1、1.概述：无菌药品的容器应能在整个有效期内有完好的密封性，防止微生物的浸入。药品包材的设计及选择要考察相互的配合情况。无菌容器/密封件系统的完整性测试可以在培养基灌装时进行。2.目的：评估产品包装的密封性，以充分保护产品在储存期的无菌状态。3.依据：药品生产质量管理规范2010 修订版：附录 1：第九十五条 无菌药品包装容器的密封性应经过验证，以避免产品遭受污染。4.责任：质量部、生产部对本验证负责。5.微生物浸入试验法验证密封完整性：往产品容器内灌入培养基并按照常规方式压塞封盖，灭菌后冷却备用。将冷却后的容器倒置并将瓶口完全浸没于高浓度（10 8CFU/ml）的运动性菌液中，4 小时后，将容
2、器外表面消毒并培养，看是否有挑战性细菌在容器内生长。多准备一些灌装培养基的样品，在与产品相同地的贮存条件下贮存。在贮存的一定时间间隔（12,24，36 和 48 个月等），取出部分样品，进行微生物浸入 试验，以确定密封系统在贮存期内的有效性。6.范围：西林瓶、胶塞及铝盖的密封性验证，共有 10ml 及 2ml 两种规格。7.用品：胆盐乳糖培养基 铜绿假单胞菌（ATCC 9027） 乙酸 异丙醇 8.实施：无菌药品包装容器的密封性验证方案 制定人 审核人 批准人日 期 日 期 日 期生效日期 修订日期8.1 制备样品：取已经按相应清洗灭菌操作规程制备好的西林瓶、胶塞及铝塑组合盖 150 套，西林
3、瓶内灌装入已灭菌的胆 盐乳糖培养基，在正常生 产线上抽真空、压塞、 轧盖。将每一试样品倒转，使培养基与西林瓶内表面及胶塞充分接触，在 3035 竖立倒置培养 14 天，培养基应澄清，无菌落生长。8.2 制备微生物菌悬液：从铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的新鲜斜面上取培养物，分别接入含 6ml 无菌胆盐乳糖培养基的试管中，在 3035 下培养 1824h；将每管的培养物分 别转入含 600ml 相同培养基的容器内，于 3035下培养（约 24 小时），在培养 结 束时，能明显见容器内培养基出现浑浊，计数，当菌落数大于 108CFU/ml 时，停止培养，待用（在微生物侵入试验开始，所用菌悬液浓
4、度（活菌数）必须达到 1108CFU/ml。）。8.3 营养试验：8.3.1 该实验目的是确认胆盐乳糖培养基对铜绿假单胞菌促菌生长能力。所有样品培养 14 天均不长菌时，从上述 8.1 试验样品中随机取 20 个带盖试验样品，每个试验样品内接种 100CFU 铜绿假单胞菌。在 3035 下培养 7 天，或培养至所有试样品都呈阳性结果。8.3.2 结果判断：若 7 天内，所有接种铜绿假单胞菌的试验样品中，微生物生长良好，则容器内培养基的促菌生长能力可判为合格。使用革兰染色镜检，置于紫外灯下，培养基呈 蓝绿色荧光，则确认试验样品容器内生长的菌为接入的铜绿假单胞菌，即为阳性。 若 7 天内，所有接种
5、铜绿假单胞菌的试样品中，微生物生长条件不好或经鉴别后受其它菌种污染，则试验失败，需重新作营养试验。8.4 微生物侵入试验：8.4.1 将铜绿假单胞菌（ATCC 9027）的菌悬液倒入适当的容器内，从上述 8.1 样品中取 100 只试验样品倒置于菌悬液中,使试样容器内的培养基充分接触封口内表面，样品的颈部及封口的外表面应完全浸泡在菌悬液中（如图 1 所示）。图 1 微生物挑战试验示意图8.4.2 将试验样品在菌悬液中持续浸泡约 4h 后，取出试验样品，擦干容器外残余的菌悬液，其外表用含 0.5%过乙酸的 70%异丙醇消毒五分钟（注意不要破坏其密封口），放入塑料袋中，置3035下培养 7 天。检
6、查试验样品内微生物生长 情况，有生长记作“”，无生 长记作“”。8.4.3 阳性对照： 阳性对照试验样品不经菌悬液浸泡，其外表用含 0.5%过乙酸的 70%异丙醇消毒五分钟后，接种 10100CFU 铜绿假单胞菌，进 行阳性对照试验。8.5 结果评价要求:营养试验和阳性 对照试验 都合格，微生物侵入 试验才有效。挑战试验中如有 长菌，需记录长菌的瓶数并须按下述要求作进一步调查。仔细去除微生物生 长的容器的盖和塞，检查容器封口是否有缺损，造成微生物侵入。将观察到试验样 品封口的缺陷，采用拍照或其他适当方式 详细记录。如果任何挑战试验中长 菌的试验样品不是由于容器封口明 显的物理性缺损所致，容器密封性挑战试验作失败论。 9 注意事项：微生物侵入试验用菌悬 液经灭菌后丢弃。在培养期内，当试验中发现任何带盖试样品长菌时，则试验无效，须弃去全部试样品，重新从头开始试验。微生物培养及侵入试验应 在不影响生产环境的地方（中心化 验室阳性室）进行。 10 再验证周期当轧盖设备发 生变化时应进 行再验证。改变胶塞、西林瓶及铝盖尺寸、材 质时应进行再验证。
