1、植物组织培养实验方案一、实验仪器：烧杯、三角瓶、玻棒、电子天平、药匙、量筒、三角瓶、镊子、剪刀、手术刀、酒精灯、容量瓶（1L） 、PH 试纸、移液管、牛皮纸、橡皮筋、培养皿、高压灭菌锅、无菌操作台二、实验药品：大量元素：硝酸钾 KNO3、硝酸铵 NH4NO3、磷酸二氢钾 KH2PO4、硫酸镁 MgSO4.7H2O、氯化钙 CaCl2.2H2O、硝酸钙 Ca(NO3)2.4H2O、氯化钾 KCl微量元素：硼酸 H3BO3、硫酸锰 MnSO4.4H2O、硫酸锌 ZnSO4.7 H2O、钼酸钠 Na2MoO4.2 H2O、硫酸铜 CuSO4.5 H2O、氯化钴 CoCl2.6H2O、碘化钾 KI、浓
2、硫酸 Concentrated H2SO4注：NB 培养基中用浓硫酸代替碘化钾铁盐：乙二胺四乙酸二钠(Na 2EDTA)、硫酸亚铁(FeSO 47H2O)有机成分：肌醇 Myo-inositol、盐酸硫胺素 Thiamin HCl VB1、盐酸吡哆醇Pyridoxin HCl VB6、烟酸 Nicotinic acid VB5或 VPP、甘氨酸、泛酸钙 Calcium pantothenate、腺嘌呤 Adenine、L-半胱氨酸 L-cysteine、生物素 D-biotin葡萄糖、琼脂70%酒精，NaClO2% ， 0.1%生汞（HgCl 2）三、实验材料：无性系菊科蒿属植物蒌蒿嫩茎、叶、
3、根四、实验步骤1、培养基的配制以 MS 为基本培养基，附加不同浓度的 IAA、NAA 和 6-BA、琼脂 0.7%，蔗糖3%，PH5.86.0，于 121下灭菌 20min，放置备用2、外植体的取材与消毒采取直径 0.8cm 左右的嫩芽、嫩茎、嫩根，用清水将其洗干净，再用 75%的酒精浸泡30s，再用 0.1%HgCl2灭菌 7min 或者用 2% NaClO 浸泡 30min，无菌水冲洗 45 次后备用。3、接种培养在无菌条件下，用手术刀切去部分枝叶，接种于诱导培养基上，诱导芽的分化。4、培养条件每天光照 10h，光照强度为 2000lx，温度 2515、继代培养待丛生芽生成后，将丛生芽切成
4、单株接种到继代培养基（MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA）上6、生根与移栽待继代获得较多丛生芽后，将丛生芽切成单株，大部分接种到生根培养基（MS+0.25mg/LNAA+0.25mg/LIAA）上，其余再继代一次。待生根后，将生根试管苗开盖炼苗，移栽。五、实验结果与分析：NB 培养基NB MediumNB 培养基产品价格用途：用于植物组织培养 配方：（mg/L）硝酸钾(KNO3) 硫酸铵(NH4)2SO4) 氯化钙(CaCl22H2O) 磷酸二氢钾(KH2PO4) 硫酸镁(MgSO47H2O) 硼酸(H3BO3) 硫酸锰(MnSO44H2O) 硫酸锌(ZnSO47H2O) 钼酸
5、钠(Na2MoO42H2O) 硫酸铜(CuSO45H2O) 氯化钴(CoCl26H2O) 碘化钾(KI) 乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA) 硫酸亚铁(FeSO47H2O) 肌醇(Myo-inositol) 盐酸硫胺素(Thiamin HCl/VB1) 盐酸吡哆醇(Pyridoxin HCl/VB6) 烟酸(Nicotinic acid/VB5)2830 463 166 400 185 3 10 2 0.25 0.025 0.025 0.75 37.2527.85 100 10 1 1产品用法：称取本品 4.237 g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装 ,116高压灭菌 30min ,
6、备用。产品说明：用于植物愈伤组织培养。成分 分子量 使用浓度(mg/L) 硝酸钾 KNO3 101.11 200 硝酸铵 NH4NO3 80.04 480 硝酸钙 Ca(NO3)2.4H2O 236.16 470 氯化钾 KCl 74.55 150 磷酸二氢钾 KH2PO4 136.09 550 大量元素硫酸镁 MgSO4.7H2O 246.47 250 硼酸 H3BO3 61.83 0.5 硫酸锰 MnSO4.4H2O 223.01 3.0 硫酸锌 ZnSO4.7 H2O 287.54 0.5 钼酸钠 Na2MoO4.2 H2O 241.95 0.025 硫酸铜 CuSO4.5 H2O 24
7、9.68 0.025 氯化钴 CoCl2.62 237.93 0.025 微量元素浓硫酸 Concentrated H2SO4 0.5 l 乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA 372.25 37.3 铁盐硫酸亚铁 FeSO24.7H2O 278.03 27.8 肌醇 Myo-inositol 100 盐酸硫胺素 Thiamin HCl VB1 1.0 盐酸吡哆醇 Pyridoxin HCl VB6 205.6 1.0 烟酸 Nicotinic acid VB5 或 VPP 123.11 1.0 泛酸钙 Calcium pantothenate 1.0 腺嘌呤 Adenine 1.0 L-半胱氨
8、酸 L-cysteine 1.0 有机成分生物素 D-biotin 0.1 蔗糖 sucrose 342.31 g/L 琼脂 agar g/L 注：蝴蝶兰组培用摘自：Micropropagation of Phaleanopsis and Doritaenopsis by culturing shoot tips of flower stalk buds. Plant cell report (1993)13:7-11 【求助】请教用作水稻愈伤诱导再生的 CC 培养基配方以前用 MS,N6 基,现在做籼稻,需要用 CC 基,可是查了不少地方，都没有配方。请有具体配方的战友告知,或者告知原始出处
9、.PM 偶。或者，EMAIL: 非常感谢! 以下为抄录1，CC 无机大量： 20母液（g/L）KNO3 24.24NH4NO3 12.80KH2PO4 2.72MgSO4.7H2O 4.94CaCl2.2H2O/ CaCl2 11.16/8.82，CC 无机微量 I： 100母液（ g/200ml） MnSO4.4H2O/MnSO4.H2O 0.233/0.169H3BO3 0.062ZnSO4.7 H2O 0.1153，CC 无机微量 II： 1000母液（ mg/500ml）KI 4.5Na2MoO4 120CuSO4.5 H2O 12.5CoCl2.6H2O 144，CC 有机 100母液（g/100ml）VB1 0.17VB6 0.02烟酸 0.12肌醇 1.8甘氨酸 0.045，CC 铁盐 100母液（g/L）FeSO24.7H2O 2.78Na2.EDTA 3.73配制 1L CC 培养基，加麦芽糖 20g甘露醇 25gphytagel/ Agar 3g/8gVC 60mg
