1、肝糖原的提取和鉴定一、实验目的1、 学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。2、 正确掌握使用离心机的方法步骤。二、实验原理三、实验步骤（一） 、肝糖原提取1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。称取肝组织约2g，置研钵中，加入 10%三氯乙酸 2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨 5min。2、再加 5%三氯乙酸 4ml，继续研磨 1min，至肝脏组织已充分磨成糜状为止，转入离心管，然后以 2000r/min 离心 10min。3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的 95%乙醇，混匀后，此时糖原成絮状沉淀析出。4、溶液以 2000r/min
2、离心 10min。弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上 12min。5、在沉淀内加入蒸馏水 2ml，用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。（二） 、鉴定1、取 2 支小试管 A、B，一支 A 加糖原溶液 10 滴，另一支 B 加蒸馏水 10 滴，然后在两管中各加碘-碘化钾溶液 1 滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。2、再取 2 支小试管，将剩余的糖原溶液平分倒入两试管，试管甲加浓盐酸 3 滴，试管乙加蒸馏水 3 滴，将两管在沸水浴中加热 10min 以上。取出冷却，试管甲中逐滴加入20%NaOH 溶液，并且 PH 试纸检验，直至溶液成中性。试管乙中加入同等滴数的蒸馏水。3、向甲、乙两试管各加
3、入班氏试剂 2ml，再置沸水浴中加热 5min，取出冷却。观察有无沉淀生成。注意事项：1、 实验小白鼠在实验前必须饱食。2、 脱臼法处死小白鼠：手提着小白鼠将其小白鼠尾巴将其从笼子里取出，使其四脚着地，另一支手按着小白鼠耳后，尾巴向外拉，使其脊柱断节，背部脊髓断裂，致使四肢瘫痪。3、 肝脏离体后，所得肝脏必须迅速以三氯乙酸处理。4、 研磨应充分，这是实验成败的关键。5、 离心时与另一组同学的离心管平衡，对称放入离心机。6、 鉴定的第（2）步，试管甲中溶液必须调至中性或偏碱性。四、实验结果试管 A 试管 B棕红色 黄色试管甲 试管乙砖红色沉淀 无沉淀分析：1、 实验小白鼠在实验前必须饱食，因为空
4、腹时，血糖含量降低，肝糖原分解来提高血糖含量，肝糖原含量易于减少或耗尽。2、 吸去肝脏附着的血液，可能是血液中含有还原性的葡萄糖，会影响后面糖原的鉴定。3、 肝脏离体后，肝糖原会在酶的作用下迅速分解。所以肝脏必须迅速以三氯乙酸使蛋白质变性以防其分解。4、 研磨应充分，研磨使细胞破裂，肝糖原释放出来。研磨不充分会得不到糖原或含量很少，影响后面的鉴定。加石英砂利于研磨。5、 经第一次离心，蛋白质会沉于离心管底部糖原则留于溶液中。 （上清液中） 。6、 糖原不溶于乙醇溶液，所以加入同体积的 95%乙醇，混匀后，糖原会成絮状沉淀析出。浑浊程度反映了糖原的多少。越浑浊，糖原越多。7、 经第二次离心，糖原
5、沉于离心管底部，糖原微溶于水，所以在加入蒸馏水后，沉淀会在搅拌下溶解成糖原溶液。8、 糖原为高分子化合物，与碘作用呈棕红色，所以试管 A 出现棕红色溶液。试管 B中为水，加入碘-碘化钾后，将仍为碘 -碘化钾溶液的颜色，黄色。9、 糖原无还原性，不会与班氏试剂在沸水浴中生成砖红色的 Cu2O 沉淀，所以试管乙中仍为班氏试剂的颜色，蓝色，无沉淀。10、 糖原会在浓盐酸在沸水浴下分解成小分子化合物，其中有还原性的麦芽糖和葡萄糖。还原性糖会在碱性条件下，班氏试剂与其在沸水浴下生成砖红色 Co2O沉淀。班氏试剂为碱性溶液，所以须用 20%NaOH 溶液中和至中性。所以试管甲中会出现砖红色沉淀。11、 班氏试剂中有 CuSO4，NaCO3 和柠檬酸钠。CO32-提供碱性环境，柠檬酸钠为络合物，帮助 Cu2+与葡萄糖反应，沸水浴下，Cu2+变为 Cu+，即 Cu2O，Cu2O为砖红色沉淀。葡萄糖被氧化为糖酸，麦芽糖亦如此。所以试管甲中有砖红色沉淀。12、 结果表明，肝糖原被成功提取出来，且含量较多。
