1、药敏试验及 CLSI标准更新 安徽省立医院检验科 马筱玲 药敏试验一般知识 药敏试验 药敏试验定义： 使用 体外 方法测定抗菌药物 抑制病原微生物生长的效力。 主要目的： 预测体内抗菌效果 评价参数： MIC(最低抑菌浓度 ) 在体外能够抑制细菌生长的 最低 抗菌药物浓度。 抗菌药物在体内的情况 不同给药方式，药物浓度不同 （药物的吸收） 不同组织，药物浓度不同 （药物的分布） 不同时间，药物浓度不同 （药物的清除） 研究抗菌药物在体内吸收 、 分布和清除的动力学过程 药代动力学 (PK)。 研究体内药物 浓度 与药物抗菌 效果 关系 药效动力学 (PD) 体外试验与体内情况有什么不同？ 体外
2、： 药物浓度 固定不变 T1/2 Cmax AUC 体内： 药物浓度 随时间改变 细菌 MIC位于什么水平临床治疗有效？ 时间 Cmax MIC T MIC Cmax / MIC AUC / MIC AUC Cmax/MIC AUC/MIC TMIC 浓度 MIC 体外试验与体内情况的关联（ PK/PD参数） 各类抗菌药物 PK/PD参数 时间依赖性 与时间有关，但抗菌活性持续时间较长 对致病菌的杀菌作用 取决于峰浓度 抗菌作用与 同细菌接触时间密切相关 时间依赖且 PAE或 T1/2较长 氨基糖苷类、氟喹诺酮类、 酮内酯类、两性霉素 B、 daptomycin、甲硝唑 多数 -内酰胺类、 林
3、可霉素类 恶唑烷酮类、氟胞嘧啶 链阳霉素、四环素、 碳青霉烯类、糖肽类、 大环内酯类、唑类抗真菌药 Cmax/MIC 10 TMIC 50% AUC/MIC 125 浓度依赖性 药敏试验中抗菌药物的选择 自 1998年以来卫生部将 CLSI制定的药敏标准定为我国的部颁标准。依照（ CLSI）所制定的药敏试验执行标准作为选药指南 针对每一菌群所选择的药物具有确切临床疗效（天然耐药不做药敏试验） 测定的药物具有可靠的体外试验方法和结果 测定药物具有代表性或指示性。 CLSI推荐药物的取舍可根据本单位抗菌药物种类确定 药敏试验条件（如葡萄球菌） 药敏试验条件 肠杆菌科细菌、非发酵菌、葡萄球菌、肠球菌
4、属等： Mueller-Hinton（ MH）琼脂 链球菌属： 5%脱纤维羊血（马血、兔血）MH琼脂 淋病奈瑟球菌： GC培养基 1特定的生长添加剂 脑膜炎奈瑟菌： 5%脱纤维绵羊血 药敏试验条件 菌悬液制备 肠杆菌科、假单胞菌属、不动杆菌属等：生长法或直接菌落悬液法 葡萄球菌属、肠球菌属、苛氧菌： 直接菌落悬液法 药敏试验条件 孵育（温度、气体、时间） 温度： 35 2 气体：空气， 5%CO2（ 溶血性链球菌、肺炎链球菌、奈瑟氏菌属等） 时间： 16-18小时， 20-24小时 药敏试验最低限度的质控建议 纸片扩散法与 MIC法质控菌株不同 药敏试验结果判读 必须使用推荐的体外药敏试验方法
5、 根据 CLSI所公布的最新判断标准进行结果判断 解释标准取决于特定的给药方案和感染部位（必须与临床医师交流） 肺炎链球菌对青霉素敏感性 肺炎链球菌对青霉素敏感性 敏感 中介 耐药 注释 青霉素注射剂（非脑膜炎） 2 4 8 S:肾功能正常成人每4h静脉给药至少 200万单位，每天至少1200万单位 青霉素注射剂（非脑膜炎） 0.06 - 0.12 需用最大剂量静脉给药治疗（如肾功能正常成人每 4h静脉给药至少 300万单位 口服青霉素 0.06 0.12-1 2 药敏试验结果的报告 报告方式 药敏试验结果以敏感、中介和耐药表示 有些细菌对某种抗菌药物没有或罕见有耐药菌株，如 -溶血性链球菌对
6、万古霉素，当这些细菌检测的 MIC高于敏感临界值或抑菌圈直径小于敏感临界值时，则应报告为非敏感。出现这种情况应证实细菌鉴定和药敏试验结果，随后将菌株保存并递交到参考实验室。 流感嗜血杆菌 药敏试验结果的报告 特殊情况下的药敏试验及结果报告 特殊细菌 特殊情况下的药敏试验及结果报告 特殊部位 对分离于 脑脊液中的细菌 ，下列抗菌药物不 作为选择药物进行常规 报告 ，因为用这些药物治疗某些细菌引起的脑脊液感染可能无效，这些药物包括： 仅通过口服途径给药的 和 代头孢菌素 (头孢呋辛钠除外 ) 克林霉素 大环内酯类 四环素类 氟喹诺酮类 特殊情况下的药敏试验及结果报告 特殊部位 下列药物一般不适宜治
7、疗尿道感染： 阿齐霉素 氯霉素 克拉霉素 克林霉素 红霉素 CLSI M100-S17 (M2-DD, M7-MIC) 37 药敏试验结果报告 罕见耐药菌株的处理和报告 如果解释标准中仅给出“ S”的标准，那是由于某些细菌 /抗菌药物组合，尚不存在或 罕见 耐药菌株。如金黄色葡萄球菌，肺炎链球菌对利奈唑烷，万古霉素出现耐药 应证实细菌鉴定和药敏试验结果 保藏菌株 递交到参考实验室证实其结果 药敏试验结果报告 处方注释报告 严重的肠球菌感染如： 心内膜炎，通常需要氨苄西林、青霉素或万古霉素（敏感株）加上一种氨基糖甙类联合治疗，除非证实对庆大和链霉素高水平耐药 CLSIthe Clinical a
8、nd Laboratory Sdandards Instituste M02-A11纸片扩散法（ 2012） M07-A09 稀释法（ 2012） M11-A07厌氧菌稀释法（ 2007） M100-S23每年更新一次 药敏测定方法 与方法相对应的判断标准折点 专家系统（天然耐药、获得性耐药） 质控指南 M100每年修订， M02,M07每三年更新一次 近年来 CLSI重要的变化 增加天然耐药 判断折点（更新、删除） 检测方法改变 增加新的抗菌药物 删除某些药物 增加给药方案 2011年增加天然耐药附表 2013细菌的固有耐药附录 B 肠杆菌科表格 删除了克氏枸橼酸杆菌对阿莫西林 /克拉维酸、氨苄西林 /苏巴坦 R 进一步阐明 非肠杆菌科细菌 新增 葡萄球菌 新增 肠球菌 新增 M100-S23 page 176-179 固有耐药性 金黄色葡萄球菌（附录 B） 注 1：革兰阳性菌对氨曲南，多粘菌素 B /粘菌素和萘啶酮酸也有固有耐药性 固有耐药性 肠球菌（附录 B ） *警告：对于肠球菌，头孢菌素类、氨基糖甙类（除可能出现高水平耐药 筛选）、克林霉素和 SXT在体内具有活性，但是在临床上使用无效时，不应报告敏感。 注 1：革兰阳性菌对氨曲南，多粘菌素 /粘菌素和萘啶酮酸也有固有耐药性
