1、蓖麻油酸乙酯有证标准样品的制备计划编号:GSB2003156主 管 单 位：国家质量监督检验检疫总局技术归口单位：全国标准样品技术委员会研 制 单 位：吉林出入境检验检疫局研 制 时 间：二 00 四年 二 00 六年国家实物标样项目报批材料1目 录1蓖麻油酸乙酯有证标准样品研制工作报告 12蓖麻油酸乙酯有证标准样品研制技术报告 63有证标准样品证书 194蓖麻油酸乙酯有证标准样品使用说明书 215附件 22查新项目报告书项目计划任务书2蓖麻油酸乙酯实物标样研制工作报告1 任务来源本实物标样的研制工作，是根据全国标准样品技术委员会下达的制标任务（计划编号 S2003156），由吉林出入境检验检
2、疫局起草研制的。2 目的和意义蓖麻（Ricinus communis）属大戟科植物，别名红麻、草麻、八麻子、牛蓖等，原产于埃及、埃塞俄比亚和印度，后来传播到巴西、泰国、阿根廷、美国等地，已成为当今世界十大油料作物之一的大田作物而广为栽培。目前蓖麻籽的最大生产国为印度，其次为中国、巴西和泰国。由于蓖麻种子含油率高达 46-56%，且蓖麻油具有粘度大、燃烧点高（在 500-600高温下不变质、不燃 烧）、凝固点低（零下 18的低温下不凝固）、比重大等特点，二十世纪初，随着航空工业、化工业、医药业的快速发展，蓖麻油已作为航空和精密仪器的高级润滑油、刹车油和防护油的原料之一，同时蓖麻油经脂化生成的甲脂
3、、丁脂，是生产润滑剂 、塑料、化 妆品、洗涤剂等的主要原料。因此，蓖麻油越来越广泛地应用于汽车、船舶、机床、建筑、军工、医 疗等行业制品中。美国、西欧等工业发达地区和国家，利用蓖麻油生成的化学衍生物已达 3000 多种。近些年，国际上对蓖麻油中一种特有的羟基脂肪酸：蓖麻油酸，即顺式-12-羟基-9 烯 -十八碳酸（ ricinoleic acid）的认识愈来愈多，以它为原料的研究、开发日益广泛。近期美国 FDA 已通过 以蓖麻油酸乙酯（顺式-12-羟基-9-烯- 十八碳酸乙酯）为前体合成新一类有着抗癌防癌的共扼脂肪酸。该种抗癌脂肪酸能改变一些癌细胞磷脂膜作用，从而阻断癌细胞正常吸收营养，是癌
4、细胞萎 缩得到遏制。蓖麻油中 羟基脂肪酸也可以生产制备昆虫、 飞蛾的信息素（pheromones）。它可以引诱捕获对植物及森林造成危害的飞蛾，是一种新型无公害的生物灭虫剂。蓖麻油酸乙酯有证标准样品是定性定量检测的重要标准物质，而任何关于蓖麻油酸乙酯的检测研究、提取分离研究、医药研究和 应用研究均需高纯度的标准物质以作为其研究的前提保证。目前，蓖麻油酸乙酯有 证标准样品由3SIGMA、Dr.Ehrenstorfer 等公司生产，价格极其昂 贵 。由于蓖麻油酸乙酯有证标准样品保存条件苛刻，开封后不宜长期保存，且 进口药品手续繁杂， 测试使用者多有不便。因此，本实物标样的研制成功，不 仅为检测研究、
5、医药研究、应用研究提供了标准物质的需求；其次其提取技术也将为生产企业提高产品质量、创造良好的经济效益；同时为检验检疫机构技术指导、服务出口企业提供技术上的支持。3 工作的主要内容3.1 前期准备工作由于该课题在任务下达时未配置研究经费，从而给该课题的按期完成带来了一定困难，后经向局科技处 申请批准，由吉林局自筹课题经费 3 万元，成立 课题研究小组，同 时为了配合本课题 的检测和研究工作，自行设计和组装了必需的实验装置，重金购买了 SIGMA 化学公司生 产的有证标准 样品，使本课题在人力、物力、 财力和技术上得以全面的保证。3.2 原料的选择本课题的制备原料采用的是通辽市通华蓖麻化工有限责任
6、公司生产的蓖麻油，其蓖麻油酸含量约为 30-35%左右。3.3 提取与分离脂肪酸的提取与分离是一种比较复杂和难度较高的技术，这是因为其一蓖麻油中脂肪酸的种类多达 10 余种，且其理化性质极为相似；其二蓖麻油酸乙酯具有1 个不饱和双键，光、热、氧以及金属离子 对其双键 氧化和分子间的聚合有着较大的不稳定影响；其三基源含量较低（蓖麻油酸含量仅为 30-35%左右），势必导致提取与分离技术多级化。关于蓖麻油中蓖麻油酸乙酯的提取与分离技术，从国内外文献报道来看，粗分离富集通常是采用二氧化碳临界萃取，低温冷冻分离，硝酸银溶液液-液萃取分离以及尿素包合分离；而精分离富集多采用高效液相制备色谱柱分离和柱层析
7、分离。从我们进行的大量实验工作经验以及各种文献查阅分析来看，低温冷冻分离或尿素包合分离和柱层析分离设备简单、成本较低，而且又能进行一般规模性性生产。因此我们对尿素包合分离和柱层析分离的技术方法，进行了大量细致的实验研究工作，并认真总结经验，努力摸索实验的相关性， 筛选 出实验条件和较适宜的反应4物料配比，从而为本课题的研究工作奠定了坚实基础。其制备工艺：皂化 尿素 乙酯化 硝 酸 银 -硅 胶氢氧化钾 包合分离 硫酸-乙醇 柱层析3.4 标准样品的定值3.4.1 定值方法及结果本蓖麻油酸乙酯有证标准样品的定值方法是采用具有严格的理论基础和高精密度水平的八种不同原理的权威测定方法来进行定性和定量
8、测试，即由气相色谱法、液相色谱法、红外光谱法、紫外光 谱法、气相色谱-质谱法、液相色谱-串联质谱法、核磁共振法、元素分析法等定性分析，确认该有证标准样品为蓖麻油酸乙酯纯品，由液相色谱法（外标法）或气相色谱-质谱法（归一化法）定量分析，确认该蓖麻油酸乙酯有证标准样品的含量在 98%以上。3.4.2 协作实验室本蓖麻油酸乙酯有证标准样品定值的协作实验室，均为国家级和行业级高水平权威实验室，分别为吉林 检验检疫局、国家 电化学和光谱研究分析中心、松 辽流域水环境监测中心、吉林省 卫生监测检验中心、吉林省产品质量监督检验院、黑 龙江检验检疫局、辽宁检验检 疫局、秦皇 岛检验检疫局、中国检验检疫科学研究
9、院。3.4.3 测试人员本蓖麻油酸乙酯有证标准样品定值的测试人员均为多年从事分析测试工作和具有熟练操作技巧的具有工程师以上的技术职称的专业技术人员，且定值的测试数据均为其单位上述两个或多个测试人员独立进行操作和使用不同的实验设备测试取得的。3.5 均匀性检验按标准样品的制备程序，对制备的蓖麻油酸乙酯标准样品进行了均匀性检验，在样品中选取一基本对比点，各分取六点样品，另 选 六个检验点，再各分取六点 样蓖麻油游离脂 肪 酸混 合 物70-80%蓖麻油酸蓖麻油酸乙酯98%蓖麻油酸乙酯5品，经正己烷溶解稀释后，用气相色谱-质谱法（归一化法） 进行蓖麻油酸乙酯含量值分析测定，将两组测定结果经 F 检验
10、法和 t 检验法进行检验， 结果表明检查点组和对比点组无显著性差异。3.6 稳定性检验本有证标准样品参考国外同等带证有证标准样品的稳定性期限规定说明（如美国 SIGMA 公司生产规定说明， 该有证标准样品在真空、避光、下贮存，稳定有效期为两年）为依据，以两年为期， 对制备的标准 样品分阶段每次取二份样品，按照不同保存条件进行其含量测定，每份样品以测定 4 次的平均值为其定值结果。依据上述测定方法分别计算结果，本蓖麻油酸乙酯标准样品在真空、避光、 下贮存，稳 定有效期为两年。附加说明：本标准样品的研制工作是根据 GB/T 15000.1GB/T 15000.5标准样品工作导则的程序和要求进行的。
11、6蓖麻油酸乙酯实物标样研制技术报告1 简介药物中文名称：蓖麻油酸乙酯药物英文名称：Ethyl ricinoleate ，Ricinoleic acid ethyl ester中文化学名称：顺式-12- 羟基-9- 烯-十八碳酸乙酯英文化学名称：cis-12-Hydroxy-9-enoic octadec acid ethyl esterCAS 化学登录号：-分子式：C 20H38O3相对分子质量：M=326.51化学结构式：222 有证标准样品的制备2.1 制备原料本课题的制备原料采用的是通辽市通华蓖麻化工有限责任公司生产的蓖麻油，其蓖麻油酸含量约为 30-35%左右。2.2 仪器设备2.2.
12、1 Agilent 5973 气相色谱-质谱仪（美国）2.2.2 JB90-型强力电动搅拌机(上海标本模型厂) 2.2.3 TC-15 套式恒温器(浙江新华医疗器械厂) 2.2.4 Eyela coolace cca-1100 旋转蒸发器(日本)2.2.5 SHB-B 型循环水式多用真空泵(郑州市上街区仪器厂) 2.2.6 高真空三级油扩散泵(自制) 2.2.7 玻璃层析柱：251.5cm2.3 试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水 为蒸馏水。2.3.1 氢氧化钾C2H5-O-C-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH=CH-CH2-CH-CH2-CH2-CH2-CH
13、2-CH2-CH3 O OH72.3.2 硫酸2.3.3 乙醇：无水乙醇。2.3.4 乙醚2.3.5 甲醇：优级纯。2.3.6 石油醚：60-90沸程。2.3.7 正己烷2.3.8 BHA：叔丁基-4- 羟基茴香醚。2.3.9 无水硫酸钠：650灼烧 4h，贮于密封容器中 备用。2.3.10 硝酸银2.3.11 硅胶：青岛海洋化工厂，层析用， 100200 目，180 烘干 4h，贮于密封容器中备用。2.3.12 高纯氮气：99.999%。2.3.13 对照品：蓖麻油酸乙酯标准品，纯度 99.5，SIGMA 公司提供。2.4 皂化称取 15 g 氢氧化钾于 1000-mL 三颈反应瓶中，加入
14、80 mL 水使之溶解，然后加入 120 mL 乙醇和 50 mg BHA，充分溶解混匀后，再加入 100 g 蓖麻油，继续混匀后，在充氮条件下，于 75恒温搅拌 1 h。待溶液冷却后，用 6 mol/L 硫酸液中和皂化液，使其 pH 值为 2 3，将全部皂化液移入分液漏斗中，用 2100mL 石油醚萃取，合并有机相，经无水硫酸钠柱脱水，于 40水浴中旋转浓缩，为游离脂肪酸液。2.5 尿素包合分离将 240g 尿素和 700mL 甲醇加入三颈反应瓶中，在充氮条件下，加热搅拌，待甲醇回流和尿素溶解后，再加入上述游离脂肪酸液，充分混匀后，冷却至室温，过夜。用布氏漏斗抽滤弃去尿素晶体，收集滤液经旋转
15、浓缩后，移入分液漏斗中，加入 200mL 蒸馏水，用 2100mL 石油醚萃取，合并有机相，经无水硫酸钠柱脱水，于 40水浴中旋 转浓缩，残液为蓖麻油酸粗品。2.6 乙酯化将 100 mL 无水乙醇加入三颈反应瓶中，小心加入 1 mL 硫酸，充分混匀后，再加入上述蓖麻油酸粗品，继续 混匀后，在充氮条件下，加 热回流 4 h，收集回流液经旋转浓缩后，移入分液漏斗中，加入 200mL 蒸馏水，用 2100mL 石油醚萃取，合8并有机相，经无水硫酸钠柱脱水，于 40水浴中旋 转浓缩，残液为蓖麻油酸乙酯粗品。2.7 层析柱分离2.7.1 层析柱的制备硝酸银-硅胶：称取 20 g 硝酸银于 1000-m
16、L 具塞蒸馏瓶中，加入 200 mL 乙醇-水（1+1 ）使之溶解，然后加入 100 g 硅胶，旋 转混匀 1 h 后，避光静置平衡 48 h 后105烘干去水活化，贮于密封容器中备用。装柱：于玻璃层析柱中，自下而上依次填装 2 cm 高无水硫酸钠，20 g 硝酸银-硅胶，2 cm 高无水硫酸钠，避光，使用前用 100 mL 石油醚预淋洗。2.7.2 层析步骤 称取 2 g 蓖麻油酸乙酯粗品加入硝酸银-硅胶层析柱中，然后依次各用 100 mL 1%、2%、5%、10%乙醚-石油 醚混合溶液进行洗脱，控制洗脱流速为 1 mL/min，并每 50 mL 收集一次洗脱液于气相色谱-质谱测定，合并蓖麻
17、油酸乙酯测定结果为98以上的洗脱液，于 40水浴中旋转浓缩至溶剂 干，再经高真空三级油扩散泵蒸干，得到的淡黄色液体即为蓖麻油酸乙酯有证标准样品。2.8 测试分析采用气相色谱-质谱测定，归一化法定量，蓖麻油中各脂肪酸成分含量及各制备提纯中蓖麻油酸乙酯的含量变化，详见表 1 及图 1、图 2、图 3。表 1 各脂肪酸成分含量()提纯方法序号 脂肪酸成分 蓖麻油低温冷冻分离 硝酸银硅胶 层析柱分离1234567891011C14:0C16:0C17:0C18:0C18:1C18:1C18:2C19:0C18:1（OH）C20:0C20:10.544.690.677.025.3320.1221.990
18、.2734.340.294.745.019.2212.0274.560.8198.561.449图 1. 蓖麻油的各脂肪酸成分色谱图图 2. 尿素包合分离后的各脂肪酸成分色谱图图 3. 硝酸银-硅胶层析柱分离后的各脂肪酸成分色谱图103 检定3.1 定性3.1.1 气相色谱定性3.1.1.1 仪器和色谱条件a. Agilent 6890 气相色谱仪配有氢火焰离子检测器；b. 色谱柱：30m0.53mm(id)，膜厚 0.10m，DB-5 石英毛细管柱；c. 色谱柱温度：程序升温 50(1min) 30/min 180(1min)10/min 270(10min)；d. 进样口温度：270；e.
19、 检测器温度： 280；f. 载气：氮气， 纯度 99.999%，3.0mL/min；g. 氢气：40mL/min；h. 空气：200mL/min；i. 尾吹气：氮气，纯度99.999%， 60mL/min；j. 进样方式：无分流进样，1.5min 后开阀；k. 进样量：1 L。3.1.1.2 色谱测定结果取本品与 SIGMA 公司提供的标准品， 经正己烷溶解后，在上述色 谱条件下分别等体积参插进样测定，本品与对照标准品的色谱保留值均完全一致，测定结果见表 2，气相色谱图见附件 1。3.1.2 液相色谱定性3.1.2.1 仪器和色谱条件a. Agilent 1100 液相色谱仪配有 DAD 检
20、测器；b. 色谱柱：Agilent Extend-C18 ，25 cm4.6 mm，5 m；c. 色谱柱温度： 30；d. 流动相：甲醇-水（60+40）；e. 流速：1.0 mL/min ；f. 进样 量：20 L 。3.1.2.2 色谱测定结果取本品与 SIGMA 公司提供的标准品， 经甲醇溶解后，在上述色 谱条件下分别等体积参插进样测定，本品与 对照标准品的色谱保留值均完全一致，测定结果见11表 2，液相色谱图见附件 2。表 2 气液相色谱和液相色谱定性保留值结果表HPLC GC定性方法 SIGAM 有证标准样品 本品SIGAM 有证标准样品 本品12.706 12.703 12.702
21、 12.710 13.731 13.730 13.726 13.72912.708 12.711 12.706 12.701 13.733 13.736 13.731 13.728保留时间测定值min 12.709 12.703 12.705 12.711 13.728 13.729 13.731 13.727平均值 XX1=12.707 X2=12.706 X1=13.731 X2=13.729保留时间参数标准偏差 S S1=0.0033 S2=0.0041 S1=0.0029 S2=0.0021t 检验t 表 0.05=2.101=0.46nt21tt 表 0.05，无显著性差异=1.37
22、nt21tt 表 0.05，无显著性差异F 检验F 表 0.05 =3.18=1.062小大SFFF Cr0.05,5,5，无显著性差异=1.912小大SFFF Cr0.05,5,5，无显著性差异3.1.3 紫外光谱定性3.1.3.1 仪器条件Agilent 1100 液相色谱仪配有 DAD 检测器。3.1.3.2 紫外光谱测定结果取少量本品与 SIGMA 公司提供的对照标准品， 经甲醇溶解后，在 3.1.2.1 条件下分别等体积参插进样测定，本品与对照标准品的紫外吸收光谱图分别在228、232、240、242、258 nm 的峰形和吸收波长相吻合，紫外光 谱图见附件 3。3.1.4 气相色谱
23、-质谱定性3.1.4.1 仪器和气相色谱-质谱条件a. Agilent 5973 气相色谱-质谱仪；b. 色谱柱：30m0.25mm(id)，膜厚 0.25m，DB-17 石英毛细管柱；c. 色谱柱温度：程序升温 50(2min) 30/min 180(1min) 10/min 270(5min)；d. 进样口温度：270；e. 色谱-质谱接口温度：260 ；12f. 载气：氦气， 纯度 99.999%，1.2mL/min；g. 进样方式：无分流进样，1.5min 后开阀；h. 电离方式：EI ；i. 电离能量：70eV ；j. 测定方式：全扫描方式；k. 扫描范围：35350amu；l. 进
24、样量：1 L。3.1.4.2 气相色谱-质谱测定结果取本品与 SIGMA 公司提供的对照标准品， 经正己烷溶解后，在上述气相色谱-质谱条件下分别等体积参插进样测定，本品与对照标准品的质谱图的分子离子峰和主要碎片离子峰均完全一致，气相色谱-质谱图见附件 4。3.1.5 液相色谱-串联质谱定性3.1.5.1 仪器和液相色谱-串联质谱条件a. API 4000 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源的两极串联四极杆质量选择检测器b. 色谱柱：Agilent Extend-C18 ，25 cm4.6 m，5 m；c. 流动相：甲醇 -水（60+40）；d. 电离方式：电喷雾 ESI；e. 扫描方式：正
25、离子 扫描，多反应监测 MRM；f. 电喷雾电压：5500V；g. 雾化气压力：0.21 Mpa，气帘气压力：0.088 Mpa，辅助气流速：0.062 Mpa；h. 离子源温度：550；i. Entrance Potential（EP）电 压 ：10V；Collision Cell Exit Potential(CXP)电 压 ：10V；j. 测定方式：全扫描方式；扫描范围：35350amu。k. 进样量：20 L；3.1.5.2 液相色谱-串联质谱测定结果取样品与 SIGMA 公司提供的对照标准品， 经甲醇溶解后，在上述液相色谱-串联质谱条件下分别等体积参插进样测定，本品与对照标准品的质谱
26、图的分子离子峰和主要碎片离子峰均完全一致，液相色谱-串联质谱图见附件 5。3.1.6 元素分析定性3.1.6.1 仪器条件13德国 Elementar 公司 Vario EL 元素分析仪。测试条件：燃烧炉温度 1150，还原温度 850，气体：高纯 He，高纯 O23.1.6.2 元素分析测定结果本品经元素分析测定，本品的 C、H 含量分别为 73.15%，11.66%；SIGMA 公司提供的对照标准品的 C、H 含量分别为 73.31%，11.62%；与蓖麻油酸乙酯的文献值（C、H 含量分别为 73.57%，11.73%）三者基本一致，元素分析结果见附件 6。3.1.7 红外光谱定性3.1.
27、7.1 仪器条件Bruker 公司 VERTEX70 型付立叶 变换红外光谱仪。测试条件：采用溴化钾压片，波数范围 4000-400cm-1，扫描次数 32 次。3.1.7.2 红外光谱测定结果取少量本品与 SIGMA 公司提供的对照标准品，制作溴化钾压片，进行红外光谱测定，根据本品红外解析及与对照标准品的红外吸收光谱图比较，其曲线形状和降位均完全一致，红外光谱检测报告见附件 6。3.1.8 核磁共振定性 3.1.8.1 仪器条件Bruker AV 600 核磁共振谱仪 ；1H 核磁共振：溶剂 CDCl13；参考谱线： TMS=0.0；13C 核磁共振：溶剂 CDCl13；参考谱线： CDC1
28、3=77.003.1.8.2 核磁共振测定结果本品经核磁共振测定，由一维 1H NMR 谱,攩 13C NMR 谱核磁共振据分析以及二维 1H-1H COSY 谱， 13C-1H 异核相关谱等实验证明，本品与蓖麻油酸乙酯的化学结构完全一致，核磁共振谱图见附件 6。3.2 定值3.2.1 液相色谱定量3.2.1.1 仪器和色谱条件a. Agilent 1100 液相色谱仪配有 DAD 检测器；b. 色谱柱：Agilent Extend-C18 ，25 cm4.6 mm，5 m；c. 流动相：甲醇 -水（60+40）， 流速：1.0 mL/min；d. 进样量：20 L。3.2.1.2 色谱测定1
29、4外标法定量：准确称取一定量的样品与 SIGMA 对照有证标准样品，经甲醇稀释定容后，在上述色谱条件下分别等体积参插进样测定，用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中蓖麻油酸乙酯纯度：杹 hcV X 100% （1）hsm 式中：X 蓖麻油酸乙酯纯度，%；h 本品样液中蓖麻油酸乙酯的色谱峰高，mm；c SIGMA 对照品标准液中蓖麻油酸乙酯的浓度，mg/mL；V 本品样液最终定容体积，mL；hs SIGMA 对照品 标准液中蓖麻油酸乙酯的色谱峰高，mm；m 最终样液所代表的试样量， mg。3.2.2 气相色谱-质谱定量3.2.2.1 仪器和气相色谱-质谱条件a. Agilent 5973 气相质
30、谱仪配有质量选择检测器（MSD ）；b. 色谱柱：30m0.25mm(id)，膜厚 0.25m，DB-17 石英毛细管柱；c. 其它与 3.1.4.1 条件相同。3.2.2.2 气相-质谱色谱测定面 积 归 一 化 法 定 量 ：准 确 称 取 一 定 量 的 样 品 ，经 正 己 烷 稀 释 定 容 后 ，在 上 述 色 谱条 件 下 进 样 测 定 ，用 色 谱 数 据 处 理 机 或 按 式 （2）计 算 试 样 中 蓖 麻 油 酸 乙 酯 纯 度 ：AiXi 100% （2）Ai 式中：Xi 蓖麻油酸乙酯纯度，%；Ai 蓖麻油酸乙酯组分的色谱峰面积；Ai 所有组分的色 谱峰面积之和。3
31、.2.2 定值结果和不确定度本蓖麻油酸乙酯有证标准样品经吉林出入境检验检疫局、国家电化学和光谱研究分析中心、松辽流域水 环境监测中心、吉林省 卫 生监测检验中心、吉林省 产品质量监督检验院、黑龙江出入境检验检疫局、 辽宁出入境检验检疫局、秦皇 岛出入境检验检疫局、中国检验检 疫科学研究院。依据上述两种测定方法进行测定， 测定15结果见附件 9，协作试验定值结果统计和不确定度见表 3，检定结果汇总见附件10。16表 3 协作试验定值结果表序号 协作试验实验室名称 定值方法 测试结果（%）平均值（%X）98.33 98.45 98.65 98.8898.99 98.34 98.26 98.1998
32、.87 98.56 98.43 98.63HPLC98.23 98.34 98.64 98.2998.5198.67 98.56 98.78 98.9098.54 98.45 98.99 98.3798.64 98.11 98.43 98.511 吉林出入境检验检疫局GC-MS98.34 98.87 98.84 98.8098.612 国家电化学和光谱研究分析中心 GC-MS 98.26 98.65 98.40 98.44 98.443 松辽流域水环境监测中心 HPLC 98.43 98.56 98.87 98.91 98.694 吉林省卫生监测检验中心 HPLC 98.34 98.56 98
33、.67 98.78 98.595 吉林省产品质量监督检验院 HPLC 98.54 98.66 98.40 98.38 98.506 黑龙江出入境检验检疫局 HPLC 98.71 98.56 98.79 98.34 98.607 辽宁出入境检验检疫局 GC-MS 98.67 98.45 98.39 98.45 98.498 秦皇岛出入境检验检疫局 GC-MS 98.74 98.65 98.34 98.50 98.569 中国检验检疫科学研究院 GC-MS 98.55 98.61 98.32 98.28 98.44总平均值 X=98.54PiX1总平均值（ ）的标准偏差 S =0.0256)(1P
34、ii总平均值（ ）的置信区间X（t=2.26，=0.05，v=9，P=10）t（P-1）S=98.540.52X定值结果：98.540.52%174 均匀性与稳定性检验憗4.1 均匀性检验在制备的标准样品中选取一基本对比点，取六份样品，另选六个检验点，各取一个样品，用气相色谱法进 行分析测定，将 测定结果分析统计， 检查点组和对比点组无显著性差异，即所测样 品是均匀的。 测定结果见 表 4。表 4 样品均匀性检验取样点 检查点 对比点98.45 98.65 98.71 98.63 98.61 98.45测定值（ %）98.30 98.54 98.34 98.28 98.45 98.78测定次数
35、 n n1=6 n2=6平均值 X 98.50 98.53标准偏差 S 0.165 0.176方差 S2 0.0272 0.0308F 检验F 表 0.05 =3.18=1.132小大SFFF Cr0.05,5,5，无显著性差异t 检验t 表 0.05=2.101=0.305nSXt21tt 表 0.05，无显著性差异4.2 稳定性检验本有证标准样品参考国外同等有证标准样品的稳定性期限规定说明（如美国SIGMA 公司生 产规定说明， 该有证标准样品在真空、避光、-4下贮存，稳定有效期为两年）为依据，以两年 为期， 对制备的标准样 品分阶段每次取二份样品，按照不同保存条件进行其含量测定，每份样品
36、以测定 4 次的平均值为其定值结果。依据上述测定方法分别计算结果，本蓖麻油酸乙酯标准样品在真空、避光、-4 下贮存，稳定有效期为两年，测定结果见表 5。18表 5 稳定性检验实验测定结果（% ）测定日期1 2 3 4 平均值2004.02.05 98.65 98.32 98.29 98.41 98.422004.02.12（一周） 98.77 98.54 98.87 98.48 98.672004.02.19（二周） 98.45 98.78 98.51 98.49 98.562004.03.06（一月） 98.80 98.41 98.72 98.61 98.642004.04.05（二月） 9
37、8.33 98.45 98.55 98.29 98.412004.05.08（三月） 98.67 98.54 98.60 98.29 98.532004.06.04（四月） 98.43 99.01 98.56 98.76 98.692004.08.08（六月） 98.78 98.34 98.40 98.41 98.482004.11.08（九月） 98.76 98.90 98.43 98.33 98.612005.02.09（十二月） 98.76 98.56 98.67 98.86 98.712005.05.08（十五月） 98.67 98.23 98.21 98.29 98.352005.0
38、8.06（十八月） 98.32 98.45 98.21 98.11 98.272005.11.05（二十一月） 98.35 98.76 98.54 98.25 98.482006.02.11（二十四月） 98.43 98.45 98.12 98.42 98.365 包装与贮存 5.1 标签内容：名称、批号、纯度、重量、有效期、制备单位。5.2 包装：100mg/瓶，内包装为玻璃瓶，外套 纸盒，内置说明书。5.3 贮存：本品在真空、避光、 -4下贮存。憙19参考文献1 标准样品工作导则 GB/T 15000.115000.52 D.斯沃恩主编 ,秦洪万主译.油脂化学与工艺学第四版(第一册) ,北
39、京:轻工业出版社,19893 R.T.莫里森.有机化学,北京:人民教育出版社,19834 冯光炷,张玉军.油脂化工产品工艺学,化学工业出版社 ,2005,194-2055 Wache Y, Laroche C, Bergmark K et al. Involvement of acyl coenzyme A oxidase isozymes in biotransformation of methyl ricinoleate into -decalactone by Yarrowia lipolytica J.Applied and Environmental Microbiology, 20
40、00, 66 ( 3 ):123312366 Berdeaux O, Christie W W, Gunstone F D, et al. Large-Scale Synthesis of Methyl cis-9, trans-11-Octadecadienoate from Methyl Ricinoleate J. J.Am.Oil.Chem.Soc.,1997,74(8):1011-1015.20国家标准样品证书中 华 人 民 共 和 国国 家 标 准 样 品 证 书GSB XXXXXXXX分析工作标准样品蓖麻油酸乙酯Working standard of analysis for R
41、icinoleic acid ethyl ester研制单位：吉林出入境检验检疫局定值日期：二 000 六年四月有效日期：二年2006 年 月 日 发布中国标准化管理委员会批准21标准样品的来源：蓖麻油酸含量约为 30-35%的蓖麻油。原材料的制造者：通辽市通华蓖麻化工有限责任公司。标准样品的制备方法：取适量粗蓖麻油，在充氮条件下，用氢氧化钾皂化水解为游离脂肪酸液。然后经低温冷冻分离得到蓖麻油酸含量约为 70%的粗品。再经甲醇-硫酸乙酯化，得到蓖麻油酸乙酯粗品。最后再 经硝酸银-硅胶层析柱分离，即可得到蓖麻油酸乙酯含量为大于 98%的纯品。标准样品的形状、规格和包装：本标准样品为淡黄色油状液体
42、。100mg/瓶，内包装为玻璃瓶，外套纸盒，内置说明书。均匀性：在整批样品中选取一基本对比点，取六份样品，另选六个检验点，各取一个样品，用液相色谱法进行分析测定，所得 测定结果用 F 检验和 t 检验作分析统计处理，计算结果小于 F 临界值和 t 临界值，表明检查 点组和对比点组无显著性差异，证明样品具有良好的均匀性。稳定性：本标准样品在真空、避光、 -4下贮存，控制有效期为二年。标准值和置信限：标准值 98.54%，置信限0.52%（ =0.05，p=9）。测定方法：液相色谱法或气相色谱-质谱法归一化法。预期用途：医药、工业品检测研究的有证标准样品。贮存：本标准样品在真空、避光、 -4下贮存
43、。研制单位：吉林出入境检验检疫局。验证单位：国家电化学和光谱研究分析中心、松辽流域水环境监测中心、吉林省卫生监测检验中心、吉林省产品质量监督检验院、黑 龙江出入境检验检疫局、 辽宁出入境检验检疫局、秦皇岛出入境检验检疫局、中国 检验检疫科学研究院。研制人：王明泰、牟峻、吴剑、韩大川、余元祥、李爱军、周晓、芦春梅。负责人：22蓖麻油酸乙酯标准样品使用说明书批号：蓖麻油酸乙酯标准样品使用说明书【中文名称】：蓖麻油酸乙酯【英文名称】：Ricinoleic acid ethyl ester【CAS 化学登录号】：【分子式】：C 20H38O3【相对分子质量】：326.51【化学结构式】：-【性质】：其
44、纯品为淡黄色油状液体，溶于大多数有机溶剂。遇热、光不 稳定，易氧化。【纯度】：98.540.52%【证书号】：GSB XXXX-XXXX【包装】：100mg/瓶，内包装为玻璃瓶，外套 纸盒，内置说明书。【贮存】：本品在真空、避光、 -4下贮存。【用途】：医药、工业品检测研究的有证标准样品。【有效期】：二年【研制单位】：吉林出入境检验检疫局C2H5-O-C-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH=CH-CH2-CH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3 O OH23附件目 录1附件 1：气相色谱法定性色谱图2附件 2：液相色谱法定性色谱图3附件 3：紫外光谱法定性
45、光谱图4附件 4：气相色谱-质谱法定性质谱图5附件 5：液相色谱-串联质谱法定性质图6附件 6：元素分析法定性报告红外光谱法定性报告及光谱图核磁共振法定性报告7附件 7：协作试验检测结果吉林检验检疫局国家电化学和光谱研究分析中心松辽流域水环境监测中心吉林省卫生监测检验中心吉林省产品质量监督检验院黑龙江检验检疫局辽宁检验检疫局秦皇岛检验检疫局中国检验检疫科学研究院8附件 8：检定结果汇总 1824附件 1本品气相色谱法定性色谱图SIGMA 标准品气相色谱法定性色谱图25附件 2本品液相色谱法定性色谱图SIGMA 标准品液相色谱法定性色谱图26附件 3本品紫外光谱图SIGMA 标准品紫外光谱图27附件 4本品气相色谱质谱图SIGMA 标准品气相色谱质谱图28附件 5本品液相色谱-串联质谱质谱图SIGMA 标准品液相色谱-串联质谱质谱图29附件 6元素分析法定性报告、红外光谱法定性报告及光谱图、核磁共振法定性报告
