异性强：标本不需分离出目标微生物即可上机检测。 避免交叉污染：没有采样针，避免标本之间交叉污染；样品不与仪器接触，仪器内没有抽吸样品的管路，杜绝了标本对环境的污染 全自动化、操作简便,荧光定量PCR,聚合酶链式反应技术（PCR）是分子生物学技术最具有代表性的技术。它是一种能在体外将微量生物DNA分子进行

11、数百万倍放大的新型检测技术。 荧光定量PCR技术在普通PCR技术基础上，通过荧光染料的结合，将检测信号进一步放大，其灵敏度是普通PCR的几百倍，并且整个扩增和检测过程由仪器自动完成，检测同量高，速度快，减少了人为误差和环境干扰因素，克服了普通PCR易污染的问题，除去样品前增菌时间，5小时内可得到检测结果。,微生物检测限可能达到1 CFU/mL以下，而且抗杂菌干扰能力强,DNA测序技术,DNA测序技术可以将生物的遗传信息完整的破译出来，通过直接比较不同类群个体同源核酸的核苷酸排列顺序，获得生物进化、变异的详细信息如细菌的16S r DNA和真菌的ITS序列，已经被广泛测定应用于菌种鉴定研究之中。

12、由于DNA测序方法耗时短，准确度高，在细菌、真菌、植物、动物的种类鉴定和系统发育研究方面得到了越来越广泛的应用,a) 微生物污染溯源分析目前微生物分型技术常用于流行病学调查和毒力分析 国际上普遍认同脉冲凝胶电泳技术作为微生物分型的标准方法 现代分子生物学技术可用来区别近缘种，并在研究微生物种内或种组间不同的污染来源及地理亲缘关系的研究中显示出广泛的应用前景b) 相似微生物DNA序列比对和微生物进化分析 根据生物DNA序列的特异性分析，可检测生物基因的微小变化，监控和预测微生物污染的爆发 16S rDNA分型已被广泛认可，微生物16S rDNA进化树对目标微生物进行详细的基因分型，同时还可了解不

13、同来源微生物的进化关系和亲缘关系。该技术应用范围宽，发展前景广，发展潜力巨大,指纹图谱技术,分子杂交技术首先用限制性内切酶对细菌基因组DNA进行酶消化，通过特异性探针与目标DNA序列的杂交结合，经过转膜技术和显色技术形成该细菌特有的杂交图谱。现有成熟的基于16S r DNA的分子杂技图谱库涵盖了200个属的1200多种6950株微生物，为各研究和实验机构提供了一个统一的微生物分型标准。为环境分离物、致病菌、有害生物体、质控菌株、有益生物体和任何细菌建立了一个全自动的基因指纹图库。这一精确到菌株水平的鉴定系统能够追溯细菌污染源，并且具有对所有微生物环境进行控制及流行病学调查等强大功能。,物质成分

14、分析,红外傅立叶光谱分析,FT-IR技术以未损伤细胞的FT-IR光谱的特殊指纹区为基础，光谱反映的是整个细胞组成分子的振动特征，也就是蛋白质、核酸等物质的特征由于这些细胞组分与基因表达有关，反应了全细胞组分的综合信息所得图谱有效地反映了细胞表型和基因型信息，从而区分生化信息上的差别,德国Bruker公司微生物FT-IR分析用户手册主要采用1200-900-1，3000-2800-1，1500-1400-1谱段组合进行微生物判别分析，这3个谱段分别主要代表了微生物细胞壁多聚糖、细胞膜脂肪酸以及细胞质膜蛋白质和类脂成分的信息。,色谱分析,微生物中含有的一些称为生物标志物的化学物质，其含量或结构具有

15、种属特征或与其分类位置密切相关通过分析微生物的化学组成鉴定微生物，开辟了一个微生物检测和鉴定的新途径高效液相色谱(High - performance liquid chromatography，HPLC) 气相色谱(Gas chromatography，GC) 气相色谱质谱联用(Gas chromatography - mass spectrometry，GC-MS) 液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS),建立各种生物标志物在微生物中分布情况的数据库及相应的标准分析程序，仍然是色谱分析微生物的主要方向,2.1 技术手段,2.2 方法比较,各种鉴定方法的比较,我所抗生素室通过比较分析近百种微

16、生物的生化鉴定方法（API和VITEK 2鉴定）和分子生物学方法鉴定方法，客观准确的多方面评价各种方法的优劣,微生物鉴定技术平台的建设,二,样品微生物的鉴定及同源性分析,三,微生物实验室能力建设,微生物新技术的应用,四,微生物污染监管方式的思考,五,背景介绍,一,3.1 细菌鉴定,3.2 溯源分析,3.1 细菌鉴定,3.2 溯源分析,3.1 细菌鉴定,3.2 溯源分析,微生物鉴定技术平台的建设,二,样品微生物的鉴定及同源性分析,三,微生物实验室能力建设,微生物新技术的应用,四,微生物污染监管方式的思考,五,背景介绍,一,四、微生物鉴定技术平台建设的意义及运用,增强药品中微生物检验能力，做到数据

17、可信，国际认可，为执法、仲裁提供依据,政府检测实验室、药厂微生物检测实验室洁净环境监控，构建环境微生物分布图，提高检测结果公信力,与国际标准接轨，监控药品生产环境，构建药品生产微生物风险评估体系,应用范围广，扩展能力强，医疗器械、食品、医院等领域广泛运用,4.1,4.2,4.3,4.4,四、微生物鉴定技术平台建设的意义及运用,增强药品中微生物检验能力，做到数据可信，国际认可，为执法、仲裁提供依据,政府检测实验室、药厂微生物检测实验室洁净环境监控，构建环境微生物分布图，提高检测结果公信力,与国际标准接轨，监控药品生产环境，构建药品生产微生物风险评估体系,应用范围广，扩展能力强，医疗器械、食品、医

18、院等领域广泛运用,4.1,4.2,4.3,4.4,微生物检测实验室应首先确保实验室的设施和环境不会对检验过程带来微生物污染只有排除检测过程中的微生物污染，才能保证检验结果的准确性，才能有足够的理由相信，样品污染来自药品本身，而不在检验过程中被污染的对检测机构而言，自身检测环境的控制要比样品检测更加重要,四、微生物鉴定技术平台建设的意义及运用,公正 准确 科学 高效,加强检测的“过程控制”建立实验室环境微生物信息库、动态监控环境微生物的变化、建立环境微生物污染趋势分析图，预测微生物污染方向，从被动的排查污染措施上升到主动的预防、预警。如果样品检验过程中不合格，分离鉴定样品中的微生物，与环境微生物

19、数据库比较、分析微生物污染来源，出具客观的检测报告，杜绝实验结果假阳性和假阴性的发生,样品接收,样品摆放,样品分发,环境 设施 仪器,实验过程,结果报告,登记样品名称，检查是否具有唯一性标识，并检查是否与运转表内容一致 看样品外包装是否完整、密封,是否能保持无菌状态符合检验要求 样品数量是否符合检验要求,样品接收,原始记录,原始记录审核,检测过程控制,样品分发,环境 设施 仪器,实验过程,结果报告, 根据样品的贮存条件进行冷藏、冷冻或常温放置 将样品分区域（在检、待检、检毕）摆置 冰箱和冰柜的温度记录,样品摆放,样品摆放,样品接收,原始记录,原始记录审核,检测过程控制,环境 设施 仪器,实验过

20、程,结果报告,环境和设施等的质量管理 仪器状态是否正常（是否在计量标志的有效期内） 做好仪器使用记录,仪器 设施 环境,样品接收,样品摆放,样品分发,原始记录,原始记录审核,检测过程控制,样品分发,环境 设施 仪器,实验过程,结果报告,核对质量标准是否现行有效 培养基的质量评估工作的审查 关键步骤用试剂的质量控制 阳性对照菌的管理 留样管理 废弃物管理 对灭菌效果评价的审查 实验过程质量控制管理（人员技术能力，方法比对实验，人员比对实验，制备质控样品加菌随行检查） 应急事件处理程序,实验过程,样品接收,样品摆放,原始记录,原始记录审核,检测过程控制,样品分发,环境 设施 仪器,实验过程,结果报

21、告,完全按SOP书写，所写即所做的内容 统一原始记录的格式和内容 按既定期限完成原始记录的书写 按不同来源分别输入结果,原始记录,样品接收,样品摆放,原始记录,原始记录审核,检测过程控制,样品分发,环境 设施 仪器,实验过程,结果报告,原始记录的完整性 检验数据的正确性 结果判断的合理性,原始记录审核,样品接收,样品摆放,原始记录审核,原始记录,检测过程控制,样品分发,环境 设施 仪器,实验过程,结果报告,阴性结果直接报告 阳性结果鉴定,结果报告,样品接收,样品摆放,原始记录,原始记录审核,检测过程控制,建立环境微生物菌株信息库 实验室洁净环境微生物监控,头状葡萄球菌（Staphylococc

22、us capitis） 溶血葡萄球菌（Staphylococcus haemolyticus） 缓症链球菌（Streptococcus mitis） 科氏葡萄球菌（Staphylococcus cohnii） 藤黄微球菌（Micrococcus luteus）,常见洁净环境微生物污染,实验室洁净环境微生物监控,建立实验室洁净区采样方案 医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法（GB/T 16292162941996） 药品生产质量管理规范（1998）以一个月为周期，连续监测实验室环境 不定期对无菌室洁净环境进行抽样调查，积累洁净环境微生物种群和分布数据,检查内容包括沉降菌检测、浮

23、游菌检测、表面微生物检测和操作人员卫生检测等,在实验环境中以葡萄球菌属（Staphylococcus）分离数目最多为34% 微球菌属（Micrococcus）和芽孢杆菌属（Bacillus）次之，分别为19.15%和17.04% 假单胞菌属（Micrococcus）、莫拉菌群（Moraxella）、短波单胞菌属（Brevundimonas）占4.26% 短杆菌属（Brevibacterium）、不动杆菌属（Acinetobacter）、鞘氨醇单胞菌属（Sphingomonas）、泛菌属（Pantoea）等所占比例归于其他项中 收集的环境微生物中酵母菌占8.51%，主要为近平滑假丝酵母（Cand

24、ida parapsilosis）和粘红酵母（Rhodotorula mucilaginosa） 霉菌等丝状真菌占4.26%，主要为青霉菌属,我所实验室洁净环境微生物监控,我所环境微生物菌株信息库的建立,我们连续三个月对实验室洁净环境中部分环境微生物进行追踪，并进行同源性分析,以葡萄球菌属为例，本实验室共收集到16株葡萄球球菌属细菌。 7、8月分别收集到的细菌239与250和232与246之间同源性较高，归在一个子类中，属于同源污染。 说明7月和8月之间的消毒灭菌过程不彻底，存在消毒漏洞。 经过消毒，在9月份监测过程中收集到的葡萄球菌中未发现有和前两月同源的菌株，说明前期的污染已经消除，9月份

25、收集到的部分葡萄球菌为新进入环境的微生物。,同一株菌反复污染洁净环境要引起检验人员高度重视 仅靠洁净室内部消毒措施很可能起不到排除污染的作用 要对洁净室送风系统和检验人员携带污染进行全面调查 建立环境微生物污染趋势分析图，预测微生物污染方向，从被动的排查污染措施上升到主动的预防、预警。将污染信息并与历史污染物比对，回顾调查，帮助质量体系的改进。,微生物进行鉴定菌株来源,共241株,四、微生物鉴定技术平台建设的意义及运用,增强药品中微生物检验能力，做到数据可信，国际认可，为执法、仲裁提供依据,政府检测实验室、药厂微生物检测实验室洁净环境监控，构建环境微生物分布图，提高检测结果公信力,与国际标准接

26、轨，监控药品生产环境，构建药品生产微生物风险评估体系,应用范围广，扩展能力强，医疗器械、食品、医院等领域广泛运用,4.1,4.2,4.3,4.4,在药品微生物检验中的应用,在严格依据法定方法进行检验的同时，结合微生物鉴定技术平台，对检验过程和检验结果进行双重复合和监控。通过对比环境监测的微生物种群类别和样品微生物种群情况，客观准确的评价检验质量，增菌检验报告的含金量。,在细菌污染检查中的应用,细菌的鉴定流程图,在真菌污染检查中的应用,在真菌污染检查中的应用,现行国标仅能够对曲霉属，青霉属，镰刀菌属等少数几个种属的霉菌进行鉴定。 我国的食品卫生微生物学检验国家标准中，对于青霉菌的鉴定需要在分离纯

27、化后培养12-14天，再对其孢子及菌丝进行形态学观察。 真菌孢子易于在空气中飘散，难以杀灭，对实验室环境和检验人员安全具有潜在污染风险。,分子生物学鉴定技术有效的解决了区分污染来源的问题。该方法不需要使用选择性培养基，纯化后即可进行菌种鉴定。对真菌的菌丝体和孢子均能够进行DNA的提取，避免霉菌产生的大量孢子对实验室工作环境带来的潜在污染危害,真菌的鉴定流程图,四、微生物鉴定技术平台建设的意义及运用,增强药品中微生物检验能力，做到数据可信，国际认可，为执法、仲裁提供依据,政府检测实验室、药厂微生物检测实验室洁净环境监控，构建环境微生物分布图，提高检测结果公信力,与国际标准接轨，监控药品生产环境，

28、构建药品生产微生物风险评估体系,应用范围广，扩展能力强，医疗器械、食品、医院等领域广泛运用,4.1,4.2,4.3,4.4,美国FDA在要求药厂将微生物鉴定到“种”一级，并建议在微生物形态和生化反应鉴定之外采用基因分型技术进行分析，以便对生产环境的微生物污染进行监控,对药厂生产环境监管和风险评估上应用,上海某药业产品受微生物潜在污染风险 上海某药业有限公司无菌产品微生物污染溯源 某医疗器材有限公司灭菌方法研究,对药厂生产环境监管和风险评估上应用,某制药厂沉降菌同源性分析,检测实验室 微生物信息库,制药企业 微生物信息库,同 源 性 分 析 比 对,污染源,是,否,微生物鉴定技术平台建设的意义及

29、运用,鉴 定,四、微生物鉴定技术平台建设的意义及运用,增强药品中微生物检验能力，做到数据可信，国际认可，为执法、仲裁提供依据,政府检测实验室、药厂微生物检测实验室洁净环境监控，构建环境微生物分布图，提高检测结果公信力,与国际标准接轨，监控药品生产环境，构建药品生产微生物风险评估体系,应用范围广，扩展能力强，医疗器械、食品、医院等领域广泛运用,4.1,4.2,4.3,4.4,4.4 应用范围广，扩展能力强，可进行产品真伪鉴别和致敏原检测,国际上普遍加强了有关食品标签的法律法规，对相关标准不断细化。越来越多国家和地区开始全面实施对食品致敏原成分加以标识的规定酶联免疫技术 PCR技术等动植物产品的真

30、伪鉴定追踪产品产地 鉴别产品主要组成成分,PCR技术在致敏原检测中具有较高的检出率，能检测样品中ppm级的致敏原物质,微生物鉴定技术平台的建设,二,样品微生物的鉴定及同源性分析,三,微生物实验室能力建设,微生物新技术的应用,四,微生物污染监管方式的思考,五,背景介绍,一,企业自查 政府监管,微生物样本的采集,微生物菌株鉴定,企业环境控制及污染溯源能力,新型监管模式的建立,构建微生物分布图,建立菌种信息库,A类企业：分子水平 B类企业：生化水平 C类企业：境检、API水平企业微生物鉴定到“属”药检所鉴定到“种”“菌珠”,五、上海医药企业微生物污染的监督、管理和风险评估新模式的建立新的监管模式流程

31、图,新的监管模式流程图,食品药品监督管理局科学规划,企业内部自查,局各职能部门外部督察,药检所强大的技术支撑,上海医药企业微生物污染的信息库监督、管理和风险评估,完善对制药企业的风险分级监管,建立和健全日常监督检查方法,强化企业微生物风险管理意识,建立药品污染源通报、追踪平台，完善药品召回机制,5.1,5.2,5.3,5.4,帮助企业改进产品质量，打造医药安全公共研发平台,5.5,五、上海医药企业微生物污染的监督、管理和风险评估新模式的建立,5.1 完善对制药企业的风险分级监管,对制药企业分级管理往往依据药品的产量、使用频次及以往的污染事件严重性，对生产工艺和生产环境缺乏有效的数据监测，容易忽

32、略潜在的微生物污染危害要是对文件资料的审查和经验性的对加工条件和过程的评判，缺乏对微生物污染进行监控和调查的手段，仅能对生产环境和终产品的细菌总数和控制菌进行检查，缺乏量化的评价指标,检测机构对微生物检测和追踪识别能力大幅提高通过采用微生物鉴定和分型技术对药品加工全过程的监控，能对微生物污染来源进行详细的分析，绘制工厂微生物分布图，了解工厂生产过程中的污染重灾区和引起污染的工艺步骤为建立更全面的药品质量体系和风险管理体系提供了有效的分析手段。增强了监管部门对制药企业的监管力度和检查能力,传统监管方法,新监管方法,上海共有制药企业约200家 上海地区被列为重点监控对象的注射剂、生物制品和特殊药品

33、三类高风险品种的生产企业仅有58家,将临时性的整顿深化为常态性的管理，可以使监管部门快速应对微生物性污染突发事件，为有效评估污染源的危害和范围提供详尽的第一手分析资料,上海地区高危企业微生物污染监管方式的思考,1、 调研：掌握企业生产管理水平和微生物风险管理能力企业基本情况调查微生物污染情况现场调查企业微生物风险管理水平等级划分制订适合处于不同风险理水平制药企业管理措施和改进意见2 、完善药品微生物污染风险管理体系，制定切实可行的日常微生物监控网和风险防范、预警机制。对制药企业微生物污染的控制相关从业人员进行有计划的指导和培训为各类企业设定微生物风险控制水平目标，帮助企业建立微生物自查、预警和

34、防护体系建设微生物污染监控数据库，为药品监管部门提供监管依据，建立药品安全监管长效机制,对有条件的A类企业：要具备一定的分子生物学鉴定方法和完备的生化鉴定手段，能对环境微生物给出基本准确度鉴定结果； 对B类企业：要具备完善的生化鉴定体系，要能给出可靠的微生物生化谱； 对C类企业：基本要具有API试剂条鉴定条件和形态分析能力。逐步规范企业生产行为，将风险预警步骤前移至企业日常生产过程，并设立考核指标和文件记录体制，对监管部门常规检查提供资料和考核标准。,5.2 建立和健全日常监督检查方法,覆盖从原料到终产品的全过程监控,对空气采样共设置16个采样点 ，同时增设表面微生物采样点 表面细菌的测定采用

35、平板接触法，包括房间的门把手、操作人员操作服胸口和前臂处、手套、口罩、拖鞋底等 微生物随着操作人员更容易进洁净环境，最可能成为污染的主要来源,现阶段微生物检验技术突飞猛进，许多先进的检测方法经过了实践和时间的检验，已经具备了普及的条件在中国，许多技术已经被国家标准吸收和引进，如API试剂条、VIDAS筛选和VITEK鉴定但在我国很多地方应用这些技术还有相当的难度，更不用说引进更为先进的分子生物学设备省市一级药检所牵头，建立基层药检所初筛，上级药检所确认的建立辐射全国的监控体系,5.3 强化企业微生物风险管理意识,微生物污染涉及药品生产、流通和消费三大领域2008年“刺五加事件”及2009年“双

36、黄连注射液”事件促使全社会将关注药品微生物污染的管理和控制,通过建立监管部门的外部监督检查、企业内部自我提高和药检所提供技术保障的新模式，帮助广大医药企业建立自身的微生物风险评估体系和质量保证,一方面，制药企业通常在发现污染后只需对整个生产区域进行消毒，即可达到微生物检查标准，为监督执法制造了很大的难题另一方面，生产企业应加强微生物检验的自我提高，对监测出的微生物需进行鉴定，至少具备微生物“种”鉴定的能力另外，长期有规律的对环境微生物进行监控，了解环境中的微生物污染种类和变化趋势，并作为质量控制文件加以保存，对企业日常生产质量管理和监管机构的监督检查都是有益的补充各地药品检验所作为食药监局的技

37、术支撑可以在风险管理和新技术应用等方面对医药企业进行培训，帮助企业提高业务水平，强化企业微生物风险管理意识，全面提升我国医药行业从业人员技术水平,5.4 建立药品污染源通报、追踪平台，完善药品召回机制,借鉴药物不良反应报告机制，建立药品微生物分型标准，将各个检验机构药物微生物污染的标准数据源上传汇总，集中分析可以将同种药品送不同检验所协同比对 可以评估同类药品品种污染的严重性和散播范围，及时向各有关单位报告药品不合格检验品种微生物污染源分析方法为药品监管部门提供了评估生产企业生产中微生物污染信息的有效方法实时了解企业生产情况，防止出现企业伪造生产记录，给企业质量安全保障敲响警钟 可以规范和促进

38、企业的主动召回机制，为调查药品质量安全信息和保障人民用药安全保驾护航,5.5 帮助企业改进产品质量，打造医药安全公共研发平台,我国大多数企业的科研能力弱，加工环境差 帮助企业改善质量，推进我国医药事业的整体发展，提高人民用药安全性 帮助整个中国医药产业加速技术的更新换代,与企业建立技术上的合作、研发和指导机制，建立区域性的医药安全公共研发平台 集中政府和企业的双重优势，以最小的成本，创造最广泛的价值开发和应用途径 建立新的制药企业环境监管模式用以对现有监管方法进行补充和完善,2009年药学会科技奖,上海医药企业微生物污染的监督、管理和风险评估新模式的建立,三等奖,在上海市食品药品监督管理局的统一规划下，制定企业生产环境微生物科学采集方法，建立以企业定期自行微生物检查为主，政府监管部门外部督查为辅，在药品检验所的技术支撑下，敦促制药企业收集环境微生物信息，建立企业菌种信息库和污染源分布信息图，最终，健全上海制药企业的环境监控体系及污染溯源能力，为药品微生物风险评估和政府监管建立一种新的模式,上海市微生物污染的监管模式,,021-50798180 13816582686,