1、目 录一、目的： 1二、适用范围： 1三、作业流程： 1四、作业内容： 2（一） 、效价的测定： 31、原理： 32、方法： 4（二） 、总糖的测定： 41、原理： 42、测定： 4（三） 、还原糖的测定： 51、原理： 52、测定： 5（四） 、氨基氮的测定： 71、原理： 72、测定： 7五、注意事项： 8六、加强责任制及生产安全教育： 8安全生产管理制度 16职工安全生产公约18第 1 页 共 18 页化验工段作业指导书一、目的：为了规范化验人员的操作技能，保证化验人员的人身安全，要做到操作必须规范，数据必须真实、准确。二、适用范围：适用于化验工段全体员工。三、 作业流程：1. 按规定准
2、时到岗，换好工作服，做好交接班准备，进行交接班。2. 交接班时，当场将工作交接清楚，将存在的问题找出来，看仪器是否正确（分光光度计、干燥箱、恒温水浴锅、电炉等） ，药品试剂是否够用，常用的玻璃仪器是否放入干燥箱，卫生是否清洁，双方交接无误后接班人签名，交接人方可离岗，接班人正常工作。3. 根据当日无菌室发的生产调度单和补料单做好本班工作计划。第 2 页 共 18 页4. 根据化验原始记录，看看各罐生长情况，效价长势情况，总糖、氨基氮消耗情况，如果结果偏差大的重新取样复样，认真寻找原因，将结果填入原始记录，并注明复样，如有特殊情况汇报工作。5. 按规定时间取样，做样前对所做样的仪器和玻璃仪器做好
3、充分的准备，放在工作台上，做效价和糖所用的试剂临用时混合。6. 取样后，进行各项含量分析，完成后将结果随时填入原始记录，如有填错应及时改正，并签名，原始记录填写完整后，认真核对确定无误后签字发出报告单。7. 随时清理和洗涤玻璃仪器和工作台，及时处理废料残液，始终保持现场的整洁有序，玻璃仪器轻拿轻放。8. 如有化验，结果偏差大，该复样的重新取样、复样。9. 剩余时间，折叠滤液用的滤纸。10. 清理卫生，做好交班准备。四、作业内容：发酵过程的中间分析是生产控制的眼睛，它显示了发酵过程中微生物的主要代谢变化，供操作人员做好分析控制发酵工艺并处理异常发酵的重要依据。第 3 页 共 18 页化验项目（每
4、 8h 取样一次）项目罐类PH（ 无 菌 ）杂菌（ 无 菌 ）菌浓（ 无 菌 ）总糖（ 化 验 ）还原糖（ 化 验 ）氨基氮（ 化 验 ）效价（ 化 验 ）消后 接后 种子罐 30h移前 消后 接后 发酵罐 40h放罐 糖罐 第 4 页 共 18 页（一） 、效价的测定：1、原理：在培养过程中，产生菌体的生物合成能力和抗生素的积累程度，通常都以抗生素的效价单位表示。发酵过程中，定期测定发酵效价单位，可使我们及时了解发酵过程的趋势，帮助我们选择最合适的发酵条件，并控制最合适的发酵周期。效价单位测定一般采用化学测定和生物测定法。现我们采用化学测定法，方法简速。2、方法：（1） 、准确吸取 2.5m
5、l 发酵液于 25ml 的具塞比色管中，加无水乙醇将发酵液全部冲下（起步效价做 3 倍，加无水乙醇 5ml；效价超过 5500 改做 4 倍，加 7.5ml 无水乙醇） ，充分摇匀后放入 37恒温水浴中 30min，取出后摇匀过滤。（2） 、精确吸取 1ml 于盛有 10ml 硼缓溶液和 8ml 正丁醇溶液的25ml 的比色管中，充分摇匀再次放入 37恒温水浴中 20min。（3） 、吸取上清液 4ml，加 4ml 无水乙醇摇匀，在波长 408nm 的722 分光光度计上进行比色。讨论：（1） 、测定样品时，应力求与制作标准曲线和条件相同。（2） 、正丁醇和硼缓在临用时混合，混合时不能快。第
6、5 页 共 18 页（3） 、空白，样品所用之比色皿，应分别固定使用。（4） 、比色前 15min，打开分光光度计预热。（二） 、总糖的测定：1、原理：淀粉系多糖类，经酸水解后生产单糖，利用其分子中的醛基在碱性溶液中将高价铜还原成低价铜，剩余铜在酸性溶液中与碘化钾作用析出游离碘，可用硫代硫酸钠滴定，根据空白与样品之差推出糖含量。2、测定：（1） 、发酵液过滤后，精吸滤液 2.5ml 于盛有 5ml（6mol/L ）的HCl 的 25ml 刻度试管中，在沸水中加热 15min，冷却，用蒸馏水稀释至刻度。（2） 、正确吸取上述水解溶液 5ml，斐林 A10ml、斐林 B10ml 于150ml 的三
7、角瓶中，稍震摇，在电炉上加热，煮沸 3min，同时以A、B 液各 10ml、水 5ml 做空白。（3） 、冷却至室温，加 KI5ml、加 6mol/L 的 HCl 10ml，立即以0.1mol/L 的 Na2S2O3，滴定至淡黄色，加淀粉指示剂 2ml，继续滴至蓝色消失。样品消耗的 Na2S2O3 毫升数为 A，空白消耗的毫升数为 B， （B-A）计算得。（三） 、还原糖的测定：1、原理：第 6 页 共 18 页测还原糖是看玉米淀粉的转化率，还原糖是培养液内含自由醛基的单糖，通常指葡萄糖，葡萄糖可以直接被微生物吸收利用，因而还原糖这个数值是反映产生菌体直接利用糖的情况与发酵关系的较为密切。2、
8、测定：发酵液经过滤，吸滤液 1ml，不经酸水解，其它按总糖的方法测定。注意：1、 煮沸时间应以沸腾开始起严格控制 3min。2、 A 液 B 液必须准确加入，因为+1 价铜离子是计算得依据。3、 淀粉指示剂不能过早的加入，因为生产大量的淀粉吸附物达到终点时仍不易褪色，造成误差。4、 滴定至终点后放置一下，又呈蓝色，这是因为过量的碘。碘化钾在酸化情况下，被空气氧化而析出的碘遇淀粉重显蓝色。糖曲线表：（本表以葡萄糖计）查 糖 浓 度 表滴定值 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.90 0.06 0.13 0.201 0.27 0.34 0.40 0.47 0.5
9、4 0.61 0.68 0.75 0.82 0.892 0.95 1.02 1.09 1.16 1.23 1.30 1.37 1.44 1.50 1.573 1.64 1.71 1.78 1.85 1.92 1.99 2.06 2.12 2.19 2.26第 7 页 共 18 页4 2.33 2.40 2.47 2.54 2.61 2.67 2.74 2.81 2.88 2.955 3.02 3.09 3.16 3.22 3.29 3.36 3.43 3.50 3.57 3.646 3.71 3.77 3.84 3.91 3.98 4.05 4.12 4.19 4.26 4.327 4.39
10、4.46 4.53 4.60 4.67 4.74 4.81 4.87 4.94 5.018 5.08 5.15 5.22 5.29 5.36 5.43 5.49 5.56 5.63 5.709 5.77 5.84 5.91 5.98 6.04 6.11 6.18 6.25 6.32 6.3910 6.46 6.53 6.59 6.66 6.73 6.80 6.87 6.94 7.01 7.08注：还原糖查表除以 2，即得；超出范围值用公式计算：C%=滴定差值0.612/1.454（四） 、氨基氮的测定：1、原理：生产上通常仅测定氨基氮和氨氮，测定氨基氮和氨氮都可以用甲醛法，简便迅速，氨基氮测定
11、数据作为中间补料和代谢控制的主要依据（含量：以 mg/100ml） 。2、测定：、发酵液过滤。、吸取滤液 5ml 于 250ml 三角瓶中，加蒸馏水 20ml，甲基红3 滴，以 0.5mol/LH2SO4 调至红色，放置 5min，再用 0.075mol/L第 8 页 共 18 页的 NaOH 调至黄色，加 18%的中性甲醛 5ml 摇匀，放置 5min，加酚酞 3 滴，以 0.075mol/L 的 NaOH 滴定至为红色为终点。滴定毫升数200 即为氨基氮的含量。讨论、注意：1、 在加甲醛前，酸性应调节好，第一步调节，H 2SO4 可适当多一点，因为发酵液中含有 CO3+消耗 HCl。2、
12、中性甲醛随用随时中和。3、 操作周围应避免有氨气和 HCl 气体，否则影响结果的正确性。五、注意事项：1、 化验员必须穿戴好洁净的工作服，在进行有毒、有刺激性、有腐蚀性药品的工作时，必须戴好防护镜、口罩。2、 电器设备发现有故障、损坏、漏电等情况时，应立即切断电源，通知电工修理。3、 电器设备不得用湿手或手拿金属工具操作，开关按钮。4、 有机溶媒应放在固定地点，不得放在高温炉或电炉旁。5、 当有人触电时，用木棒将触电者和电源切断，进行急救。6、 有毒或有刺激性的药物，不能直接嗅之，必须用手扇动，在旁嗅之。7、 不能用玻璃仪器喝水，以免发生意外。第 9 页 共 18 页六、加强责任制及生产安全教
13、育：参见【化验安全操作规程】 ， 【化验岗位工作职责】 。化验安全操作规程一、化验员必须穿戴好洁净的工作服，在进行有毒、有刺激、有腐蚀性药品的工作时必须戴好防护镜、口罩。二、对有挥发性和易燃性有机溶剂加热排除时，必须在水份锅中或电热板上缓慢进行，禁止用火焰式电炉直接加热。三、当加热蒸馏及有关用火或点加热操作时，要有人看护，以防意外。四、可燃性溶剂，不可存放在电源，水源处，以免发生火灾。五、电源开关要安装牢固的外罩，开合电源时要精力集中，手湿不得操作。六、电热设备及导线要经常检查，电热器械是否有安全可靠垫板。七、化验室附近要配有灭火器材，以备急用。第 10 页 共 18 页化验岗位工作职责一、负
14、责检查发酵的含量，总糖，还原糖，效价，氨基氮等，为生产提供准确的检验数据。二、负责化验所需各种标准溶液，清液的配制，做好各种曲线的绘制。三、根据生产工艺要求，随时作出所需项目的检验结果，为生产提供可靠的依据。四、负责仪器室的使用和管理，做好称量操作记录，严格按规程进行操作，爱护室内所有仪器。五、按工艺要求严格取样程序。六、负责化验室所用各种试剂，标准品的管理，避免由于管理不当造成化验结果误差。七、保证计量器具的准确性及可靠性。第 11 页 共 18 页72230G 可见分光光度计使用方法一、使用准备工作：方式（一）1、 开机前，要检查电源插座是否按规定 L 接火线，N 接零线，接大地。仪器使用
15、时，应避免强光照射。2、 启动电源开关，仪器显示“F7230” 。3、 按“CLEAR”键，仪器显示“YEA”进入年份设置。4、 年份设置，按数字键，输入对应的年份，再按“MODE”键，输入成功，仪器显示“MON”表示进入月份设置。5、 月份设置，按数字键，输入对应的月份，再按“MODE”键，输入成功，仪器显示“DA ”表示进入日期设置。6、 日期设置，按数字键，输入对应的月份，再按“MODE”键，输入成功，仪器显示“HOU”表示进入日期设置。第 12 页 共 18 页7、 小时设置，按数字键，输入对应的月份，再按“MODE”键，输入成功，仪器显示“MIN ”表示进入日期设置。8、 分钟设置，
16、按数字键，输入对应的月份，再按“MODE”键，输入成功，仪器进入时间显示模式。9、 过 20min，待机器热平衡后，载进行试样测定可得到准确的数值。方式（二）：若不需要设置年，月，日，时，分，即进入工作状态，可采用方式（二） 。1、 开机，仪器显示“F7230” 。2、 按“CLEAR”键，仪器显示“YEA” 。3、 按“0%”键，仪器显示“00-00” ，表示仪器进入及时状态，时间从 88 年 1 月 1 日 0 时 0 分开始。4、 按“MODE”键，仪器显示（T）状态。注意在时间输入中，年份范围在 00-99，月份在 01-12，时期 01-31.小时 00-23，分钟 00-59。不在
17、这些数字的范围，输入无效，需再次输入。数值输入的过程中，如果按错数字，可按“CLEAR”键，然后再次输入。时间一经输入不可更改，除非关机再开机重新开始。二、仪器基本使用方法：1、调节波长旋钮使波长移到所需这处。2、四个比色皿，其中一个放入参比试样，其余 3 个放入待测试第 13 页 共 18 页样。将比色皿放入样品池内的比色皿架中，夹子夹紧，盖上样品池盖。3、将参比试样推入光路，按“MODE”键，使显示（T）状态或 A 状态。4、按“100%键” ，至显示“T 100.0”或“A 0.000” 。5、打开样品池盖，按“0%”键，显示“T 0.0”或“A E 1” 。6、盖上样品池盖，按“100
18、%”键，至显示“T 100.0” 。7、然后将待测试样推入光路，显示试样的（T）值或 A 值。8、如要想将待测试样的数据记录下来，只要按“PRINT”键即可。硫代硫酸钠滴定液的配制和标定1、 配制：、 0.1N Na2S2O3 标准溶液：称取 26g Na2S2O3 及 0.2g Na2CO3，加适量新煮沸过的冷水使之溶解，并稀释至1000ml，混匀，放置一个月后过滤备用。、 0.5%淀粉指示剂。、 4N H2SO4：量取 H2SO4 10ml，慢慢加入 80ml 水中。2、 标定：精密称取在 120干燥至恒重的基准重铬酸钾约 0.15g，置于 500ml 碘瓶中，加水 50ml 使之溶解，加
19、 KI 2g，轻轻第 14 页 共 18 页振摇使之溶解，再加入 4N H2SO4 20ml，盖塞，摇匀，放置暗处 10 分钟后加水 250ml，用 Na2S2O3 溶液滴定至呈浅黄绿色，再加 0.5%淀粉指示剂 3ml，继续滴定蓝色消失而显亮绿色。反应液及稀释用水的温度不应高于 20 。同时做试剂空白试验。3、 计算：N8=m/（v1-v2）0.04903式中：N8 Na2S2O3 标准溶液的当量浓度，N；m基准重铬酸钾的质量，g；v1Na2S2O3 标准溶液用量，ml ；v2试剂空白试验中 Na2S2O3 标准溶液用量，ml；0.04903每 mg 当量重铬酸钾的克数。4、 贮藏：贮于棕色
20、瓶中，密闭低温保存。第 15 页 共 18 页试剂的配制：1、 正丁醇溶液：量取正丁醇 500ml，加 300ml 水充分摇匀后静置至完全分层，取上清液备用。2、 硼缓溶液：准确称取四硼酸钠 95.35g，定容至 5000ml，调 PH 至9.2 后加 50ml 硼酸即可。3、 斐林 A：称取 CuSO45H2O 300g 定容至 5000ml。4、 斐林 B：称取酒石酸钠 900g，NaOH660g 定容至 5000ml。第 16 页 共 18 页5、 硫代硫酸钠：取 1mol/L 硫代硫酸钠稀释至 0.1mol/L 即成，待标定。6、 0.1mol/LNaOH：取 1mol/LNaOH10
21、00ml 加水稀释至 1000ml 使其浓度为 0.1mol/L，待标定。7、 甲醛：（中性甲醛）取 500ml 甲醛溶液，加 500ml 水摇匀，加酚酞 3 滴，用浓 NaOH 调至微红色即可。8、 酚酞：1%的乙醇溶液。9、 甲基红：0.05%的 75%的乙醇溶液。安全生产管理制度一、 “安全生产、人人有责” ，所有职工都必须加强法制观念，认真执行党和国家的有关安全生产，劳动保护政策及法令规定，严格遵守安全技术操作规程和各项安全生产规章制度。二、凡不符合安全生产要求，有严重危险的厂房，设备及生产线，职工有权向上级报告，遇有严重危及生产安全的情况，职工有权停止操作并及时报告领导处理。第 17
22、 页 共 18 页三、进厂新员工，临时参加劳动及变换工种的人员，未经安全教育及跟班的师傅同意，不准单独操作。四、生产工人上班时，必须严格按规定穿戴防护用品。女工要把辫子放在帽内，操作前要检查设备和工作场地，及时排除故障和隐患；保持设备润滑及通风良好，运转机器严禁戴手套操作；不准带小孩进入工作场地，不准穿拖鞋，赤脚、敞衣，戴头巾、围巾工作，上班前不准喝酒。五、工作中应坚守岗位，不准擅自把自己的工作交给他人，不准打闹、睡觉以及做与本职工作无关的事情。凡运转设备，不准跨越、调整检查设备，要先停电关车，中途停电应关闭电源。六、严格执行交接班制度，本班生产工人下班前必须切断电源、气源、熄灭火种及照明电灯
23、，清理场地。七、操作工必须熟悉其设备性能，工艺要求和设备操作规程。设备要定人操作，不得任意开动本工种以外的设备，当工作需要时须经有关领导的同意后方可操作。八、检查，修理机械、电气设备时，必须先停电，设人监护，非工作人员严禁合闸、开关。在合闸要前细心检查确认无人检修时才准合闸。九、一切用电机械设备的金属外壳（包括行车轨道） ，必须有可靠接地或重复接地安全措施，非维修电工人员不准擅自装拆，修理电气设备和线路。使用手持电动工具，必须绝缘可靠，有良好的接地或接零措施，并应注意安全操作。十、高空作业必须扎好安全带，戴好安全帽，不穿硬底鞋，禁第 18 页 共 18 页止投掷工具，材料等物件。十一、对易燃、
24、易爆、剧毒、放射和腐蚀等物品，必须分类妥善存放，并设专人严格管理。易燃、易爆危险的场所，严禁吸烟和明火作业。十二、发电机房、配电室、油库、危险品库及重要部门，非岗位人员严禁入内。十三、发生重大事故或恶性未遂事故时要及时抢救，保护现场，并立即报告有关领导。十四、搞好文明生产，保持厂区、车间、库房、通道等整齐清洁，畅通无阻。十五、懂得消防知识，能够正确使用消防器材。 职工安全生产公约一、牢记“安全生产，人人有责” ，树立“安全第一”的思想，积极参加安全生产竞赛活动，接受安全教育，提高自我的防护意识。二、认真学习和掌握各工种的安全操作规程及有关安全方面的知识，积极组织新工种，新工人培训，努力提高安全技能。自觉遵第 19 页 共 18 页守安全生产的各项制度，听从安全指导，做到不违章作业，不冒险蛮干。三、正确使用安全设施，工具，识别安全标志，爱护防护用品。服从分配，坚守岗位，严格遵守操作规程，禁止随意开动他人使用的机械电力设备，无证不操作特殊工种作业。 四、经常检查工作岗位的环境及使用的工具，做到安全、文明生产。发生事故和未遂事故应立即向上级报告，进行事故分析，提出合理化建议。五、职工有权越级报告安全生产的一切情况，任何人不得阻扰，打击，报复或压制。
