1、使用前删除此 我爱浪漫樱花 文档主页：http:/ ，分享文档快乐生 活快乐无阻 1 浅谈 乙 型 肝 炎 病 毒 （hbv ） 感 染 是 严 重 威 胁 人 类 健 康 的 问 题 ， 尤 其 在 地 方 性 流 行 区 域 如 东 亚 和 地 中 海 地区。hbv 在 与 宿 主 相 互 作 用 的 过 程 中 ， 形 成 了 持 续 感 染 和 逃 避 清 除 的 精 确 机 制 ， 但 至 今 仍 知 之 甚 少 。 由 于 1989 年 carman1 的开创性 工作，使得人们逐渐意 识到 hbv 变异 可能是上述精确机制中相当重要的一部 分。 在 hbv 感染的自然史中， 伴随
2、hbeag 的阴转往往 是 hbv 病毒血 症的消失或炎症的静息。但在一部分感 染者中如重型肝炎患者，感染起始即为 hbeag 阴性； 另一部 分感染 者中如 慢性肝 炎患者 ，hbeag 阴 转并不 意味着炎症活 动的停止。hbeag 阴性而存在 hbv 病毒 血症的情形定义为 hbeag 阴 性的 hbv 感染。 对其形成 的原因，很多作者从 hbv 变 异角度在分子水平上进行 了深入的探讨。 1 转录水平 hbeag 前 体翻译自 3.5kb 的前 c mrna 。前 cmrna 转录受核心基因启动子（cp ）控制和调节 2 。cp 包括 基 本 启 动 子 （bcp ） 、 上 游 调
3、 节 序 列 （curs ） 和 负 调 节 元件（nre）。 bcp 以相对独立的作用调控着前 cmrna 和前基因组 mrna 的转录 3 。 迄今为止，bcp 变异与 hbeag 阴性 hbv 感染的关使用前删除此 我爱浪漫樱花 文档主页：http:/ ，分享文档快乐生 活快乐无阻 2 系已基本明确。 首先， 在研 究 hbeag 阴性 hbv 感染者 时发现， bcp 变异很常见， 变异类型包括 nt17521776 区 段 内 的 点 突 变 和 不 同 长 短 长 段 的 缺 失 ， 以 t1762/a1764 联 合点突变最为常见 4 ； 在以 hbv 慢性感 染 者 为 对 象
4、 ， 对 hbv 进 行 时 间 生 物 学 研 究 时 发 现 ， t1762/a1765 变 异株具有明显的生存优势， 表现为快速 的 优 势 积 累 ， 在 炎 症 活 动 明 显 的 慢 性 乙 型 肝 炎 患 者 中 尤其如此；与此同时，虽然 hbv 病毒血症 持续存在， hbeag 血清 学 状态已 发生由 阳到阴 的转换 。在体 外实 验中发现，t1762/a1764 联合 点突变影响前 cmrna 的 转录效率， 使得该 mrna 转录水平下降至 1/5 1/37 9 ；关于是否影响前 cmrna 的 转录起始的精确性，有 两个相互矛盾的结果：一者认为 t1762/a1764
5、变异使 得前 cmrna 的 转录起始位点飘移 6 10 个 核苷酸 8 ； 另一个结果显示前 cmrna 的 5 端是一致的 9 。结果间 矛 盾 的 原 因 尚 不 明 确 。 检 测 蛋 白 表 达 时 发 现 ， t1762/a1764 使得 hbeag 水平 下降至 20% ， 这与早期 的 临 床 研 究 结 果 似 乎 并 不 吻 合 ； 后 来 的 研 究 认 为 hbeag 检测 方 法的敏 感性造 成了体 外实验 与临床 研究 的差异 10 。 与此同时，t1762/a1764 变异株却导致 hbv 复制 效率和核心抗原表达水平提高 7 9 。hbeag 表达降低使用前删除
6、此 我爱浪漫樱花 文档主页：http:/ ，分享文档快乐生 活快乐无阻 3 的 同 时 病 毒 水 平 增 加 ， 其 中 的 原 因 仍 不 明 确 ， 但 最 近 的 一 项 实 验 结 果 似 乎 给 出 了 部 分 答 案 。 体 外 包 装 实 验 证实，hbeag 前 体 可 以 干 扰 hbv 的 包 装 过 程 ； 由 于 hbeag 前体与 hbv 核心蛋白结构上的相似性， 在核心 蛋白与前基因组 mrna 进行装配的过程中， hbeag 前体 也 可 被 误 装 配 ， 但 无 法 进 行 下 一 步 的 逆 转 录 和 复 制 过 程 11 。 因此 hbeag 前体是影
7、 响 hbv 包装、 复制的原因 之一。所以，t1762/a1764 等 影响到 hbeag 前体形成 的变异株可使 hbv 变异株复 制水平提高。这也部分 解 释了 t1762/a1764 变异株在慢性 hbv 感染者中的优势 积累现象。至于 t1762/a1764 变异株使得 hbv 核心蛋 白增加的原因， 可以推测， t1762/a1764 变 异时， 可能 因为 hbv 核心 基因启动子内调节两个 3.5kb mrna 转录 区域的活性比失衡， 造成前基因组 mrna 转录增多， 从 而在转录水平上影响 hbv 核心蛋白的表达。 hbv bcp 变 异 对 宿 主 的影 响 目 前 仍
8、 存在 不 同 的 看 法。由于 t1762/a1764 变异株 在各类 hbeag 阴性 hbv 感染者中的普遍存在，因此 bcp 变异株相 对于野株的 毒力大小尚不能确定； 虽然此类变异株能引起 hbv 复 制 效 率 和 核 心 蛋 白 表 达 水 平 提 高 ， 但 其 对 宿 主 免 疫 状 态的影响仍未有实验结果证实。至于 bcp 变异株对干 扰素治疗的反应，目前的证据还很不足 12 。鉴于使用前删除此 我爱浪漫樱花 文档主页：http:/ ，分享文档快乐生 活快乐无阻 4 t1762/a1764 变 异 株 在 慢 性 肝 炎 患 者 存 在 优 势 积 累 现 象，因 此在判
9、断干扰 素疗效 时，hbeag 阴 转可能 是个 假象。所以，需要，更精确的疗效判断标准。 由于 curs 和 nre 对 hbv bcp 的活性具有较强的调 控作用 2 ，两个区段是否存在影响前 cmrna 转录的变 异， 尚缺乏足够的证据， 有待于进一步研究。 2 翻 译水平 在翻译水平上影响 hbeag 形成的病毒 因素主要是 hbv 前 c 基因变异，包括 a1896 即前 c 终止密码子变 异和前 c 起始 密码变异 13。 a1896 变异使得 前 c 第 28 位密码子由 ugg 突变为 uag （终止密码） ， 造成 hbeag 前体翻译提前终止。前 c 起始密码突变大约占前
10、c 变 异的 10% 。 a1896 变 异与 hbeag 血 清学状态的关系，并不是 绝对的直接相关关系。在一部分感染 a1896 变异株的 感染者 中，应 用酶免 疫法可 以检测 到 hbeag； 同时也 发现个 别慢性 乙肝病 人中， 其感染 的毒株 虽由 g1896 突变为 a1896 ，hbeag 血清 学结果依然呈阳性（待发 表结果 ） 。 其原因可能是，uag 作为终止密码， 其将翻 译 过 程 终 止 的 能 力 在 三 个 终 止 密 码 中 是 最 低 的 ， 即 经 常被读通。虽然前 c 第 28 位 氨基酸突变为终止密码， 翻译 hbeag 前 体的过程仍有限度地进行，
11、因此 a1896使用前删除此 我爱浪漫樱花 文档主页：http:/ ，分享文档快乐生 活快乐无阻 5 变异对 hbeag 形成的影响在某种程度上来讲也是相对 的。 a1896 突 变株在 东亚及 地中海 国家很 常见， 但在 美国和法国却极少；目前业已明确 a1896 变异株的出 现具有基因型依赖性， 即 a c 型常见，d 型 很少。 其 原因可归结于 nt1858c 或 t 的 区别：在 d 型中 nt1858 位为 c，在前基因组 mrna 中与 nt1896 位 g 形成较稳 定 的碱基配对；而在其他基因中 nt1858 位为 t ，与 nt1896 位的 g 组成的碱基对不甚稳定。
12、因此 18 9 6g a 的 突 变 增 加 前 基 因 组 包 装 信 号 二 级 结 构 的 稳 定 性 ， 有 利于病毒的包装和复制 14。 但问题是， 为什么总是发 生 nt1 8 96g a 的突变呢？n t18 58 tc 的突 变可有同 样的效能。 在前基因组 mrna 逆转录出第一链时， 需要 hbv 自 身 编 码 的 逆 转 录 酶 参 与 。 对 于 逆 转 录 酶 来 讲 ， rg:dt 的误配是一各很稳定的碱基配对， 因此在 hbv 复 制过程中， 存在着很高频率的 ga 突变； 考虑到肝细 胞内 dttp/dctp 相对浓度的波动以及 nt18961899 连续 4
13、 个 g ，可以理解 nt1 89 6 ga 何以那么常见 15 。 a1896 变 异同样使得 hbv 复制效率和核心蛋白表 达水平增加。hbv 复制效率提高的原因，除了 a1896 变异增 加前 基 因组 mrna 包 装信号 二级 结 构的稳 定性 外，hbeag 前 体对 hbv 正确 包装的影响得以抑制也是使用前删除此 我爱浪漫樱花 文档主页：http:/ ，分享文档快乐生 活快乐无阻 6 原因之一。a1896 变异株导致 hbv 核心蛋白 表达增加 的原因，与 bcp 变异并不一样。hbv 为 a1896 突变毒 株时，虽然 hbeag 前体的翻 译过程提前终止，但以前 cmrna
14、 为模板 的翻译 过程 并 没有终 止， 而 是从下 游的 atg （第 30 密 码子）重新起始， 翻译产物似 hbv 核心 蛋 白 ， 因 此 可 以 检 测 到 核 心 蛋 白 水 平 增 加 。 可 以 造 成 hbeag 阴性 hbv 感染的变异株增色使得 hbv 的核心蛋 白 水 平 增 加 ， 这 是 一 种 巧 合 或 是 具 有 更 深 层 的 意 义 ， 目前尚不清楚。 3 翻译后水平 hbeag 前 体在核糖体内从前 cmrna 上翻译出时， 携带着 29 个氨基酸的信号肽， 进入内质网内并经特异 性 的 信 号 肽 酶 切 割 ， 同 时 将 羧 基 端 的 数 个 氨
15、 基 酸 残 基 切除， 方能成为可分泌性的 hbeag16 。 如果 hbv dna 一 级 结 构 中 的 变 异 影 响 到 翻 译 后 处 理 过 程 ， 将 导 致 hbeag 前体 在 胞浆中 蓄积， 而循环 中无或 仅有较 低水 平 17kd 的 hbeag 出 现。 nt1 86 3ct 的变异 导致前 c 第 17 位 密 码 子 由 缬 氨 酸 到 苯 丙 氨 基 酸 的 突 变 是 常 见 的原因 17。体 外实验已经证实前 c 第 17 位氨基酸的 变异导致 hbeag 前体的内质 网中积累，但在培养上清 中同样 检测到 hbeag ，只 是水 平较低 （郭亚 兵，待发
16、 表结果） 。至此，三各变异株，分别从 hbv 前 cmrna使用前删除此 我爱浪漫樱花 文档主页：http:/ ，分享文档快乐生 活快乐无阻 7 的转录 、hbeag 前 体的翻 译 以及前 体的翻 译处理 三个 水平上造成 hbeag 阴性 hbv 感染； 有趣的是， 三种变 异对可分泌性 hbeag 形成的 影响都不是绝对的。对于 hbeag 前体的 羧基端，是否也存在影响到 hbeag 前体 处理 过程的变异，目前尚不清楚。 有 作 者 在 肾 功 能 衰 竭 同 时 感 染 hbv 的 患 者 中 发 现，hbv 核 心 基 因 部 分 缺 失 的 变 异 株 ， 缺 失 序 列 负
17、 责 编码 hbeag 抗 原 决 定 簇 （hbel ）18 ，推测分泌性的 hbeag 抗原 性 将大大 降低， 所以应 用常规 多克隆 抗体 法（酶 免疫法 ）检不 出血清 hbeag 。缺 失变 异株的出 现 可 能 是 由 于 细 胞 毒 性 淋 巴 细 胞 对 靶 表 位 的 特 异 性 清 除造成的。核心基因缺失变异株可能并不常见。 总之， 对于 hbeag 阴性 hbv 感染形成的原因， 虽 然从病毒 变异的角度已有几种解释， 但绝对没有完全 了解其复杂机理；hbeag 的 形成过程包括前 cmrna 的 转录及 其详细 的调控 机制、hbeag 前体的 翻 译及翻译 后的处理
18、过程以及 hbeag 的 结构和抗原特性均比较明 确， 但其对 hbv 本身和宿主的意义至今未有深入了解。 所以，hbeag 阴性的 hbv 感 染这种特殊的感染类型仍 需要更详尽的探讨。 参考文献 1.carman wf,et al. lancet.1989;2:588 2.yun ch,et al. j virol,1992;66:4073 使用前删除此 我爱浪漫樱花 文档主页：http:/ ，分享文档快乐生 活快乐无阻 8 3. chen ih,et,al. j virol,1995;69:3647 4. sato s,et al. annal internal med .1995;12
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