1、摘要】 目的 研究 连环素在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及临床生物学意义。方法 采用免疫组化 SP 法分别检测 60 例肺癌组织及 20 例正常肺组织中 连环素的表达。结果 60 例 NSCLC 组织中 连环素表达的阳性率为 30.0% ，20 例正常肺组织中 连环素表达的阳性率为 100.0%，差异具有统计学意义(P0.01) 。有淋巴结转移的 NSCLC中 连环素的阳性表达率为 13.51% ，无淋巴结转移者为 56.52%，差异有统计学意义(P0.01)。TNM 分期、期 连环素的阳性表达率为 45.83%，、期 19.44%，差异有统计学意义(P0.05)。 连环素在 NSC
2、LC 组织中的表达与年龄、性别、病理类型、临床分型及分化程度无关(均 P0.05)。结论 连环素可能与 NSCLC 的发生、TNM 分期及淋巴结转移有关。 【关键词】 连环素 肺肿瘤 免疫组织化学肺癌在初次诊断时往往已发生了浸润和转移，细胞之间黏附作用的改变被认为在其间发挥重要作用1 。 连环素是细胞内重要的蛋白质分子，不仅与钙黏附蛋白相互作用介导细胞黏附，也是 Wnt 信号传导通路中的关键调节因子。有关文献对 连环素在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及其临床价值尚存在争议2，3 。本研究采用免疫组化的方法研究 连环素在 NSCLC 组织中的表达及与临床病理学之间的关系 ,为揭示 NSCLC
3、的转移机制及治疗提供依据。1 对象与方法1.1 研究对象 标本取自 2002 年 9 月至 2006 年 11 月在我院住院手术切除的 60 例肺癌患者，男 45 例，女 15 例；年龄 3681 岁，平均 58.93 岁。所有患者术前均未行放疗和化疗。标本均经病理证实(鳞癌 36 例，腺癌 24 例) 。根据 1997 年国际抗癌协会提出的 TNM 分期标准进行分期，其中 I A 期 3 例，I B 期 12 例，A 期 0 例，B 期 9 例，A 期 12 例，B 期 17例，期 7 例。对照组选择 20 例癌旁正常肺组织(距癌组织 3 cm 以上) 。 所有标本均为福尔马林固定、石蜡包埋
4、组织。连续 4 m 厚切片。1.2 方法1.2.1 主要试剂 鼠抗人 连环素单克隆抗体（即用型） 、S P 通用试剂盒及 DAB 显色剂均购自北京中杉生物技术有限公司。1.2.2 免疫组化染色 采用 S P 免疫组化法，严格按照 S P 试剂盒说明进行，以 PBS 代替一抗作为阴性对照，阳性对照为正常支气管黏膜上皮。主要步骤如下:石蜡切片脱蜡水化，于枸橼酸盐缓冲液(pH 6.1)中行微波抗原修复，过氧化物酶阻断剂阻断内源性过氧化物酶活性，非免疫性动物血清阻断非特异性反应，滴加鼠抗人 连环素单抗，4过夜。加生物素标记的第二抗体，加链霉抗生物素 过氧化物酶溶液，DAB 显色后自来水充分冲洗，苏木素
5、复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，镜检。1.2.3 结果判定 连环素阳性产物分布于细胞膜上，为粗细一致的棕黄色颗粒。标准参照 Nakanishi等4的方法进行：高倍镜(400 倍) 下每个视野计数 100 个细胞，每张切片数 5 个视野，染色结果分为：(1)正常表达：肿瘤组织染色方式及强度与正常支气管上皮黏膜染色相同，切片内阳性细胞数90；(2)异常表达：包括异质性表达 (细胞膜染色强弱不等，染色阴阳性细胞混杂，切片阳性细胞数90)、阴性表达( 细胞膜染色缺失 )及胞浆胞核染色。1.3 统计学处理 所有资料均经 2 检验进行分析。2 结 果2.1 连环素在正常肺组织及肺癌原发灶中的
6、表达 20 例正常肺组织中阳性表达率为 100.00%（20/20） ，60 例肺癌组织中的阳性表达率为30.00%(18/60),二者比较，差异有统计学意义（2=29.474，P0.01） 。在异常表达的肺癌组织中 11 例出现了单独胞质表达,6 例出现了缺失表达。2.2 连环素表达与临床病理特征的关系 NSCLC 中淋巴结转移组 连环素阳性表达率为 13.51%，无淋巴结转移组为56.52%，差异具有统计学意义（ P0.01） 。 连环素表达还与肿瘤 TNM 分期有关（P0.05） 。 连环素的表达与 NSCLC 患者的年龄、性别、肿瘤的病理类型、分化程度及临床分型均无关(均 P0.05)
7、。见表 1。表 1 NSCLC 组织中 连环素的表达与临床病理特征的关系（略）3 讨 论 连环素是胞质内糖蛋白，基因定位于人染色体 3p21，分子量为 92 kD。与 连环素以互斥方式同 E 钙黏附素胞质尾部的连接素结合域结合并通过 连环素与肌动蛋白及细胞骨架结合，调节 E 钙黏附素的黏附作用；同时 连环蛋白参与 Wnt 信号通路，介导 APC 连环素Tcf/lef 1 构成的 wgwnt 信号传导通路，与胚胎发育及肿瘤有关5 。本研究发现 连环素在 NSCLC 中胞膜表达显著减低，异常表达率为 70%，有 11例出现了单独的胞质表达，这与 Kallakury 等6在前列腺癌中的研究报道基本一
8、致。其发生机制与 连环素介导的 Wnt 信号通路有关。当 Wnt 信号途径失活时，该途径的负性调控因子 glycogen synthase kinase 3（Gsk 3）可使 连环素及 APC 发生磷酸化，使 连环素降解；而当 Wnt 激活时，Gsk 3 的功能受到抑制， 连环素降解减少而在胞质中大量聚集并进入细胞核与 DNA 结合蛋白 TCFLEF(T cell factorlymphoid enhancer factor)形成复合体，激活 cyclinDl 和 myc 等基因转录，诱导与肿瘤进展有关的细胞增殖7 。目前， 连环素在 NSCLC 中表达的研究结果不尽一致。 Kase 等2在
9、331 例肺癌组织的研究中发现 连环素的表达与病理分型、分化程度及淋巴结转移等无显著相关。徐红涛等3研究结果显示 连环素的膜表达降低与 NSCLC 的低分化和淋巴结转移相关，与 TNM 分期无关。本研究显示 连环素在鳞癌及腺癌的异常表达率分别是 72.22%及 66.67%，高分化和中低分化的异常表达率分别是 37.50%及 75%，差异均无统计学意义，I、II 期肺癌和 III、期肺癌中 连环素的异常表达率分别是 54.17%及 80.56%，淋巴结转移组 连环素的异常表达率是 86.49%，与无转移组异常表达率 43.48%相比，差异均有统计学意义。多组实验结果的差异，可能与 连环素在肺癌
10、组织中表达不稳定有关。本研究结果提示 连环素可能在肺癌的发生及发展中发挥重要作用。综上所述， 连环素在 NSCLC 中出现了显著的表达下调，与 NSCLC 的 TNM 分期及淋巴结转移相关，提示检测 连环素表达对评价肿瘤的生物学行为、指导治疗以及肿瘤转移机制的研究均具有重要意义。【参考文献】1 金倩;氯地酊联合激光治疗痤疮 158 例疗效观察J;广东医学;1997 年 10 期 2 董新亭,李卫莉,张随学;自拟粉刺消治疗痤疮 126 例J;中国中医药科技;1999 年 06 期 3 查旭山,陈修飏;寻常痤疮治疗体会J;江西中医药;http:/ 05 期 4 张随学 ,谭正辉 ,孙叶梅 ,李梅
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