1、*方法验证报告方法名称:生活饮用水标准检验方法 感官性状和物理指标GB/T5750.4- 2006 挥发酚 4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法、直接分光光度法 项目负责人： 报告编写人： 报告日期： 目 录1 方法概要 31.1 目的 .31.2 测定原理 .32 仪器与化学试剂 .32.1 仪器 .32.2 试剂 .33 简要操作步骤 44 方法确认程序 54.1 标准曲线的绘制： 54.2 方法检出限： 64.3 方法精密度实验 .64.4 方法准确度实验： .75 评价与验证结论 95.1 评价 .95.1.1 空白值最低检出限评价 95.1.2 精密度评价 95.1.3 准确度评价
2、 95.2 结论 .91 方法概要1.1 目的根据实验室的检测能力和条件以及检测检验机构资质认定评审准则的要求，确认开展挥发酚类生活饮用水标准检验方法 感官性状和物理指标GB/T5750.4-2006 项目的检测能力，通过试验进行分析总结，编制此方法验证报告。1.2 测定原理在 PH=100.2 和有氧化剂铁氰化钾存在的溶液中，酚与 4- 氨基安替吡啉形成红色的安替吡啉染料，用三氯甲烷萃取后比色定量。酚的对位取代基可阻止酚与安替吡啉的反应，但羟基（OH）、卤素、磺酰基（SO2H） 、羧基（COOH）、甲氧基（OCH 3）除外。因此，邻位硝基也阻止反应，间位硝基部分地阻止反应。2 仪器与化学试剂
3、2.1 仪器仪器名称 规格型号 仪器出厂编号 性能状况（计量/校准状态、量程、灵敏度） 有效期全玻璃蒸馏器 500mL分液漏斗 500mL具塞比色皿 10mL容量瓶 250mL分光光度计2.2 试剂名称 生产厂家 纯度/规格氢氧化钠三氯甲烷五水硫酸铜氯化铵氨水 20=0.88g/mL4- 氨基安替吡啉铁氰化钾溴化钾溴酸钾可溶性淀粉水杨酸氧化锌硫酸溶液 1+9苯酚盐酸 20=1.19g/mL碘化钾硫代硫酸钠重铬酸钾溶液 c（1/6K 2Cr2O7）=0.1000mol/L3 简要操作步骤4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：取样 250mL 水样，置于 500mL 全玻璃蒸馏瓶中。以甲基橙为指
4、示剂用硫酸溶液调 PH至 4.0 以下，使水样由桔黄色变为橙色，加入 5mL 硫酸铜溶液及数粒玻璃珠，加热蒸馏。待蒸馏出总体积的 90%左右，停止蒸馏。稍冷，向蒸馏瓶内加入 25mL 纯水，继续蒸馏，知道收集 250mL 馏出液为止。注：由于酚随水蒸气挥发，速度缓慢，收集馏出液的体积应与原水体积相等。试验证明接受的馏出液体积若不与原水样相等，将影响回收率。比色测定将水样馏出液全部转入 500mL 分液漏斗中，另取酚标准使用溶液0mL， 0.5mL，1.00mL ，2mL ，4mL，6mL ，8mL 和 10mL，分别置于预先盛有 100mL 纯水的 500mL 分液漏斗中，最后补加纯水至 25
5、0mL。向各分液漏斗中加入 2mL 氨水-氯化铵缓冲液，混匀。再各加 1.5mL 的 4-氨基安替吡啉溶液，混匀，最后加入 1.50mL 铁氰化钾溶液，充分混匀，准确静置 10min。加入10.0mL 三氯甲烷，振摇 2min，静置分层。在分液漏斗颈部塞入滤纸卷将三氯甲烷萃取溶液缓缓放入干燥比色管中，用分光光度计，于 460nm 波长，用 2cm 比色皿，以三氯甲烷为参比，测量吸光度。绘制标准曲线，从标准曲线上查处挥发酚的质量。直接分光光度法：水样处理同上。吸取 50mL 蒸馏液（或取适量用纯水稀释至 50mL）于 50mL 具塞比色管中。另取 50mL 比色管 7 支，分别加入每毫升含 10
6、g 酚（以苯酚计）的标准使用液 0 mL、0.5 mL， 1.00 mL，3.00mL，5.00mL，7.00 mL 和 10.00 mL，用纯水稀释至 50mL。向水样及标准中各加入 0.5mL 缓冲液，摇匀。加 1.0mL4-氨基安替吡啉溶液混匀。最后加入 1.0mL 铁氰化钾溶液，充分混匀，准确放置 10min。于 510nm 波长，用 2cm 比色皿，以空白管为参比，测量吸光度。绘制标准曲线，从标准曲线上查处挥发酚的质量。用（1）式计算。计算-（1）vm） （ 56OHC式中：（C 6H5OH）-水样中挥发酚（以苯酚计）的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L ）m-从标准曲线上查得的样品
7、管中挥发酚的质量(以苯酚计)，单位为微克（g）V-水样体积，单位为毫克（mL）4 方法确认程序4.1 标准曲线的绘制：4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法： 浓度点 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7# 8#体积（mL） 0 0.50 1.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00吸光度校准曲线线性相关系数直接分光光度法浓度点 1# 2# 3# 4# 5# 6# 7#体积（mL） 0 0.50 1.00 3.00 5.00 7.00 10.00吸光度校准曲线线性相关系数4.2 方法检出限： 参考环境监测 分析方法标准制修订技术导则（HJ 168-2010），根据扣除空白值后
8、的与 0.01 吸光度相对应的浓度值作为检出限，根据（2）式计算 MDL=0.01/b-(2)4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法检出限为：直接分光光度法检出限为：4.3 方法精密度实验配制 6 份浓度为 0.1C、0.5C、0.9C 的样品溶液，（C 即标准曲线最高浓度点），按照给定分析方法的全过程进行处理和测定，记录 6 个平行样的测定结果，统计其相对标准偏差。4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：试样平行号0.1C 0.5C 0.9C12345测定结果（mg/L）6平均值 （mg/L）x标准偏差 S（mg/L）相对标准偏差 RSD(%)注 1：0.1C，0.5C，0.9C 中的 C
9、即标准曲线最高浓度点配制 6 份浓度为 0.1C、0.5C、0.9C 的样品溶液，（C 即标准曲线最高浓度点），按照给定分析方法的全过程进行处理和测定，记录 6 个平行样的测定结果，统计其相对标准偏差。直接分光光度法：试样平行号0.1C 0.5C 0.9C12345测定结果（mg/L）6平均值 （mg/L）x标准偏差 S（mg/L）相对标准偏差 RSD(%)注 1：0.1C，0.5C，0.9C 中的 C 即标准曲线最高浓度点4.4 方法准确度实验：（1）采用水中挥发酚成分分析标准物质 ，进行准确度实验。有证标准物质/标准样品测试数据有证标准物质 /标准样品 备注平行号12345测定结果（ mg
10、/L）6平均值 （mg/L）x有证标准物质/标准样品浓度（含量） a（mg/L）相对误差 REa 国家有证标准物质/标准样品的标准值不确定度。（2）分别取三种不同的水样进行实际样品测试和加标实验。分别取三个样品 500mL,在样品中分别添加水中挥发酚成分分析标准物质 mL、 mL、 mL，按全程序每个样品平行测定 6 次，分别计算每个样品的加标回收率，统计其相对标准偏差。4-氨基安替吡啉三氯甲烷萃取分光光度法：实际样品加标测试数据 实际样品 备注样品 1 样品 2 样品 3平行号样品 加标样品 样品 加标样品 样品 加标样品12345测定结果（mg/L）6平均值 、x（mg/L）y加标量（mL
11、）加标回收率 P注 1： 为实际样品测试均值， 为加标样品测试均值。xy直接分光光度法：实际样品 备注样品 1 样品 2 样品 3平行号样品 加标样品 样品 加标样品 样品 加标样品测定结果12345（mg/L）6平均值 、x（mg/L）y加标量（mL）加标回收率 P注 1： 为实际样品测试均值， 为加标样品测试均值。xy5 评价与验证结论5.1 评价5.1.1 空白值最低检出限评价本方法的最低检出限为 ；本实验的最低检出限为 ,符合方法要求。5.1.2 精密度评价本方法挥发酚浓度在 时，相对标准偏差为 。本实验的相对标准偏差（变异系数）在 ，符合规范要求。5.1.3 准确度评价根据方法条件，
12、检测环标准物质挥发酚含量，其结果均在其不确定度范围内。5.2 结论本次方法验证，所有参加人员均经培训持证上岗；所用仪器设备均经检定并在有效期内；检测方法为有效版本；实验过程中本项目未收到其他项目干扰；分析实验过程中均使用符合国家标准的试剂和蒸馏水。该项目测定结果标准曲线的相关系数能达到 0.999 以上，实验所得方法检出限为 ，满足方法要求。方法精密度达到标准要求。质控样品检测合格，加标回收率在标准范围内，实验室检测结果准确可靠，人员操作熟练，技术水平符合要求，已达到该方法各项条件。该项目各项指标均达到生活饮用水标准检验方法 感官性状和物理指标GB/T5750.4- 2006 标准要求，表明此项目可在本站开展。
