1、硕士学位论文原创性声明本人所呈交的硕士学位论文，是在导师朱明军教授的指导下，独立进行科学研究工作所取得的成果。除文中已特别加以注明引用的内容外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。特此声明。论文作者（签名）：年 月 日硕士学位论文使用授权声明本人已完全了解河南中医学院有关保留、使用硕士学位论文的相关规定，同意学校保留或向国家有关部门、机构送交本学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权河南中医学院可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，
2、可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本论文（注：保密论文在解密后适用本授权声明）。特此声明。论文作者（签名）： 导师（签名）：年 月 日 年 月 日目 录摘 要 1ABSTRACT 3前 言 6材料与方法 81 实验材料 82 方法 83 观察指标 94 统计学处理 . 10结 果 . 121 血脂水平变化情况 . 122 一氧化氮水平变化情况 133 C 反应蛋白水平变化情况. 134 病理形态学改变 14理论探讨 161 中医对动脉粥样硬化病因病机的认识 162 中医药抗动脉粥样硬化作用机制研究进展163 皂角刺现代研究 . 204 本研究结果讨论 . 205 小结 22结 论 24
3、致 谢 25参考文献 . 26附录 . 31附录一：HE 染色 20 倍光镜下 31附录二：文献综述 . 33附录三：在校期间论文论著和科研情况.37摘要摘 要目的：观察皂角刺对动脉粥样硬化模型大鼠血脂、一氧化氮和 C-反应蛋白的影响。方法：取 85 只 SD 健康大鼠，雌雄各半，体重 180-220g，喂养一周适应环境，随机分为正常组、高脂组（模型组）、皂角刺低剂量组、皂角刺中剂量组（中剂量组）、皂角刺高剂量组（高剂量组）5 组，每组 17 只。按文献方法 8建立大鼠动脉粥样硬化模型，VitD3 按每公斤体重 65 万单位的总剂量分 3 天灌胃模型组和低、中、高剂量组，并饲喂高脂饲料（高脂饲
4、料配方：胆固醇 3、胆酸钠 0.5%、炼制猪油 10和丙硫氧嘧啶 0.2、白糖 5%、普通标准饲料 88.5%），喂养 8 周，每组随机抽取 2 只，检测大鼠胸主动脉，以发现动脉粥样硬化斑块为造模成功。造模成功后，正常组和模型组每天等体积蒸馏水灌胃，皂角刺低、中、高组（0.5，1，2gkg -1d-1），每天灌胃给药一次，自由进食与进水，连续 8 周。末次给药后，禁食 12 小时，给药 1 小时后以水合氯醛麻醉动物，开腹，腹主动脉采血，测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C ）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、血清一氧化氮(NO)和 C-反应蛋白(CRP
5、)的含量；留取胸主动脉，观察肉眼对比观察内膜颜色、光泽和血管壁弹性。并制作病理切片，在光镜下观察内膜光滑程度、内皮细胞(EC) 排列整齐情况，有无缺失、内膜下间隙是否变化，血管壁有无增生等情况。结果：1 饲喂高脂饮食 8 周后，成功建立动脉粥样硬化大鼠模型。2 血脂水平的变化情况：（1）总胆固醇：与模型组相比，皂角刺低剂量组可降低总胆固醇水平，差异有统计学意义（P 0.05 ）；皂角刺中、高剂量组均可降低总胆固醇水平，差异有统计学意义（P0.01)。（2）甘油三酯：与模型组相比，皂角刺低剂量组有降低甘油三酯水平的趋势，但差异尚无统计学意义（P0.05)；与模型组相比，皂角刺中、高剂量组均可降低
6、甘油三酯水平，且差异有统计学意义（P0.05)。（3）高密度脂蛋白胆固醇：与模型组相比，皂角刺低、中、高剂量组均可升高高密度脂蛋白胆固醇水平，差异有统计学意义（P0.01)。（4）低密度脂蛋白胆固醇：与模型组相比，皂角刺低、中剂量组有降低低密度脂蛋白胆固醇水平的趋势，但差异尚无统计学意义（P0.05)；与模型组相比，皂角刺高剂量组可降低低密度脂蛋白胆固醇水平，差异有统计学意义（P0.05)。1皂角刺对动脉粥样硬化模型大鼠血脂、一氧化氮及 C 反应蛋白的影响3 一氧化氮水平的变化情况：与模型组比，皂角刺低剂量组有升高一氧化氮水平的趋势，但差异尚无统计学意义(P0.05)； 与模型组相比，皂角刺中
7、、高剂量组均有升高一氧化氮水平的作用，差异有统计学意义(P0.05) 。4 C 反应蛋白水平的变化情况：与模型组相比，皂角刺低剂量组有降低 C 反应蛋白水平的作用，差异尚有统计学意义（P0.05) ；皂角刺中、高剂量组有显著降低 C 反应蛋白水平的作用，差异有统计学意义(P0.01) 。5 病理形态学改变：（1）正常组：肉眼可见主动脉形态正常，内膜光滑，无脂质沉积及斑块形成。光镜下可见主动脉结构完整，内皮细胞无脱落、增生，内膜内无泡沫细胞、淋巴细胞聚集，无平滑肌及胶原纤维增生。（2）模型组：肉眼可见主动脉内膜上有斑块形成，边缘不整齐，部分斑块成块状，向内膜凸起。光镜下可见动脉内皮细胞脱落，内膜
8、明显增厚，内膜中可见大量泡沫细胞及淋巴细胞聚集, 纤维帽下可见大量泡沫细胞和少量细胞碎片，斑块处中膜平滑肌细胞受压萎缩，可见平滑肌细胞及胶原纤维增生，部分动脉壁内可见钙化灶。（3）皂角刺低剂量组：与模型组差别不明显。（4）皂角刺中剂量组：肉眼可见主动脉内膜上有不同程度的斑块形成，呈点、斑、条状，有些融合成片，呈灶状分布，向内膜凸起。光镜下可见动脉内膜部分区域增厚,内膜中见大量泡沫细胞堆积,但较模型组轻；动脉内膜部分区域欠光滑,少量内皮细胞脱落,动脉壁各层分界尚清；平滑肌轻度增生,间质有数量不等胶原纤维增生。（5）皂角刺高剂量组：肉眼可见主动脉内膜上有不同程度的斑块形成，呈点、斑、条状，向内膜凸
9、起。光镜下可见动脉内膜部分区域增厚,内膜中见数量不等的泡沫细胞堆积,但较模型组轻；动脉内膜部分区域欠光滑, 部分区域内皮细胞脱落,动脉壁各层分界尚清；平滑肌增生不明显,间质有少量胶原纤维增生。结论：皂角刺具有降低动脉粥样硬化大鼠模型血脂中 TC、TG 、LDL 水平，升高 HDL-C 的作用，此外，皂角刺还有升高 NO 水平，降低 CRP 水平,改善动脉粥样硬化大鼠模型主动脉病理损伤的作用。实验证实，皂角刺具有调节血脂、保护内皮细胞功能和抗炎性因子作用，进而延缓动脉粥样硬化的进程。关键词：动脉粥样硬化；皂角刺；血脂；一氧化氮；C-反应蛋白2摘要Experimental Studies on E
10、ffect of Spina Gleditsiae on BloodLipid, Nitrogen Monoxide and C Reactive Proteinin Atherosclerosis RatsXing Dongmei (Internal Medicine of Chinese Traditional Medicine )Directed by Zhu MingjunAbstractObjective: To observe the effect of Spina Gleditsiae on blood lipid, nitrogenmonoxidum and C reactiv
11、e protein in atherosclerosis rats.Methods: The 85 healthy rats were randomly divided into five groups: normalgroup, high fat group (model group), Spina Gleditsiae of low dose group, mediumdose group, high dose group. There were 17 rats in each group. Then, the ratsatherosclerosis model were establis
12、hed according to the literature. the model group,the low dose group, the medium dose group and the high dose group was givenVitamin D3 65 million units per kilogram of body weight of the total dose in 3 days byusing stomach tube and feed with high fat diet for 8 weeks. The high fat diet wascomposed
13、of 3% cholesterol, 0.5% sodium cholate, 10% refining lard, 0.25propylthiouracil, 5% sugar and 88.5% normal standard diet. Selecting 2 rats in eachgroup to detect thoracic aorta, the existence of atherosclerotic plaque in thoracic aortawas considered successful. After the success establishment of the
14、 rat atherosclerosismodels, the normal group and the model group was given distilled water byintragastric administration once every day for 8 weeks. The low, medium and highdose groups were given with Spina Gleditsiae 0.5，1， 2gkg-1d-1 respectively byusing stomach tube every day for 8 weeks. The Spin
15、a Gleditsiae particles were mixedwith warm water, each group was feed with free food and water. After the lastadministration, fast for 12 hours, and 1 hour later after administration of chloralhydrate and etherized animals, laparotomy, and collected abdominal aortic blood. Thelevel of blood lipid (t
16、otal cholesterol, triglyceride, low density lipoprotein cholesterol,high density lipoprotein cholesterol), nitrogen monoxide and C reactive proteinwere tested. Specimens from thoracic aortic pathology were collected for pathologyexamination. First, observed the endometrial color, luster and elastici
17、ty of bloodvessel walls with naked eye. Then produce and observe the pathological section undermicroscope to see whether the intima was smooth, whether endothelial cells was loss,3皂角刺对动脉粥样硬化模型大鼠血脂、一氧化氮及 C 反应蛋白的影响gap change in intima, proliferation of vascular wall.Results: 1 The atherosclerosis rat
18、model was established successfully.2 The change of lipoprotein level:(1) Total Cholesterol : Compared with model group, Spina Gleditsiae of low dosecould decrease the total cholesterol level, and there was statistical difference （P 0.05)； Compared with model group, Spina Gleditsiae of medium dose an
19、d high dosegroup could decrease the total cholesterol level, and there were statistical differences（P0.01) ；(2) Triglyceride: Compared with model group, Spina Gleditsiae of low dose coulddecrease triglyceride level, and there no statistical differences（ P 0.05)；Comparedwith model group, Spina Gledit
20、siae of medium dose group and high dose group coulddecrease triglyceride level, and there was obvious statistical difference （P 0.05)；(3) High Density Lipoprotein Cholesterol: Compared with model group, SpinaGleditsiae of low dose, medium dose and high dose group could inc rease high densitylipoprot
21、ein cholesterol level, and there were statistical differences （ P0.01)；(4) Low Density Lipoprotein Cholesterol: Compared with model group, SpinaGleditsiae of low dose and medium dose group could decrease low density lipoproteincholesterol level, but there were no statistical differences （P 0.05) ；Co
22、mpared withmodel group, Spina Gleditsiae of high dose group could decrease low densitylipoprotein cholesterol level, and there was statistical difference （P0.05)；3 The change of nitrogen monoxide level: Compared with model group, SpinaGleditsiae of low dose group could increase nitrogen monoxidum, b
23、ut there was nostatistical differences （P 0.05)；Compared with normal group, Spina Gleditsiae ofmedium dose and high dose group could increase nitrogen monoxidum, and there wasstatistical differences （P 0.05)；4 The change of C-reactive protein level: Compared with model group, SpinaGleditsiae of low
24、dose group could decrease C-reactive protein, and there wasstatistical difference （P 0.05)；Compared with model group, Spina Gleditsiae ofmedium dose and high dose group could increase nitrogen monoxide, and there werestatistical differences （P 0.01)；5 The pathological changes:(1) Normal group: viewe
25、d with naked eyes, the form of aorta was normal; theintima was smooth, without the disposition of lipid and plaque. Observed undermicroscope, the structure of aorta was integrity, without loss and proliferation of4摘要endothelia cells, without foam cells and accumulation of lymphocytes, witho utprolif
26、eration of smooth muscle and collagen fiber.(2) Model group: viewed with naked eye, there was plaque deposited, with raggededge, some plaque bumped to the intima. observed under microscope, endothelialcells fell off, the intima was thicken obviously, with accumulation of lymphocytes andlarge foam ce
27、lls in the intima, with large foam cells and few cellular debris in fibercap, smooth muscle of tunica media in the location of plaque was squeezed andatrophy, with accumulation of smooth muscle and proliferation of collagen fiber, thecalcify focus could be found in some arterial wall.(3) Spina Gledi
28、tsiae of low dose group: the condition was similar to the modelgroup.(4) Spina Gleditsiae of medium dose group: viewed with naked eye, there weredifferent level of plaque (point or spot or strip) deposited. Some plaque appearedconfluent and bumped to the intima. Observed under microscope, the intima
29、 wasthicken partly, few endothelial cells fell off, with accumulation of large foam cells inthe intima, (the condition was better than those in model group), the layers of theartery were clear, with the proliferation of the smooth muscle and collagen fiberslightly.(5) Spina Gleditsiae of high dose g
30、roup: viewed with naked eye, there weredifferent level of plaque (point or spot or strip) deposited. Some plaque appearedconfluent and bumped to the intima (the condition was better than those in modelgroup). Observed under microscope, the intima was thicken partly, with accumulationof large foam ce
31、lls in the intima, the layers of the artery were clear, with theproliferation of the smooth muscle and collagen fiber slightly.Conclusions: Spina Gleditsiae has the function of decreasing cholesterol,triglyceride, low density lipoprotein cholesterol and increasing the high densitylipoprotein level.
32、In addition, there was the rise in nitrogen monoxide and the declinein C-reactive protein. The thoracic aorta pathologic injury also reduced. This studysuggested that Spina Gleditsiae could regulate lipid level, protect the function ofendothelial cells and anti-inflammatory, then delay and prevent t
33、he progress ofatherosclerosis.Key words: Spina Gleditsiae; Atherosclerosis; Serum Lipid; nitrogen monoxide;C-reactive protein5皂角刺对动脉粥样硬化模型大鼠血脂、一氧化氮及 C 反应蛋白的影响前 言动脉粥样硬化（Atherosclerosis ，AS ）是一种慢性进展性疾病。从青少年时期开始，病变即已出现，主要变现为脂质沉积；随着年龄的增长，同时受各种危险因素如肥胖、高血压、糖尿病等的影响，病变逐渐加重，进而导致各种急性心脑血管疾病如急性心肌梗死和猝死1，粥样硬化斑块破裂
34、和血栓形成部位的机化最终导致斑块的进展，并加重狭窄2,3。同时，AS 还是一种全身性疾病，可以在多个脏器引起一系列相应的临床事件：在脑表现为卒中或短暂脑缺血发作（TIA）；在心脏表现为心绞痛和心肌梗死（MI）；在外周则表现为间歇性跛行等。从 1990 年起动脉粥样硬化已持续成为公众首位死亡原因。根据 2007 年中国心血管病年报4公布数据显示，每年全国心血管死亡人数达 300 万人，其中每死亡 3 人中就有 1 人是心血管病。2008 年中国卫生部统计信息中心发布的中国卫生事业发展情况统计公报结果显示，从 1990 年起，我国心血管疾病死亡率和死亡构成比已持续为居民首位死亡原因，并呈年轻化趋势
35、，目前已占全国总死亡人数的 40.27%，每年，用于心血管病的直接医疗费用已达 1300 亿元。在致残致死性的心血管疾病中，75%以上是动脉粥样硬化性疾病5。研究证实，AS 的发生发展是一个相当漫长的过程，其早期病变在幼儿时期就已经存在6，7 。在动脉粥样硬化性疾病中，以冠心病和卒中为重，常在首次发病时就有很高的致残致死风险。AS 以内皮受损为主要始动环节，以低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）为核心，尤其是小而致密的氧化 LDL-C，其危害性比 LDL-C 强十倍。内皮细胞的受损为 LDL-C 进入血管内膜下创造了条件。LDL-C 进入血管壁后，首先被氧化形成氧化 LDL-C，继而氧化 LDL-
36、C便释放大量趋化因子，促使血液中的单核细胞移向血管壁，单核细胞进入血管壁后形成巨噬细胞，巨噬细胞吞噬氧化 LDL-C 形成泡沫细胞，泡沫细胞破裂后，释放大量游离 LDL-C，在内皮下形成“ 脂质核心”。激活的巨噬细胞、淋巴细胞、内皮细胞可以通过表达各种炎性因子和生长因子，促使平滑肌细胞增生、迁移，形成纤维帽。当 LDL-C不断氧化，被巨噬细胞吞噬，使得纤维帽变薄；同时炎症细胞释放的多种蛋白水解酶能使纤维帽降解加速，使斑块不稳定性增加，容易破裂。因此，在 200 余种动脉粥样硬化的危险因素中，血脂异常占有很大的权重，同时炎症和内皮功能障碍又加速动脉粥样硬化的进程。目前现代医学主要通过调节饮食，控
37、制体重，适量运动等改变不良生活方式；运用调节血脂、抗血小板和抗凝药物；对于严重的狭窄或闭塞性病变，采用支架植入术或旁路移植术。但上述各种方法都有一定的局限性。因此充分发挥中医药的优势就显得十分重要。祖国医学虽无“动脉粥样硬化” 之名，但其相关临床表现和发病特点在6前言历代文献中已早有记载。多数学者常把 AS 归属于中医学的“胸痹” 、“真心痛” 、“头痛”、“眩晕”、“健忘” 、“ 痴呆”、“中风”、“ 不寐”等范畴。其病因病机十分复杂，多与年龄、七情、劳倦、饮食等密切相关；病机多为本虚标实，并多责之于肝脾肾。中药主要通过调节脂质代谢、抑制脂质过氧化、调节血管平滑肌增生、保护血管内皮细胞功能、
38、抗血栓及调节前列环素（PGI2）/血栓素 A2（TXA2）、抗炎等作用防治动脉粥样硬化的发生发展。目前，AS 斑块中的不稳定斑块及其引发的与之相应的一系列心脑血管事件，已引起医学界广大专家、学者的高度重视。目前，AS 的临床治疗缺乏专一性、针对性。中医药多靶点干预的优势有望在一定程度上稳定斑块，进而减少心脑血管事件的发生。但中医药的多数临床研究缺乏与之密切相关的基础实验研究。本研究通过观察皂角刺对动脉粥样硬化模型大鼠血脂、一氧化氮及 C 反应蛋白的影响，探讨其在抗 AS 的作用机制，为临床干预 AS 提供科学、系统的理论依据，为中医药防治 AS 的进一步研究提供实验依据。进一步研究应严格按照临
39、床药理实验管理规范和循证医学的要求，开展多中心大规模临床研究，科学证明其防治 AS 的疗效。同时还应注重和加强基础研究，从分子水平探讨中医药干预不稳定斑块的作用机制，为中医药确定新的治疗靶向和有效防治 AS 提供理论与试验依据。7皂角刺对动脉粥样硬化模型大鼠血脂、一氧化氮及 C 反应蛋白的影响材料与方法1 实验材料1.1 实验动物选用 SD 健康大鼠 85 只,体重在 20020g，雌雄各半；由河南省实验动物中心提供。动物质量合格证编号：0003213。实验前动物置于室内适应环境一周，室温控制在 20-25，采用架式分笼喂养，标准饲料，饮水为自来水。1.2 实验药品皂角刺颗粒剂（购于河南中医学
40、院第一附属医院）按临床常用剂量 12g 换算12g/60kg,按 200g 大鼠换算剂量 1gkg-1d-1 为中剂量 ,乘以 2 为高剂量组 2 gkg-1d-1 ，除以 2 为低剂量组 0.5 gkg-1d-1，药物均溶于温水中，灌胃给药。VitD3、胆固醇、胆酸炼制猪油和、丙硫氧嘧啶。均购于河南省实验中心。1.3 试剂大鼠血清总胆固醇(TC) 、甘油三酯 (TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定试剂盒。大鼠一氧化氮（NO）硝酸还原酶法测定试剂盒。大鼠 C-反应蛋白（CRP）放射免疫法试剂盒。1.4 主要仪器设备JY-1001 型电子天平：上海民桥电子
41、仪器厂B2-93 自动双重纯水蒸馏器：上海亚荣生化仪器厂H.H.S11-2B 电热恒温水浴箱：上海医疗器五厂OlympusYL-080 显微镜：日本 Olympus 株式会社LEICA RM2245 型石蜡切片机：上海首立实业有限公司TDL-5-A 型离心机：上海安亭科学仪器厂酶标仪 MK-3 系列 353 型：北京华威兴业科技有限公司FA 1104 型微量电子天平：上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂南京劳拉 1000 全自动生化分析仪：南京劳拉电子有限公司TB-718E 型生物组织自动包埋机：湖北泰维医疗科技有限责任公司TB-718 生物组织包埋机（冷台）：湖北泰维医疗科技有限责任公司TK-
42、218 型恒温摊片烤片机：湖北泰维医疗科技有限责任公司LEICA RM2245 旋切片机：上海首立实业有限公司2 方法8kg d-1），每天灌胃给药一次，自由进食与进水，连续 8 周。材料与方法2.1 动物模型的建立和分组取 85 只 SD 健康大鼠，雌雄各半，体重 180-220g，喂养一周适应环境，随机分为正常组、高脂组（模型组）、皂角刺低剂量组（低剂量组）、皂角刺中剂量组（中剂量组）、皂角刺高剂量组（高剂量组）5 组，每组 17 只。按文献方法 8建立大鼠动脉粥样硬化模型，VitD3 按每公斤体重 65 万单位的总剂量分 3 天灌胃模型组和低、中、高剂量组，并饲喂高脂饲料（高脂饲料配方：
43、胆固醇 3、胆酸钠 0.5%、炼制猪油 10和丙硫氧嘧啶 0.2、白糖 5%、普通标准饲料 88.5%），喂养 8 周，每组随机抽取 2 只，检测大鼠胸主动脉。AS 模型的判定：造模 8 周后做病理切片示动脉内膜粗糙,可见大量脂点、脂纹和脂质斑块沉积，斑块内崩解脂质及纤维帽内可见钙盐沉积，内皮细胞大量脱落,内膜增厚,中膜弹力纤维断裂，局部平滑肌增生，以发现动脉粥样硬化斑块，提示造模成功。2.2 给药正常组和模型组每天等体积蒸馏水灌胃，皂角刺低、中、高组（0.5，1，2g-12.3 样品制备及检测末次给药后，禁食 12 小时，给药 1 小时后以水合氯醛麻醉动物，开腹，腹主动脉采血。留取胸主动脉，
44、观察肉眼对比观察内膜颜色、光泽和血管壁弹性。并制作病理切片，在光镜下观察内膜光滑程度、内皮细胞(EC) 排列整齐情况，有无缺失、内膜下间隙是否变化，血管壁有无增生等情况。3 观察指标3.1 血脂水平测定用全自动生化分析仪检测大鼠血清胆固醇（TC）、甘油三酯（ TG）、低密度脂蛋白（LDL-C ）、高密度脂蛋白（ HDL-C）。结果以 mmol/L 表示。3.2 大鼠一氧化氮（NO）的测定结果以 mol/L 表示。按试剂盒操作说明进行。具体操作如下：注意：实验开始前，提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测时都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行
45、稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。1.加样：分别设空白管、标准管和测定管。空白管加入双蒸水 0.1ml 和混合试剂 0.4ml；标准管加入 0.1ml100umol/L 标准应用液和 0.4ml 混合试剂；测定管加入 0.1ml 待测样品和 0.4ml 混合试剂。100 余孔分别加 0.1ml 待测样品和 0.4ml混合试剂。注意加样时将样品尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，37准确水浴 60分钟。9皂角刺对动脉粥样硬化模型大鼠血脂、一氧化氮及 C 反应蛋白的影响2.添加试剂：于空白管依序加入 0.2 ml 试剂三和 0.1 ml 试剂一；于标准管和测定管中依序加入 0.2 ml 试剂三和 0.
46、1 ml 试剂一。充分旋涡 30 秒，室温静置 40 分钟，3500-4000 转/分，离心 10 分钟，取上清显色。3.添加显色剂：取空白管、标准管和测定管中的上清液 0.5 ml 于新试管中，在取得的上清液中分别加入显色剂 0.6 ml 混匀，室温静置 10 分钟，蒸馏水调零,550nm, 0.5cm 光径，测定各管吸光度值。3.3 大鼠 C-反应蛋白（CRP）的测定结果以 g/ml 表示。按试剂盒操作说明进行测定。具体操作如下：实验开始前，提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂
47、盒的检测范围。1.加样：分别设 T 管、非特异 NSB 管、“0” 标准 B0 管、标准管、待测样品管。T 管加 125I-CRP100ul；非特异 NSB 管加入 150ul“0”标准和 100ul125I-CRP；“0”标准 B0 管加入 50ul“0”标准、100 ul125I-CRP 和 100ulCRP 抗体；标准管加 50 ul 标准品，100 ul125I-CRP 和 100ulCRP 抗体，样品管加入 50ul 样品，100 ul125I-CRP 和 100ulCRP 抗体，100 余孔分别加 50ul 样品，100 ul125I-CRP和 100ulCRP 抗体。注意加样将样
48、品尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，37温育45 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。2.依序于非特异 NSB 管、“0”标准 B0 管、标准管、待测样品管加入 500ul分离试剂，充分混匀后，室温放置 15 分钟后 3500 转/分离心 15 分钟，弃上清液后，测总 T 及沉淀物放射性计数 60 秒。3.4 观测大鼠胸主动脉血管内皮情况肉眼观察：从主动脉起始部至髂总动脉分叉处取动脉条全长，沿腹侧纵行剖开，对比观察内膜颜色、光泽和血管壁弹性的变化情况。光镜下观察：光镜样品制备：于胸主动脉上段取材，10福尔马林固定，逐级酒精脱水，石蜡包埋，常规切片，HE 染色，光镜观察、拍照
49、。观察指标：分别观察正常组、高脂模型组、皂角刺低、中、高剂量组大鼠胸主动脉内膜光滑程度、内皮细胞(EC) 排列整齐情况，有无缺失、内膜下间隙是否变化，以及血管壁增生情况。4 统计学处理数据处理应用 SPSS17.0 for Windows 统计软件包。计量资料采用均数 标准差（ xS）表示，组间比较采用单因素方差分析；先确定样本是否符合正态分布，10材料与方法再行方差齐性检验，根据方差齐性选用检验方法；治疗前后比较采用两样本配对t 检验。P 0.05 为有统计学意义。11角刺对动脉粥样硬化大鼠模型血脂、一氧化氮及 C 反应蛋白的影响结 果1 血脂水平变化情况1.1 总胆固醇水平变化情况结果显示：与模型组相比，皂角刺低剂量组可降低总胆固醇水平，差异有统计学意义（P 0.05）；皂角刺中、高剂量组均可降低总胆固醇水平，差异有统计学意义（P0.01)。表 1 各组中 TC 含量的比较（ x S）（单位： mmol/L）组别正常组模型组低剂量组中剂量组高剂量组数量1515151515TC1.3650.4252.3230.351#1.8710.495*1.8320.499*1.7390.471*注：与正常组比较，#：P0.
