1、 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准GB 201-发布 201-实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会中 华 人 民 共 和 国 农 业 部 发布国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 总 局食品安全国家标准植物源性食品中草铵膦残留量的测定液相色谱-质谱联用法National food safety standardDetermination of glufosinate-ammonium residue in foods of plant originLiquid chromatography tandem mass spectrometry（征求意见稿）附件：3GB XXXXX
2、XXXXI前 言本标准系国内首次发布。GB XXXXXXXXX1食品安全国家标准 植物源性食品中草铵膦残留量的测定 液相色谱-质谱联用法1 范围本标准规定了植物源性食品中草铵膦残留量的液相色谱-质谱联用方法。本标准适用于植物源性食品中草铵膦残留量的测定。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 2763 食品中农药最大残留限量GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理试样中的草铵膦用水和甲醇提取，再经固相材料分散净化处理，净化液与氯甲酸-9-
3、芴基甲酯（9-Fluorenylmethyl chloroformate）反应后生成的衍生物草铵磷-FMOC（glufosinate-FMOC）经液相色谱-质谱联用法检测，外标法定量。 4 试剂和材料除另有说明外，在分析中仅使用分析纯试剂和GB/T 6682中规定的一级水。4.1 试剂4.1.1 乙腈（CH 3CN，CAS 号：75-05-8）：色谱纯。4.1.2 甲醇（CH 3OH，CAS 号：67-56-1）：色谱纯。4.1.3 乙酸铵（CH 3COONH4，CAS 号：631-61-8）。4.1.4 硼酸钠（Na 2B4O710H2O，CAS 号：1303-96-4）。4.1.5 氯甲酸
4、-9-芴基甲酯（C 15H11ClO2，CAS 号：28920-43-6）：纯度 99.0%，04保存。4.2 溶液配制4.2.1 硼酸盐缓冲溶液（50.0 g/L，pH=9）：称取 5g 硼酸钠（Na 2B4O710H2O），用水溶解并定容至 100 mL。4.2.2 氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液（10.0 g/L）：称取 1g 氯甲酸-9-芴基甲酯，用乙腈溶解并定容至 100 mL。GB XXXXXXXXX24.2.3 乙酸铵水溶液（5 mmol/L）：称取 0.385g 乙酸铵溶解于适量水中，用水定容至 1000 mL。4.3标准品草铵膦（C 5H18N3O4P，CAS 号：77182-
5、82-2）标准品：纯度99.0% 。4.4标准溶液配制4.4.1 草铵膦标准储备溶液（100 mg/L）：准确称取草铵膦标准品 10.0 mg 于 50 mL 烧杯中，用水溶解后转移到 100 mL 容量瓶中，并用水定容。放置于 04冰箱，有效期 6 个月。4.4.2 草铵膦标准中间溶液（10 mg/L ）：吸取 5.0 mL 草铵膦标准储备溶液于 50 mL 容量瓶中，用水定容。放置于 04冰箱，有效期 1 个月。4.5材料4.5.1 中性氧化铝（Al 2O3，CAS 号：1344-28-1）：0.075 mm0.15 mm。4.5.2 多壁碳纳米管（MWCNTs）：粒径范围 10 nm20
6、 nm；颗粒物长度：5 m15 m；比表面积（22525）m 2/g。4.5.3 滤膜：0.22 m，有机系。5 仪器和设备5.1 液相色谱-质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2 分析天平：感量 0.000 1 g、感量 0.0 1 g。5.3 组织捣碎仪。5.4 离心机：转速不低于 10 000 r/min。5.5 涡旋振荡器。5.6 恒温水浴锅。6 试样制备蔬菜、水果和食用菌样品按相关标准取一定量，样品取样部位按照 GB 2763 规定执行。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有
7、差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段或处理；取后的样品将其切碎，充分混匀，用四分法取样或直接放入组织捣碎机中捣碎成匀浆。匀浆放入聚乙烯容器中。取谷类样品 500 g，粉碎后使其全部可通过 425 m 的标准网筛，放入聚乙烯瓶或袋中。取油料作物、茶叶、坚果和香辛料样品各 500 g，粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。植物油类搅拌均匀。试样于-18以下温度保存。GB XXXXXXXXX37 分析步骤7.1 提取7.1.1 蔬菜、水果、食用菌类称取 10 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 离心管中，参见附录 A 补水，然后加入 10 mL 甲醇（4.1.2），涡旋振荡 2 min
8、 后，以 3800 r/min 离心 5 min，待净化。7.1.2 香辛料、茶叶类称取 2 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 离心管中，参见附录 A 补水，然后加入 10 mL 甲醇（4.1.2），涡旋振荡 2 min 后，以 3800 r/min 离心 5 min，待净化。7.1.3 谷物、坚果、油料作物、植物油类称取 5 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 离心管中，参见附录 A 补水，然后加入 10 mL 甲醇（4.1.2），涡旋振荡 2 min 后，以 3800 r/min 离心 5 min，待净化。7.2 净化7.2.1 蔬菜、水果、坚果、食用菌类、香辛料、茶
9、叶类、谷物类准确吸取1 mL提取液于称有5 mg多壁碳纳米管（4.5.2）的 2 mL离心管中，涡旋1 min后，以10 000 r/min 离心3 min，取上清液过0.22 m有机系滤膜（4.5.3）于另一个2 mL离心管中，待衍生化。7.2.2 油料作物类用吸量管准确吸取4 mL提取液于 5 mL离心管中，置于-20的冰箱中冷冻过夜，然后取1 mL上清液于称有5 mg 多壁碳纳米管（4.5.2）和50 mg中性氧化铝（4.5.1）的2 mL离心管中，涡旋1 min后，以10 000 r/min 离心3 min，取上清液过0.22 m有机系滤膜（4.5.3）于另一个2 mL离心管中，待衍生
10、化。7.2.3 植物油类准确吸取1 mL提取液直接过0.22 m有机系滤膜（4.5.3）于另一个2 mL离心管中，待衍生化。7.3 衍生化准确吸取0.5 mL净化后的提取液于2 mL离心管中，加入0.5 mL 硼酸盐缓冲溶液（4.2.1） ，混匀后再加入0.5 mL氯甲酸-9-芴基甲酯乙腈溶液（4.2.2） ，涡旋 1min，于40水浴中衍生1 h，衍生后以10 000 r/min离心1 min，取上清液过0.22 m有机系滤膜（ 4.5.3） ，供检测。准确吸取草铵膦标准溶液（7.5）0.5 mL按此方法同时进行衍生化。7.4 仪器参考条件GB XXXXXXXXX47.4.1 液相色谱参考条
11、件a) 色谱柱 ：C 18，50 mm 2.1 mm，粒径1.7 m，或相当者；b) 流动相：A为5 mmol/L 乙酸铵水溶液，B为乙腈，梯度洗脱程序见表 1；c) 流速： 0.2 mL/min；d) 柱温：室温； e) 进样体积：5 L。表 1 梯度洗脱程序（V A + VB）时间min流动相VA流动相VB0 95 54 70 306 70 306.1 5 958.0 5 958.1 95 510 95 57.4.2 质谱参考条件a) 离子源：电喷雾离子源；b) 扫描方式：正离子扫描； c) 喷雾电压：3500 V； d) 毛细管温度：320 ； e) 气化温度：300； f) 鞘气（N
12、2）： 45 psi；g) 辅助气（N 2）：10 psi；h) 碰撞气氩气：1.5 mTorr；i) 检测方式：多反应监测（MRM） ，多反应监测条件见表2。表 2 草铵膦衍生物 glufosinate-FMOC 的保留时间和多反应监测（MRM）条件中文名称 保留时间min定量离子对 定性离子对 碰撞能量V404.0/182.0 15草铵膦衍生物 5.5 404.0/182.0 404.0/208.0 10GB XXXXXXXXX57.5 标准工作曲线将草铵膦标准中间溶液用空白提取液稀释成质量浓度为0.01 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L和 1 mg/L的系
13、列基质匹配标准溶液，经（7.3）衍生化后按参考色谱和质谱条件测定。以草铵膦质量浓度为横坐标，其衍生物的峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。基质匹配标准溶液应现配现用。7.6 定性及定量7.6.1 保留时间被测试样中草铵膦衍生物glufosinate-FMOC色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在 2.5%之内。7.6.2 定量离子、定性离子及子离子丰度比在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定性离子必须出现，至少应包括一个母离子和两个子离子，而且同一检测批次，对同
14、一化合物，样品中目标化合物的两个子离子的相对丰度比与浓度相当的标准溶液相比，其相对偏差不超过表 3 规定的范围，则可判断样品中存在草胺磷。表 3 定性时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度 50% 20% 至 50% 10% 至 20% 10%允许相对偏差 20% 25% 30% 50%7.7 测定将基质匹配标准溶液和待测溶液经衍生化后分别注入液相色谱-质谱联用仪中，以保留时间和定性离子定性，样品中草铵膦质量浓度应在标准工作曲线质量浓度范围内，超过标准工作曲线质量浓度上限的样品应稀释后进样，采用外标法定量。同时做空白试验。7.8 空白试验除不加试样外，采用完全相同的步骤进行平行操作。8 结果
15、计算试样中草铵膦的残留量以质量分数 w 计，数值以毫克每千克 （mg/kg ）表示，按公式（1）计算：. (1)SsAvm式中：A 试样溶液中草铵膦衍生物的峰面积；As 标准溶液中草铵膦衍生物的峰面积；GB XXXXXXXXX6S 基质匹配标准工作溶液中草铵膦的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； m 试样的质量，单位为克（g）；v 提取溶液总体积，单位为毫升（mL），v=20。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，保留两位有效数字，当结果大于 1 mg/kg 时保留三位有效数字。9 精密度9.1 在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差不大于重复性限（r） ，重复性
16、限（r ）的数据为：含量为 0.05 mg/kg 时，重复性限（r ）为 0.01；含量为 0.1 mg/kg 时，重复性限（r ）为 0.02；含量为 0.5 mg/kg 时，重复性限（r ）为 0.09；含量为 1 mg/kg 时，重复性限（r ）为 0.19。9.2 在再现性条件下，两次独立测定结果的绝对差不大于再现性限（R） ，再现性限（R ）的数据为：含量为0.05 mg/kg时，再现性限（R）为0.02；含量为0.1 mg/kg时，再现性限（R）为0.04；含量为0.5 mg/kg时，再现性限（R）为0.16；含量为1 mg/kg时，再现性限（R）为0.24。10 其他香辛料和茶叶
17、的定量限为0.1 mg/kg，其它样品的定量限为 0.05 mg/kg。11 图谱图1 5 mg/L草铵膦衍生物标准溶液的全扫描质谱图114.1136.0182.0207.9 360.0404.0426.0448.0+MS, 5.8min #439, Baseline subtracted(0.80)0.00.20.40.60.81.06x10Intens.100 200 300 400 500 600 700 m/zGB XXXXXXXXX7图2 0.01 mg/L草铵膦衍生物标准溶液色谱图GB XXXXXXXXX8附 录 A（资料性附录） 所选基质含水量、称样量及提取前补水量信息表表 A.
18、1 所选基质含水量、称样量及提取前补水量信息表基质名称 含水量%称样量g提取前补水量g结球甘蓝 85 10 1.5芹菜 95 10 0.5番茄 95 10 0.5茄子 90 10 1.0马铃薯 80 10 2.0萝卜 95 10 0.5菜豆 75 10 2.5韭菜 85 10 1.5苹果 85 10 1.5桃 90 10 1.0葡萄 80 10 1.5柑橘 85 10 1.5香蕉 75 10 2.5木瓜 90 10 1.0香菇 90 10 1.0杏仁 10 5 10大豆油 10 5 10糙米 10 5 10小麦 10 5 10玉米 10 5 10花生 10 5 10绿茶 10 2 10花椒 10 2 10注 1：不包含在本表中的基质可根据其含水量测试结果进行补水。注 2：按照基质含水量补水至 10g。
