1、肠道菌群分离培养1、大肠杆菌培养基(EMB) (伊红美兰琼脂成品培养基):蛋白胨 10g、乳糖 5 g、K 2HPO4 2g、伊红 Y 0.4g、美兰 0.065g、水 1000ml、PH 7.2。DHL 培养基:成分及调整方法:Meat extrct 3100g,蛋白胨 20g,乳糖 10g, 蔗糖 10g,脱氧胆酸钠 1g,Sodium thiosrlfate 2.30g,柠檬酸氨 1g, 柠檬酸钠1g,中性红 0.03g,琼脂 15g,蒸馏水 1000ml,pH7.4 ,将以上成分加温溶解,倒平板。培养基长期放置(3 周以上),分注前有必要灭菌。2、链球菌培养(TATAC):蛋白胨 15
2、g、胰蛋白胨 10g、 酵母浸膏 10g、蔗糖 1g、七叶苷 1g、 琼脂 16g、蒸馏水 1000ml,PH 7.67.8,马血清 50ml。TATAC 添加液 22m l,TA TAC 添加液 20m l。将马血清及各添加液以外的成分加温溶解, 将其pH 调整至7.6 - 7.8后,121.3 20min 灭菌。待其冷至50左右, 加入马血清及各添加液,充分混合后,分注于平皿中。添加液 :叠氮钠 0.45g,谷氨酸钠 30g,蒸馏水 100ml溶解:100 30min 煮沸,冷藏添加液:吖啶橙 0.01g、TTC 0.1g、结晶紫(0.65%液)1.0ml、硫酸亚铊1.65g,蒸馏水 10
3、0ml,溶解后冷藏3、葡萄球菌培养基(BP): 营养琼脂粉 41g、氯化理 5g、苯乙醇 2.5ml、卵黄液 50ml、精制水 1000ml。 (10%15%NaCl)将卵黄液以外的成分加温溶解后,121.3 20 分钟灭菌。待其冷至 50左右,加入卵黄液,充分混合后,分注于平皿中。葡萄球菌选择性培养基(Mannitol salt agar 高盐甘露醇):牛肉膏 1.0 g、蛋白胨 10.0g、NaCl 75.0g、甘露醇 10.0g、酚红 0.025g、琼脂 15.0g、蒸馏水1000ml、PH 7.5 4、酵母菌选择性培养基:土豆浸出液 4.0g、葡萄糖 20.0g、琼脂 15.0g、蒸馏
4、水1000ml,PH 6.0,制作方法:加热溶解 PH 调整 灭菌、加入 10%酒石酸14ml5、Lbs (LC) (乳杆菌培养基):琼脂 25g,蛋白胨 10g,肉膏 10g,酵母浸膏5g,葡萄糖 20g,吐温-80 lml,K 2HPO4 2g,醋酸钠 5g,柠檬酸三氨2g,MgSO 47 H2O 200mg,MnSO 44 H2O 50mg,醋酸 3.7ml,精制水 1000ml。 加热溶解修正 PH6.0 至 6.5,121.3,20 分钟灭菌。待冷至 50左右,加入醋酸。充分混合后,分注于平板。6、优杆菌选择性培养基(CS 培养基):成分及调整方法:基础 EG 培养基1000ml,
5、CS 添加液 50ml,L-半胱氨酸HClH 2O 0.5g,马血(羊血)50m l。充分混合后,分注于平皿中。CS 添加液:丙酸钠30g,用约 80ml 的灭菌蒸馏水溶解。将硫酸新霉素0.4g、粘菌素0.02g、硫酸链霉素1.0g、蒸馏水100ml溶解后,加入烧瓶中。再用灭菌蒸馏水将液体的总量补至100ml。7、VS(韦荣氏小球菌):胰胨 5g,酵母浸膏 3g,硫乙醇酸钠 075g ,煌绿(0.1)lml,吐温-80 1g,50乳酸钠 25ml,琼脂 20g,夹竹桃霉素(1)3ml,羊血 50ml,PH7 5。后两者后加,倒成平板。8、PMS(消化球菌、巨球形菌选择培养基):EG 琼脂培养基
6、 1000ml,PMS添加液 10ml。PMS 添加液:结晶紫 70mg,无色粘菌霉素 50mg,溶于 100ml 精制水内。9、Bds(类杆菌选择性培养基): 配方一:EG 琼脂培养基 1000ml,Bds+添加液 50ml。EG 琼脂培养基:牛心浸液 930ml,胰胨 10g,酵母浸膏 5 g,Na 2HPO4 4g,葡萄糖 0.5g,可溶性淀粉 0.5g,L-半胱氨酸 0.2g(预先用 110N HCl 溶解) ,琼脂 20g,L 一半胱氨酸HCIH 2O 0.5g,羊血 50ml, pH7.6 至 7.8。除 L 一半胱氨酸及羊血以外的成份,加热溶解修正 PH,121.320 分钟灭菌
7、,冷至 50C时,加 L-半胱氨酸及血。Bds 添加液:牛磺胆酸钠 5g,加入 80ml 温水中使之溶解,然后加 0.5煌绿水溶液 l ml和新霉素 1g,再以 10NaOH 调 PH 使液体呈透明的绿色为止。最后用精制水加至100ml。配方二:10、梭状芽孢杆菌选择性培养基(NN 培养基):蛋白胨 40g、Na 2HPO4g、KH 2PO4 1.0g、NaCl 2.0g、MgSO 4 0.1g、葡萄糖 2.0g、琼脂 25g、蒸馏水 1000ml。PH 7.6制作:加热溶解PH 调整灭菌添加液:纯卵黄液 50ml、硫酸新霉素(2%)10ml 混匀11、梭菌选择性培养基(Clostrisel
8、琼脂)?Cd(RCN) (梭菌选择性培养基):EG 琼脂 1000ml,吐温 80 0.5g,1利福平(RifamPicin)0.5ml,1粘杆菌素(Colimycin) l ml, 1新霉素 20 ml, pH7.6。除血、抗菌素外,加热溶解,冷至 50时,再加血及抗菌素。制备:水浴中加热溶解,调 PH7.0,121.3灭菌 15 分钟12、EC(肠球菌培养基):胰胨 2g,酵母浸膏 0 05g ,葡萄糖 0.2g ,Na 2HPO4 004g,KH 2PO4 0.04g,琼脂 2g,精制水 100ml,PH74。加热溶解修正 PH,8 磅 15 分钟灭菌,冷至 4550时加 NaN3,TT
9、C。NaN 3 40mg(04mgml)和 TTC10mg(0.1mgml) 。13、BS(改良法)双歧杆菌选择培养基:西红柿汁(500g 西红柿加 1000ml 水,熬成粘稠汁,纱布过滤,而后滤纸过滤,高压灭菌,4保存)200ml,蛋白胨 15g,酵母浸膏 6g,葡萄糖 20g,NaCl 5g,吐温 80 1g,可溶性淀粉 0.5g,琼脂20g,精制水 800ml。 溶解后,冷至 50C 左右时,加 BS 添加液 50ml,倒平板,PH6.8。BS 添加液:丙酸钠 30g 加 90ml 水,充分溶解,然后加新霉素 400mg,巴龙霉素 100mg,氯化理 6g,最后加精制水至 100ml,冰箱内保存。14、FS (梭杆菌选择性培养基):EG 1000ml,FS 添加液 10ml。FS 添加液:结晶紫 70mg,万古霉素 50mg,硫酸新霉素 300mg,溶于弱碱性水中,总量 100ml。15、稀释液配制:KH 2PO4 4.5g Na2HPO4 6g ,L-半胱氨酸 0.5g,吐温-80 0.5g,琼脂 1g,精致水 1000ml,121.3 20 分钟灭菌,备用。