1、广西地方标准大叶钩藤药材的质量要求(征求意见稿)编 制 说 明广西壮族自治区中医药研究院二一七年一月一、工作概况（一）任务来源与项目编号本标准是广西壮族自治区质量技术监督局下达的2014年第四批广西地方标准制定（修订）计划(桂质监函(2014)381号)，项目编号为：2014-0434。（二）起草单位广西壮族自治区中医药研究院。（3）主要起草人员名单及职务或职称研制人员 姓名 职务/职称 现从事专业 所在单位项目负责人 张颖 助理研究员 中药化学 广西中医药研究院张赟赟 助理研究员 药物分析 广西中医药研究院李嘉 副主任中药师 中药学 广西中医药研究院何春欢 助理研究员 中药化学 广西中医药研
2、究院陈锋 助理研究员 中药分析 广西中医药研究院杨海船 助理研究员 分析化学 广西中医药研究院姜平川 研究员 药学 广西中医药研究院李红 助理研究员 分析化学 广西中医药研究院主要参加人员巫凯 实习研究员 药学 广西中医药研究院二、标准制定的目的及意义大叶钩藤为2015版中国药典收录的钩藤品种之一，为茜草科植物大叶钩藤Uncaria macrophylla Wall. 的干燥带钩茎枝。现代药理研究表明，钩藤具有降压、抗心律失常、镇静、抗癫痫等多种药理作用，临床上用于治疗高血压、癫痫、眩晕、头痛等，现已成为治疗高血压方剂中的常用药物。大叶钩藤(Uncaria macrophylla Wall.)
3、为广西的优势药材，资源较为丰富。经研究发现，其活性成分钩藤碱和异钩藤碱等生物碱的含量较高。因此，本项目对大叶钩藤的质量检测规程进行研究，对其感官指标、鉴别、水分、总灰分、浸出物、异钩藤碱的含量等方面进行规定，建立大叶钩藤药材的地方标准，提高了大叶钩藤药材质量的控制水平，为相关药品生产企业提供技术服务。有利于大叶钩藤及含有其中成药质量的控制，从而保障临床使用的安全、有效，为开发高效低毒的新药奠定基础，促进药材资源的合理开发与应用。三、编制过程（一）认真学习中华人民共和国标准法、标准化工作导则、标准制定和产品标准编写规定等相关文件资料，研究确定标准的编写原则和项目的实施方案。参照有关国家标准、中国
4、药典与行业标准，并根据本产品的特点而制定标准。力求标准的各项指标均符合国家相关标准的规定，各项指标的试验方法引用国家相关标准中规定的方法，引用国家标准、中国药典与行业标准，并参照执行。（二）参考中国药典2015年版钩藤项下要求，进行感官指标、鉴别、水分、总灰分、浸出物、异钩藤碱含量等研究工作，并对不同采收期样品进行了分析检验，建立了灵敏度高、专属性强的测定分析方法。四、 本标准编写原则、依据原则：遵循全面、科学、合理、可行的原则，力求做到科学、规范、等级分明、指标准确、操作易行，符合国情、区情并与国际接轨。依据：GB/T 1.1 标准化工作导则第 1 单元：标准的起草与表述规则第 1 部分：标
5、准编写的基本规定。五、 标准主要技术内容的确定（一）范围 范围说明：本标准规定了大叶钩藤的要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存。本标准适用于广西境内大叶钩藤( Uncaria.macrophylla Wall.) 的质量检测。（二）规范性引用文件 共引用国家现有标准 4 个。下列文件中的条款通过本标准的引用而成为为本标准的条款。凡是注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准。凡是不注明日期的引用，其最新版适用于本标准。中国植物志 （1999年版）中华人民共和国药典2015 年版一部中华人民共和国药典2015 年版四部通则 0832水分测定法中
6、华人民共和国药典2015 年版四部通则 2302灰分测定法中华人民共和国药典2015 年版四部通则 2201醇溶性浸出物测定法中华人民共和国药典2015 年版四部通则 0211药材和饮片取样法GB/T 191 包装储运图示标志（三）术语和定义 对本标准的大叶钩藤进行规范。（四）技术要求本部分对大叶钩藤的感官指标及理化指标（包括薄层鉴别、水分、总灰分、浸出物、异钩藤碱含量等方面）进行规定。（五）试验方法及其说明 1 感官指标根据采集广西区内 10 批大叶钩藤，经药材基原研究，制作了药材标本，描述其形态学特征，以及中国植物志 （1999 年版）相关要求，本部分对广西区内大叶钩藤药材的感官指标进行了
7、要求。2 理化指标测定2.1 薄层鉴别取各批大叶钩藤药材粉末 2g，加甲醇 30ml，超声 30 分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇 2ml 使溶解，作为供试品溶液。另取异钩藤碱对照品，加甲醇制成每1ml 含 0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法( 中华人民共和国药典2015 年版通则 0502)试验，吸取上述两种溶液各 5-10L，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以石油醚（60-90）-丙酮(6:4) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。实验结果：在各批大叶钩藤供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，故收入标准正文。在供试品溶液制备方面，考察了甲醇超声、
8、氨水浸泡氯仿提取的方法，结果表明两种方法效果相近，考虑到甲醇超声提取操作简便，故采用之。2.2 水分、总灰分与浸出物水分按中华人民共和国药典2015年版四部通则0832水分测定法第四法测定。总灰分按中华人民共和国药典2015年版四部通则2302灰分测定法测定。浸出物按中华人民共和国药典2015 年版四部通则 2201 醇溶性浸出物测定法测定。因各批次结果均复合药典规定，故方法均未做更改。2.3 异钩藤碱的含量测定大叶钩藤中含生物碱类成分，实验研究发现其中异钩藤碱的含量较高，因此选用异钩藤碱作为大叶钩藤药材质量控制的指标性成分。2.3.1 色谱条件以异钩藤碱的保留时间、峰形、分离度为考察指标，通
9、过摸索流动相配比、柱温，确定以下色谱条件。色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱。柱温：室温。流动相：甲醇0.02%三乙胺（70:30）流速：1mL/min。检测波长：246 nm。2.3.2 对照品储备液制备取异钩藤碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含780g的溶液，即得。min0510152025mAU10203040D1 C,Sig=246,8 Ref30,1 (E:DAT中2017-3中02.D)2.45310.56图1 异钩藤碱对照品HPLC图2.3.3 供试品制备称取大叶钩藤粉末约 1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 20 mL，密塞，称定重量，超声处理 40 min，
10、放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。min0510152025mAU10203040D1 C,Sig=246,8 Ref30,1 (E:DAT中20165中01.D) .7092.41 3.1759 .8246 .13 .026 7.348 .9627 10.46 12.065 3.8 15.93 16.975 20.568 26.90A图 2 大叶钩藤样品 HPLC 图（A异钩藤碱）2.3.4 方法学考察2.3.4.1 线性关系考察分别精密吸取异钩藤碱对照品储备液0.1mL，0.2 mL，0.5 mL，1 mL，2 mL于10 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度。
11、分别吸取上述溶液与储备液各10 L，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以进样量为横坐标，其峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程为： Y=2724.96X -16.86 (r2=0.9999)，结果表明异钩藤碱进样量在0.0787.800 ug范围内线性良好，结果见表1。表1 异钩藤碱对照品线性范围考察试验结果表进样量（g） 测定峰面积 (mAU)0.078 220.40.156 444.80.390 885.50.780 2216.31.5607.8004227.921235.52.3.4.2 精密度试验取大叶钩藤药材样品 1 份，按照“2.3.3” 项下方法制备，在上述色谱条件下
12、连续进样 6 针，测定峰面积的 RSD 为 0.08%，结果表明仪器精密度良好，结果见表 2。表 2 精密度试验结果序号 峰面积 (mAU) RSD（%）1 2745.72 2738.73 2741.54 2742.15 2741.76 2743.20.082.3.4.3 稳定性试验精密吸取“2.3. 4.2”项下供试品溶液，分别于 0、1、2、5、8h 测定，RSD 为0.91%，结果表明稳定性良好，结果见表 3。表 3 稳定性试验结果序号 测定时间（h） 峰面积 (mAU) RSD（%）1 0 2745.72 1 2741.53 2 2741.74 5 2752.35 8 2800.80.
13、912.3.4.4 重复性试验取同一批大叶钩藤药材样品 6 份，按照“2.3.3”项下方法制备，在上述色谱条件下测定 ，平均含量为 0.1728，RSD 为 2.53，结果表明重复性良好，结果见表4。表 4 重复性试验结果序号 取样量（g） 峰面积 (mAU) 含量（ %） 平均含量 （%） RSD（% ）1 1.006 2480.5 0.1736 2 1.0074 2452.8 0.17143 1.0071 2457.5 0.17184 1.0077 2399.1 0.16765 1.0069 2585.6 0.18076 1.0078 2456.2 0.17150.1728 2.532.3
14、.4.5 回收率试验取同一批大叶钩藤药材样品(含量 0.1728%)6 份，每份 0.5 g，精密称定，分别精密加入一定浓度的对照品溶液。按照“2.3.3” 项下方法制备，测定，计算回收率。结果平均回收率为 101.39%，RSD 为 2.43%，说明本方法的准确度良好，结果见表 5。表 5 回收率试验结果序号 样品含量 （mg ） 加入量（mg ） 测得量（mg ） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD（%）1 0.8911 0.624 1.5366 103.45 2 0.8911 0.624 1.5307 102.50 3 0.9961 0.624 1.6372 102.74 4 0.9
15、961 0.624 1.6371 102.73 5 0.7429 0.624 1.3659 99.85 6 0.7601 0.624 1.3657 97.05 101.39 2.432.3.5 样品测定按上述拟订的含量测定方法，测定了大叶钩藤 10 批样品中异钩藤碱的含量，见表 5。其中样品中含量最高的为 0.18%；含量最低的 0.06 %；平均含量为 0.13%。结果表明，因产地与气候等原因，各批次大叶钩藤中异钩藤碱的含量差别较大。为科学地制订其含量限度，更好地控制大叶钩藤药材质量，以本实验数据为参考依据，并适当放宽，故暂定限度为不低于 0.05%。表5 10批大叶钩藤中异钩藤碱的含量测定
16、结果(n=2)序号 样品批号 异钩藤碱 含量（%）1 20160926 0.172 20131211 0.063 20131012 0.114 20130913 0.145 20120418 0.186 20120306 0.157 20120107 0.108 20111030 0.089 20110827 0.1710 20110529 0.18（六）检验规则 为科学合理地评价药材质量，本部分从组批、取样规则、交收检验、型式试验及判定规则等方面进行规定。（七）标志、包装、运输、贮存 为保证药材在生产和销售流通上的规范化及保证药材质量稳定，本部分规定了九里香药材的标志、包装、运输、贮存及贮藏
17、条件。六、与现行法律法规和标准关系本标准的制订主要基于如下法律法规及标准作为标准的规范性引用文件，所设定指标值与以上标准没有矛盾。中华人民共和国药典2015 年版一部中华人民共和国药典2015 年版四部通则 0832水分测定法中华人民共和国药典2015 年版四部通则 2302灰分测定法中华人民共和国药典2015 年版四部通则 2201醇溶性浸出物测定法中华人民共和国药典2015 年版四部通则 0211药材和饮片取样法GB/T 191 包装储运图示标志七、实施标准的要求和建议由区质监局会同有关部门负责组织开展大叶钩藤药材的质量要求地方标准的宣贯工作，确保大叶钩藤的检测方法形成规范化。建议本地方标准作为推荐性标准，由医药企业结合实际参照实施。八、参考文献中华人民共和国药典2015 年版一部中华人民共和国药典2015 年版四部广西地方标准大叶钩藤质量检测规程标准制定组2017年1月
