1、1预封装质粒小提试剂盒（48孔板）Plasmid DNA Extraction Kit (Magnetic Beads)目录号：PDEP-P-5001运输条件：225；保存条件：主试剂板 28，、号溶液28保存，其他组分室温；试剂盒组成：Kit Component试剂盒组成4块板适用于 16*4份样品24块板适用于 16*4份样品 PDEP-Buffer 1质粒悬浮液 15mL 80mL PDEP-Buffer 2质粒裂解液 15mL 80mL PDEP-Buffer 3质粒复性液 25mL 150mL Elute Buffer洗脱液 5mL 10mL试剂 RNase A100mg/mL 60
2、L 320L预封装部分 试剂板 16T/板 *4 板 16T/板 *24 板耗材 磁棒套 2 个 /包 *4 包 2 个 /包 *24 包特别说明：1）使用前请将 RNase A 全部加入 PDEP-Buffer 1中，并置于4保存；2）使用前先检查 PDEP-Buffer 2 是否出现浑浊，如有混浊现象，置于37 水浴几分钟，即可恢复澄清。PDEP-Buffer 2 和 PDEP-Buffer 3 使用后应立即盖紧盖子；3）本操作指南经公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南的建议操作。预封装质粒小提试剂盒（48 孔板）2【产品简介】试剂盒中独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，可从 2.
3、0 5.0 mL 菌液中分离纯化 10 20g 高质量质粒 DNA。磁珠表面修饰有特殊化学基团，在一定缓冲液体系中对质粒DNA 具有极强的特异性亲和力，而当缓冲液体系改变时，磁珠可逆地释放质粒 DNA，从而达到快速分离纯化质粒 DNA 的目的。此外，复性液中含有特殊磁珠，可最大限度的特异性结合并去除蛋白质及其它杂质，从而保证提取质粒 DNA 的纯度。 本试剂盒适用于直接在 48 孔板中完成摇菌、收菌、重悬、裂解和复性，预分装的试剂板直接在自动化核酸提取仪上完成质粒 DNA 提取，大大降低了实验人员的工作量以及实验中的人为误差。使用本试剂盒提取的质粒 DNA 可用于各种分子生物学实验，如酶切、测
4、序、文库筛选、连接和转化等。【注意事项】1 试剂板严禁反复冻融，以免磁珠受到损害；2 所有离心步骤均为室温下进行，其中复性步骤冷冻离心效果更佳；3 提取的质粒DNA量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关；4 复性液使用前需充分摇匀使磁珠充分重悬；5 质粒复性后的离心步骤应尽可能轻拿轻放48 孔板（保证蛋白质和基因组沉淀紧附于48孔板底部），以避免转移上清液时吸取到杂质；6 试剂板使用前务必颠倒混匀使磁珠充分重悬；7 试剂板使用前务必使用甩板机进行离心（500rpm*1min），使试剂及磁珠集中到孔板底部；8 使用前小心撕去铝箔封口膜，避免孔板振动，防止液体溅出。【试剂盒说明】样品类型
5、 样品量 DNA提取范围 单样品提取时间菌液 1.0 5.0mL 10 20g 40min【自备仪器和试剂】1.英芮诚ETP-300型核酸提取仪；2.涡旋混合仪；3.甩板机；4.离心机。预封装质粒小提试剂盒（48 孔板）3【仪器自动提取操作步骤】（以英芮诚ETP-300 型全自动核酸提取仪为例，同步可完成32个样本的提取）1准备1）从试剂盒中取出独立包装的试剂板，用甩板机（500rpm 离心 1min）使试剂及磁珠都集中到孔板底部，使用前小心撕去铝箔封口膜，避免孔板振动，防止液体溅出。2）将RNase A 全部加入溶液 PDEP-Buffer 1 中，将其与 PDEP-Buffer 3 于4保
6、存待用。2收集菌体将 48 孔板培养的菌液做好记录， 4000 rpm 离心 5 min 收集菌体，弃培养液，将离心后的 48 孔板倒扣在清洁的吸水纸上数次，尽量去除残留的培养液。备注：不同品牌和型号的甩板机离心效果或有差异，请在收菌时和复性后离心时确保沉淀紧附于48 孔板底。3菌体悬浮向收集好的菌体沉淀中加入 200L 号溶液（质粒小提悬浮液），将 48 孔板在4000rpm 下涡旋混合 12min，确保菌体彻底重悬。4菌体裂解： 2min向菌体悬浮液中加入 200L 号溶液（质粒小提裂解液），开始 2min 倒数计时，将 48 孔板在 400500 rpm 温和涡旋混合 1min，使菌体充
7、分裂解，直到裂解液基本澄清，静置至 2min 倒计时结束。备注：如果菌体较多，可以适当延长裂解时间至 4min，但不宜超过 4min，菌体裂解时间过长会使质粒难以复性。5质粒复性：向菌体裂解液中加入 350L 号溶液（质粒小提复性液）；将 48 孔板在 700rpm温和涡旋混合 1min，充分混匀，比较好的状态是整个孔板内的沉淀为蛋花状。将 48 孔板在甩板机上 4000rpm 低温离心 15min，若沉淀未贴附于孔板底部，继续离心 5min，使之在孔道底部形成白色沉淀。备注：(1)号溶液（质粒小提复性液）务必提前 4冷藏，并且每次吸取前尽量摇晃均匀;(2)如果离心后上清中还有白色沉淀，或发现
8、孔道底部沉淀松散，可以再次离心 10min。6自动化提取转移质粒复性后的上清液 600L 到预分装试剂板的 2/8 列孔位，吸取上清时切勿吸取到沉淀，以免质粒 DNA 的污染。7上机提取将已加样的试剂板放入 ETP-300 型核酸提取仪中，并插入磁棒套；打开仪器的操作程序，参照下表设置仪器参数，并运行程序。预封装质粒小提试剂盒（48 孔板）4“质粒 DNA提取”程序各参数设置如下，如机器和说明书不一致，请以说明书为准： 8核酸转移程序运行完毕，取下试剂板，将洗脱液（试剂板的2/8列孔位内的液体）转移至干净的EP管或者 PCR板中，做好标记，-20 保存备用，此时可以弃去 96孔板。（1701修订版）版权声明： 英芮诚生化科技（上海）有限公司保留本使用指南的所有权利。版本：V201701.031
