抗菌实验—抑菌圈法.doc

1、抑菌圈实验说明抑菌圈法是衡量杀菌防霉剂效果的一种方式，主要用于测定杀菌防霉剂对细菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。通过杀菌防霉剂在琼脂平板上的扩散能力来初步筛选更有效的杀菌防霉剂品种。用具和材料霉菌培养皿，无菌吸管（或针筒） ，圆片滤纸（直径 2cm） ，带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针（环） ，熔化状态的琼脂培养基（最好保温于 45左右水浴中） ，一定浓度的药剂，供试验用的菌种。试验过程1. 用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。2. 用无菌吸管（或针筒）向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液

2、0.5mL。3. 向各培养皿内注入 15Ml20ml 的熔化状琼脂培养基（约 45） ，将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。4. 用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子5. 置适宜温度下，培养 23d，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。注意事项1. 所有的操作用具和材料都要事先做灭菌处理，操作必须在无菌室（或无菌箱）内于火焰旁进行。2. 霉菌、细菌、酵母菌等各种微生物都必须分别配置混合菌液，即这里指的混合菌液是霉菌或酵母菌等诸种菌的分别混合液，并非霉菌、细菌和酵母菌的混合液。3. 混合菌液的浓度一般为 106108cfu/mL.4. 倒入培养皿的琼脂培养基温度不能太高（一般为 45左右） ，否则会引起微生物死亡。也不能太低，因为琼脂会很快凝结，以致搅拌不均匀，影响试验结果。5. 各种微生物的最适生长温度不同（例如霉菌一般为 2530，细菌一般为 3237等） ，恒温培养时宜分开放置。结果评判由于滤纸圆片所吸附的药液慢慢向四周扩散，因此在滤纸片的周围就出现清晰的抑菌圈（加入该防霉剂对供试菌有抑制效果） 。抑菌圈的大小代表药剂抗菌力的高低。在一定的药剂浓度范围内，药剂的浓度越高则抑菌圈的直径越大。此法同样适合于测定单个菌的抗菌效果。