1、实验八 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用【目的】验证丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。【原理】琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延胡索酸，脱下的氢被受氢体接受。本实验用亚甲蓝（MB）作为受氢体，亚甲蓝接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的甲烯白（MBH 2） 。丙二酸与琥珀酸分子结构相似，能竞争性抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察亚甲蓝颜色消退的程度，可以判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制程度。 COHCHCHCOH+ MBCOHCH2CH2COH + MBH2 -【器材】试管及试管架、滴管、剪刀、研钵或 20ml 匀浆器、电热恒温水浴箱。【试剂】1. 0.1mol/L 磷酸缓冲液（PH7.4） 取
2、 0.1mol/L Na2HPO4溶液 19ml 和 0.1mol/L NaH2PO4溶液 81ml 混合即可。2. 1.5% 琥珀酸钠溶液 3. 1% 丙二酸钠溶液4. 0.02% 亚甲蓝溶液5.液状石蜡【操作】1. 取新鲜动物肌肉或肝 5g 左右，放入研钵，用剪刀将组织剪碎，然后加入 10ml 在冰箱中保存的 PH7.4 的磷酸缓冲液充分研磨均匀（或在匀浆器内进行匀浆，制备成 20%匀浆液） 。2. 取 4 支试管，编号，按下表操作：表 3-11 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用加入物（滴） 1 2 3 4匀浆 10 10 101.5%琥珀酸钠溶液 10 10 10 201%丙二酸钠溶液 10 10 10蒸馏水 20 10 20 0.02%亚甲蓝溶液 10 10 10 103. 各管混匀后，各加少量液状石蜡覆盖在液体上，置 37水浴中保温，随时观察各管颜色变化，并记录各管亚甲蓝褪色时间。【结果及分析】比较各管亚甲蓝褪色情况，并对实验结果进行分析。【思考题】1. 什么是竞争性抑制作用，与非竞争性抑制作用有何不同。2. 为什么要用石蜡油隔绝空气来进行实验？
