实验二 高效液相色谱法测定未知溶液中绿原酸的含量.doc
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1、实验二 高效液相色谱法测定金银花中绿原酸的含量【目的】1、学习高效液相色谱仪的结构及操作方法;2、掌握高效液相色谱法进行定性和定量的分析方法;3、掌握索氏提取法对目标物提取的方法。【概述】高效液相色谱法是以液体作为流动相的重要的一种色谱分析法。它选用颗粒很细的高效固定相,采用高压泵输送流动相,分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。除了有快速、高效的特点外,它能分离沸点高、分子量大、热稳定性差的试样。根据使用的固定相及分离原理不同,般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排斥色谱等。在分配色谱中,组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数 K:K
2、=组分在固定相中的浓度/组分在流动相中的浓度显然,K 越大,组分在固定相上的停留时间越长,固定相与流动相间的极性差值也越,因此,相应出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相液相色谱法和以流动相为极性而固定相为非极性物质的反相液相色谱法。目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上,即所谓的键合固定相。若将正构烷烃等非极性物质(如 nCN烷)键合到硅胶基质上。以极性溶剂(如甲醇和水)为流动相,则可分离非极性或弱极性的化合物。样品经进样系统注入到色谱仪,在色谱中进行分离分配,按时间顺序流出色谱柱,进入检测器,检测器将各组分的质量信号转变成电信号,得到色谱图,进行定性、定量分