1、 生 物 化 学 实 验 报 告 姓 名： 学 号： 专 业 年级 ： 2012 医学 组 别： 第 六 实验 室 生 物化 学与 分子 生物 学实 验教 学中 心 一、 实验室规则 1 实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。 2 进入实验室必须穿白大衣。 严格遵守实验课纪律， 不得无故迟到或早退。 不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。 实验室内禁止吸烟、用餐 。 3 严格按操作规程进 行实验 。 实 验 过 程 中 自 己 不 能 解 决 或 决 定 的 问 题 ， 切 勿盲目处理，应及时请教指导老师。 4 严格按 操 作 规 程 使 用 仪 器 ， 凡 不 熟 悉
2、操 作 方 法 的 仪 器 不 得 随 意 动 用 ， 对 贵重的精密仪器必须先熟知使用方法， 才能开始使用； 仪器发生故障， 应立即关 闭电源并报告老师，不得擅自拆修 。 5 取用试剂时必须“随开随盖” ， “盖随瓶走” ，即用毕立即盖好放回原处， 切忌“张冠李戴” ，避免污染 。 6 爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度 。 7 注意水、电、试剂 的使用安全 。 使 用 易 燃 易 爆 物 品 时 应 远 离 火 源 。 用 试 管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。 任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在 实验台上。 8 废
3、纸及其它固体废 物严禁倒入水槽，应倒 到垃圾桶内 。 废 弃 液 体 如 为 强 酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入水槽内，并放水冲走。 9 以实事求是的科学 态度如实记录实验结果 ，仔细分析，做出客观 结论。 实验失败， 须认真查找原因， 而不能任意涂改实验结果。 实验完毕， 认真书写实 验报告，按时上交。 10 实验完毕， 个人应 将试剂、 仪器器材摆放 整齐， 用过的玻璃器皿 应刷洗 干净归置好，方可离开实验室 。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理， 保持实验整洁卫生。 离开实验室前检查 电源、 水源和门窗 的安全等， 并严格执行 值日生登记制度 。 二、实验报告的基本要求 实验报
4、告通过分析总结实验的结果和问题， 加深对有关理论和技术的理解与 掌握，提高分析、综合、概括问题的能力，同时也是学习撰写研究论文的过程。 1实验报告应该在专用的生化实验报告本上、按上述格式要求书写。 2 实验报告的前三部 分 实验原理、 实 验 材 料 （ 包 括 实 验 样 品 、 主 要 试 剂、主要 仪器与 器材） 、 实验 步骤（ 包括实 验流程与 操作步 骤）要 求在实验课 前预习后撰写， 作为实验预习报告的内容。 预习时也要考虑 并设计好相应实验记 录的表格。 3每项内容的基本要求 （1 ）实验原理：简明 扼要地写出实验的原理 ，涉及化学反应时用化 学反应 方程式表示。 （2 ）实验
5、材料：应包 括各种来源的生物样品 及试剂和主要仪器。说 明化学 试剂时要避免使用未被普遍接受的商品名和俗名。试剂要标清所用的浓度。 （3 ）实验步骤：描述 要简洁，不能照抄实验 讲义，可以采用工艺流 程图的 方式或自行设计的表格来表示， 但对实验条件和操作的关键环节应写清楚， 以便 他人重复。 （4 ）实验记录：包括 主要实验条件、实验中 观察到的现象及实验中 的原始 数据。 （5 ） 结果 （定量实验包 括计算） ： 应把所得的实验结果 （如观察现象） 和数 据进行整理、 归纳、 分析、 对比， 尽量用图表的形式概括实验的结果， 如实验组 与对照组实验结果的比较表等( 有时对实验结果还可附以
6、必要的说明) 。 （6 ）讨论：不应是实 验结果的重述，而是以 结果为基础的逻辑推论 。如对 定性实验， 在分析实验结果的基础上应有中肯的结论。 还可以包括关于实验方法、 操作技术和有关实验的一些问题， 对实验异常结果的分析和评论， 对于实验设计 的认识、体会和建议，对实验课的改进意见等。 （7 ）结论：一般实验 要有结论，结论要简单 扼要，说明本次实验所 获得的 结果。 三 、实验报告的评分标准（百分制） 1 实验 预习报 告内 容（30 分） 学生进入实验 室前应预 习 实验，并书写 预习报告 。 实验预习报告 应包括以 下 三部分： 实验 原理（10 分 ） ：要 求以 自 己的语 言归
7、 纳要 点； 实 验材料 （5 分） ： 包括 样品 、试剂 及仪 器。 只列 出 主要仪 器、 试剂 （常 规材 料不列 ） ； 实 验方 法 （15 分） ： 包括 流程 或路 线、 操 作步骤 ， 要 以流 程图 、 表格式 给出 要点 ，简 明扼 要。依 据各 部分 内容 是否 完整、 清楚 、简 明等 ，分 以下三 个等 级给 分。 优秀 合格 不合格 3025 2418 分 170 分 优秀： 项目 完整 ，能 反映 实验者 的加 工、 整理 、提 炼。 合格： 较完 整， 有一 定整 理，但 不够 精炼 。 不合格 ：不 完整 、缺 项， 大段文 字， 完全 照抄 教材 ，记流
8、水账 。 实验预习报告不合格者， 不允许进行实验。该实验 应重新预约，待实验室安 排时间后方可进行 实验。 2 实 验记 录内容 （20 分） 实验记 录是 实验 教学 、科 学研究 的重 要环 节之 一， 必须培 养严 谨的 科学 作风 。 实验记录的主要内容包括 以下三方面： 主要实验 条件（如材料的来源、质 量；试剂的规格、 用量、 浓度；实验时间、 操作要点中的技巧、失误 等，以便总结实验时进行 核对和作为查找成败原 因的参考依据） ； 实验中 观察到的现象（如加入试 剂后溶液颜色的变化 ） ； 原始实验数据：设计 实验数 据表 格 （ 注意 三线 表格式 ） ， 准 确记 录实 验中
9、 测得的 原始 数据 。 记 录测 量值时 ， 要 根据 仪器 的 精确度 准确 记录 有效 数字 （如吸 光值 为 0.050 ，不 应 写成 0.05 ） ，注 意有 效数 字 的位数 。 实验记录应在实验过程中 书写；应该用钢笔或者圆 珠笔记录，不能用铅笔。 记录不可擦抹和涂 改，写 错时 可以 准确 划去 重记 。 记录 数据 时请 教师 审核并 签名 。 实验记 录分 以下 三个 等级 给分。 优秀 合格 不合格 2017 1613 分 120 分 优秀：如实详细地记录了 实验条件、实验中观察到 的现象、结果及实验中的 原始数据（如三次 测定的吸光度值）等；实 验记录用钢笔或者圆珠笔
10、 记录，没有抹擦和涂改迹 象。书写准确，表格规 范（三 线表 ） 。 有教 师的 签 字审核 。 合格：记录了主要实验条 件，但不详细、凌乱；实 验中观察到的现象不细致 ；原始数据无涂改 迹象， 但不 规范 。有 教师 的签字 审核 。 不合格 ： 记 录不 完整 ， 有 遗漏； 原始 数据 有抹 擦和 涂改迹 象、 捏造 数据 （以 0 分计 ） ； 图 、 表 格 形式错 误； 用铅 笔记 录原 始数据 ；无 教师 的签 字审 核。 若记录的结果有怀疑 、遗 漏、丢失，必须重做 实验 ，培养严谨的科学作 风。 3 结 果与 讨论（45 分） （1） 数据 处理 （5 分） 对实验中所测得的
11、一系列 数值，要选择合适的处理 方法进行整理和分析。数 据处理时，要根据 计算公式正确书写中间计 算过程或推导过程及结果 ，得出最终实验结果。要 注意有效数字的位数、 单位（ 国际 单位 制） 。经 过 统计处 理的 数据 要 以 X SD 表 示。 可分 成以 下三 个 等级给 分。 优秀 合格 不合格 5 分 4 分 30 分 优秀： 处理 方法 合理 ，中 间过程 清楚 ，数 据格 式单 位规范 。 合格： 处理 方法 较合 理， 有中间 计算 过程 ；数 据格 式单位 较规 范。 不合格 ：处 理方 法不 当； 无中间 过程 ；有 效数 字的 位数、 单位 不规 范。 （2） 结果 （
12、20 分） 实验结果部分应把所观察 到的现象和处理的最终数 据进行归纳、分析、比对 ，以列表法或作图 法来表 示。 同时 对结 果还 可附以 必要 的说 明。 要注意图表的规范：表格 要有编号、标题；表格中 数据要有单位（通常列在 每一列顶端的第一 行或每 一行 左端 的第 一列 ） 。 图也 要有 编号、 标题 ， 标注在 图的 下方 ； 直 角坐 标图的 纵轴 和横 轴要 标 出方向、名称、单位和长 度单位；电泳图谱和层析 图谱等 要标明正、负极方 向及分离出的区带、色 带或色斑的组分或成分。 电泳结果还要标记泳道， 并在图题下给出泳道的注 释；要标出分子量标准 的各条 带的 大小 。并
13、且注 意需要 结合 图表 对结 果进 行较详 细的 解释 说明 。 可分成 以下 三个 等级 给分 。 优秀 合格 不合格 2017 1613 分 120 分 优秀： 实验 结果 有归 纳、 解释说 明， 结果 准确 ，格 式规范 。 合格： 堆砌 实验 现象 、数 据，解 释说 明少 。 不合格 ：最 终实 验结 果错 误且无 解释 说明 ，图 表、 数字不 规范 。 （3） 讨论 （20 分） 讨论应 围绕 实验 结果 进行 ，不是 实验 结果 的重 述， 而是以 实验 结果 为 基 础的 逻辑推 论， 基本 内 容包括 ： 用已 有的 专业 知识理 论对 实验 结果 进行 讨论， 从理
14、论上 对实 验结 果的各 种资 料、 数据 、 现象等 进行 综合 分析 、解 释，说 明实 验结 果， 重点 阐述实 验中 出现 的一 般规 律与特 殊性 规律 之间 的 关系； 实 验结 果提 示了 哪些新 问题 ，指 出结 果与 结论的 理论 意义 及其 大小 ； 对 实践 的指 导与 应 用价值 ； 实验 中遇 到的 问题、 差错 和教 训， 与预 想不一 致的 原因 ，有 何待 解决的 方法 ，提 出在 今 后的实 验中 需要 注意 和改 进的地 方； 实 验目 的是 否达到 。 同时能 结合 查阅 的其 他文 献等资 料进 行讨 论， 有 独 到的见 解。 在实验 结果 和 理论分
15、 析的 基础 上， 经过推 理， 归纳 规律 得出 结论。 结论 要严 谨、 精炼 ，表达 要准 确， 与实 验目 的呼应 。 也 分三 个等 级 给分。 优秀 合格 不合格 2017 1613 分 120 分 优秀： 分析 实验 结果 的问 题与经 验； 分析 实验 设计 的优劣 ； 能 提出 实验 技术 、 方法 的改 进意 见； 能结合 自己 查阅 的其 他资 料来讨 论， 有自 己独 到的 见解； 有结 论。 合格： 仅针 对实 验结 果进 行讨论 ，有 一定 自己 的见 解。 不合格 ：将 讨论 写成 注意 事项分 析或 回答 思考 题等 ，与实 验结 果无 关。 4 格 式与 版面
16、（5 分） 按照实 验报 告的 书写 格 式 、版面 是否 整洁 、工 整， 分三个 等级 给分 。 优秀 合格 不合格 5 分 4 分 30 分 优秀： 实验 报告 字体 工整 ，版面 整洁 。 合格： 实验 报告 字体 较 工 整，版 面 较 整洁 。 不合格 ：实 验报 告 字 体潦 草，版 面凌 乱。 5. 加 分（510 分） ： 以全英 文书 写实 验报 告视 情况 加 510 分。 Introduction to Biochemistry Experiment Biochemistry experiment is a preclinical curriculum of omni-
17、specialties in biomedicine and an experimental curriculum for going with biochemistry teaching. Its task is to help students to understand and master the basic technical principles and methods in biochemistry, to possess the abilities of analyzing problems and working out solutions independently. By
18、 learning this curriculum, the students should understand the basic experimental principles of spectrophotometry ，chromatography, electrophoresis and centrifuge, et al. ，master the basic technical skills commonly used with these principles and possess the abilities to apply the skills systematically
19、 and to optimize the experiment conditions. The goal of biochemistry experiment is to make the students strengthen their grasp of the biochemistry theories and to integrate what they have learned with scientific research and clinical application. There are 9 experiments that represent most important
20、 areas of biochemistry including characterization of proteins and nucleic acid by electrophoresis and spectroscopic or chromatographic analysis. These experiments are essential for a typical one-semester course and are to be revised and updated when necessary. New experiments will be added to this l
21、ist in the future to cover more topics of biochemistry and to reflect the many advances in biochemistry. Biochemistry Laboratory Rules 1Pre-Laboratory Preparation All students must prepare BEFORE ARRIVING IN THE LABORATORY. The experiments are designed so that they can be carried out with proper adv
22、ance planning within the four-hour laboratory periods. It is expected that students should have a fundamental understanding of the theory and practices pertaining to the experiment before entering the laboratory to conduct these experiments. Biochemical experiments often employ toxic chemicals. For
23、the health and safety of all students, the experimental protocols must be studied and the days activities should be planned in advance. If it becomes obvious that a student is ill-prepared, he or she will not be permitted to continue the experiment. 2Safety Precautions in the Biochemistry Laboratory
24、 All INJURIES, no matter how minor, should be reported to the instructor IMMEDIATELY. If you have any questions regarding the safe handling of any biochemical, consult your instructor. 3Strictly follow the experimental procedures. Turn to instructors immediately for help once the laboratory instrume
25、nts dont work. DONT try to fix the breakdown by yourself. Proper compensation for loss because of your own fault will be demanded. 4Disposal of Solutions In most cases the solutions used during the laboratory can be disposed of as directed by laboratory personnel at the end of the period. Any volati
26、le organic solvents should be placed in the hood as directed. Laboratory personnel will then dispose of these solvents. 5Solid trashes including waste papers are prohibited to discard into the sink. 6All the glassware should be cleaned immediately after use. And all the reagent bottles and instrumen
27、ts should be placed neatly after use. 7An experiment report should be submitted to the Professor and/or TAs in time. Laboratory Report 1Although students will work in pairs for all experiments, each student must turn in an individual laboratory report, written by himself or herself. These reports sh
28、ould be clearly written in ink, typed, or printed and be clear and legible. If mistakes are made, neatly cross them out and enter the corrections nearby. Reports should be written in the third person (e.g., do not use I or we). STAPLE a Title Page to the top of the report and STAPLE the accompanying
29、 graphs, tables, and laboratory notebook sheets to the back. If the report is not clearly presented, the instructor may return the report without grading it. 2Each laboratory report should consist of: a. Title Page A title page for each experiment is required and should state the title of the experi
30、ment, the name of the student, the dates of the laboratory periods covered, the names of the laboratory partners, and the date that the laboratory report is due. b. Objectives Statement of the point of the experiment - in no more than two sentences. c. Procedures DO NOT recapitulate the laboratory p
31、rotocol. Write in you OWN words. A clear flowchart of the procedures is recommended. d. Results This section should summarize your observations presented in the form of graphs, calculations, tables, etc. e. Discussion Evaluate your data. Explain what you observed and also why you think the data were
32、 as observed. Do not restate procedures! List possible sites of error. Whenever possible demonstrate your understanding of the theory behind the experiment. Support your results (e.g.: Using the linear portion of the Absorbance vs. Concentration graph to calculate the slope, it was determined that.)
33、 (Limited to only one page per experiment for experiments 1 - 6 and four pages for experiment 7-9). 3 If any laboratory report is not completed and turned in by the end of the quarter, the student maybe receive an Incomplete for the course at the discretion of the instructors; alternatively a zero f
34、or the missing laboratory report will be recorded and the final grade determined accordingly. 实验名 称 (Title of Experimetn) Folin- 酚试剂法测定蛋白质含量 实验日 期 (Date of Experiment) 2013-10-18 实验地 点 (Lab No.) 第六实验室 合作者 (Partner) 指导老 师 (Instructor) 总分 (Total Score) 教师签 名 (Signature) 批改日 期 (Date) 【 实 验 报 告 第一 部 分 （
35、 预 习 报 告 内 容 ） ： 实验 原 理 、 实验 材 料 （包 括 实 验 样品 、 主 要试剂、 主要仪器与器材） 、 实验步骤 （包括实验流程、 操作步骤和注意事项） ； 评分 （ 满分 30 分） ：XX 】 1、实 验原 理：（ 1） 蛋白质 分子含有大量彼此相连的肽键 （-CO-NH-）， 同样能在碱性条 件下与 Cu2+ 发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物（蛋白质- Cu2+ 复合物） 。且在 540nm 处的吸光度与蛋白质的含量在 10120g/L 范围内有良好的线 性关系 。 （2 ） Folin- 酚试剂在 碱性条件下极不稳定， 其磷钼酸盐- 磷钨酸盐易被酚类化合物还
36、原 而呈蓝色反应( 钼蓝和钨蓝的混合物) 。由于蛋白质中含有带酚羟基的酪氨酸( Tyr ) ，故 有 此 显 色反 应 。 即 蛋白 质- Cu2+ 复合 物 中所含 的 酪 氨酸 残 基还 原 酚试 剂 中 的磷 钼 酸 和 磷钨酸，生成蓝色的化合物。 （3 ） 在 一 定 浓 度 范围 内 ， 蓝 色 的 深 浅 度与蛋 白质浓度呈线性关 系 ，故与同样处理的 蛋白质标准液比色即可求出蛋白质的含量。 即根据预先绘制的标准曲线求出未知样品中 蛋白质的含量。 2、实 验材 料: 样品 健康人血清 （正常人血清蛋白质含量：6080 g/L ） 试剂 1.牛血清白蛋白标准液（200g/ml ） 2
37、.碱性硫酸铜溶液（当日有效） 3.Folin- 酚试剂 仪器与器材 1.V-1100 分光光度计 2.恒温水浴箱 3.试管 6 支、试管架 4.加样枪、加样枪架 3、实 验步 骤 ：Folin- 酚试 剂法测定蛋白质实验流程如表所示 步骤 操作 （1 ）反应体 系设置 取 6 支试管，做好标记，按下表加入试剂，混匀 试剂 （ml） 空白管 标准管 样品管 1 2 3 4 5 6 牛血清白蛋白标准液 - 0.2 0.4 0.6 0.8 - 样品液 - - - - - 0.5 蒸馏水 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.5 （2 ）双缩尿 反应 向各管内分别加入碱性硫酸铜溶液 2ml ，混
38、匀，室温放置 10min (3) Folin- 酚 显色反应 再向各管内加入 Folin- 酚试剂 0.20ml, 2s 内迅速混匀！ 40水浴放 置 10min 后，冷却至室温 （4 ）比色测 定 以 500nm 波长比色， 用 1 号管作空白，读取各管吸光度 4、 注 意事 项 ： （1）Folin- 酚试剂在酸性条件下较稳定， 而碱性硫酸铜试剂是在碱性条件 下与蛋白质作用生成碱性的铜- 蛋白质溶液。 故当 Folin- 酚试剂加到 碱性的铜- 蛋白质溶 液中后， 必须立即混匀 （加一管混匀一管） ， 使还原反应发生在磷钼酸- 磷钨酸试剂被破 坏之前 (2) 因 Lowry 反应的显色随时
39、间 不断加深， 因此各 项操 作必须精确 控制时 间。 即第 1 支试管加入 2.0mL 碱性硫酸铜试剂 后， 开始计时，1 分钟后， 第 2 支试管加 入 2.0mL 碱性硫酸铜试 剂，2 分钟后加第 3 支试管 ，以此类推。 全部试管加完碱性硫酸铜试剂后若已到 10 分钟， 则第 1 支试管可立即加入 0.20mL Folin- 酚试剂，1 分钟后第 2 支试管加入 0.20mL Folin- 酚试剂，2 分钟后加第 3 支试管，以此 类推。水浴 10min ，冷却后，每一分钟测一管。 （3 ）有关干扰物质：凡是能干扰 双缩脲反应的基团以及 在性质上是氨基酸 或肽的缓冲剂。 此外， 所测的
40、蛋白质样品中， 若含有酚类及柠檬酸， 均对此反应有干扰 作用。 若样品酸度较高， 也许提高碳酸钠- 氢氧化钠浓度 1-2 倍， 这样既可纠正显色后色 浅的弊病。 (4) 分光光 度计使用的注意事项： 比色杯应相匹配性， 不得随意挪用； 盛液 达到比色杯的 3/4 即可，不能太满，外壁如有液体，只能用滤纸蘸去水分再用镜面纸搽 拭干净；测毕，比色液一般应倒回原试管中，计算无误后方可倒掉。 【 实 验 报 告 第二 部 分 （ 实 验 记 录）： 主 要实验 条 件 （ 如 材料 的 来 源、 质 量 ； 试 剂的 规 格、 用量、 浓度； 实验 时间、 操作要点中的技巧、 失误等， 以便总结 实验
41、时进行核对和 作为查找成败原因 的参 考依据） ； 实 验中 观察 到 的 现 象 （ 如 加入 试剂 后 溶 液 颜 色 的 变 化） ； 原始实验数据。 评 分（ 满分 20 分） ：XX 】 1、主 要实 验条件 ： （1） 牛 血清白蛋白标准液： 称取牛血清白蛋白粉末 50mg，用 0.1mol/L NaOH 溶液溶解，再加 蒸馏水 （2）硫酸铜溶液： 3 2 CO Na 溶于 100ml 0.1mol/L NaOH 中 O .5H CuSO 2 4 0.5g 溶于 100ml 35mmol/L 酒 石酸钾 钠中 使用前将两种物质按 50:1 混合即成。使用时需新鲜配制 （3 ）Fol
42、in- 酚 试 剂 ： 溶 液 呈 黄 色 （ 如 带 绿 色 则 不 能 用 ） ， 保 存 于 棕 色 瓶中置冷暗处备用。如配置时间较长，试剂转呈绿色，可再加液体溴数滴，煮沸 15 分 钟。若能恢复原有颜色则可继续使用。 (4) 操作技 巧： 加试 剂最 好 用加样 枪， 方便 快捷 ， 用滴定 管操 作较反 复，也有读数误差。 （5） 操作失误： 在第一次实验时， 管未做标记， 加错了试剂， 后 又重 新标记，重新开始。 2、 实 验中 观察 到的现象 ： Folin酚试剂中的磷钼酸盐磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸 和苯丙氨酸残基还 原， 产生蓝色（钼兰和 钨兰 的混合物） 。在一 定的 条
43、件下，蓝色深度 与蛋白的量成正比 。 3、 原始 实验数 据 ： 500nm 波长吸光度值记录 测定次数 500nm 处各管吸光度值 2 3 4 5 6 1 0.083 0.158 0.237 0.304 0.209 2 0.083 0.159 0.234 0.304 0.209 3 0.083 0.160 0.234 0.304 0.209 各管平均值 0.083 0.159 0.235 0.304 0.209 【实验报告第三部分 （ 结 果与 讨论） ： 结果 （定量实验包括计算） ： 应把所得的实验 结 果 （如观察现象） 和数 据进行整理、 归纳、 分 析、 对比， 尽量用图表 的形式
44、概括实验的 结果； 讨论： 不应是实验结果的重述， 而是以结果为基础的逻辑推论。 结论： 简单 扼要，说明本次实验所获得的结果。 （包括思考题） 。 评 分（ 满分 45 分 ） ：XX】 1 、 结果 ： （1）绘制标准曲 线 从图中我们可以看到线性方程: y=0.0019x，将样品溶液的吸光度（即 y 值）代入方程， 可得出样品浓度（即x 值）. 计 算结 果 ： 样品吸光 度为 A=0.209，代入方程可得 X=110ug/ml 血清蛋白浓度(g/ml)=样品蛋白质浓度2300=66000ug/ml=66g/L 2 、 讨 论： （1）Folin- 酚试剂法测定蛋白质含量为什么比双缩脲法
45、灵敏？ 解答： 此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂， 即 Folin 酚 B 试剂， 以增加显色量， 从而提高了检测蛋白质的灵敏度。 Folin 酚试剂 由 A 试剂和 B 试剂组成。A 试剂由碳酸钠，氢氧化钠，硫酸铜及酒石酸钾钠组成。蛋 白质中的肽键在碱性条件下， 与酒石酸钾钠铜盐溶液起作用， 生成紫红色络合物。B 试 剂是由磷钼酸和磷钨酸、 硫酸、 溴等组成。 此试剂在碱性条件下， 易被蛋白质中酪氨酸 的酚基还原呈蓝色反应， 其色泽深浅与蛋白质 含量成正比。 由此可见 是它们的显色灵敏 度不同造成的。 （2）水浴后为何会出现无色？ 解答： Folin- 酚试剂在反应前
46、已被破坏， 原因是加入 Folin- 酚试剂后没有及时混 匀，或水浴时间过长。 (3) 为什么加 入 Folin- 酚试剂后呈现 黄绿色？ 解答：加入 Folin- 酚试剂后没有及时混匀或加入的量不准确，偏多。 3、 结论 ： 通过这次学 习， 掌握了 Folin- 酚试 剂法测定蛋 白质含量的原理及其实验操作技 术和制作标准曲线的要领和通过标准曲线求样品溶液中待测定物质含量的方法。 并且在 实验中没有明显错误， 成功完成样品蛋白质含量的测定 C=66g/L 符合 预期试验目标， 试 验成功。 思 考题 解答： （1）试 述 Folin- 酚试剂法的优 点？ 解答：.灵敏度高， 比双缩脲法灵敏
47、约 100 倍。.操作简单， 不需特殊仪器设 备。 （2）应用本方法有哪些干扰作用？为什么？应如何注意？ 解答：1 干扰物质此法是在 Folin- 酚法的基础上引入双缩脲试剂，因 此凡 干扰双缩脲反应的基团， 如-CO-NH2,-CH2-NH2,-CS-NH2 以及在性质上是氨基酸或肽的 缓冲剂，如 Tris 缓冲剂 以及蔗糖，硫酸铵，巯基化合物均可干扰 Folin- 酚反应。此外， 所测的蛋白质样品中， 若含有酚类及柠檬酸， 均对此反应有干扰作用。 而浓度较低的尿 素 （约 0.5% 左右） ， 胍 （0.5% 左右） ， 硫酸钠 （1% ） ， 硝酸钠 （1% ） ， 三氯乙酸 （0.5%），
