1、首届南京流式沙龙,,,,,定量流式细胞术,Tetramer (四聚体),血小板活化,,Tetramer(四聚体),,Tetramer-原理,内源性抗原,外源性抗原,,Tetramer-原理,MHC Class I-HLA-A2,,Tetramer-原理,Allophycocyanin: APC,,Tetramer-原理,国外医学免疫学分册 2001；24(2):102-105,,HLA Class I 限定性肿瘤抗原肽,,抗原特异性CTL的分析方法,51Cr释放实验,PCR法,酶联免疫斑点法(ELISPOT),扩增特异T淋巴细胞受体,Tetramer法,间接法 需大量的特异性CTLs作为效应细
2、胞 需体外扩增，周期长，敏感性低， 费时费力 难以广泛应用,敏感性高 但只能用于已知TCR基因型的特异性CTLs检测,直接法 敏感性高 不受TCR基因型的限制,有限稀释法(LDA),用Tetramer法研究表明，外周血中仅有0.2-2.5% 的CD8+细胞对CMV和EBV特异,,Tetramer法,Doherty PC.The numbers game for virus-specific CD8+T cellsJ. Science,1998,280:227,了解病毒特异性CTL和记忆性CTL方面的一项革命,检测病毒特异性CD8细胞的金标准(Gold Standard),,Tetramer-应
3、用,感染性疾病,HIV-AIDS, EBV, CMV, HPV, HBV, HCV, Influenza, Measles, Malaria, TB and RSV,Breast, Prostate, Melanoma, Colon, Lung, Cervical, Ovarian and Leukemia,Diabetes, Lyme disease, Multiple sclerosis, Rheumatoid arthritis, Autoimmune vitiligo,EBV and CMV,移植,自身免疫性疾病,肿瘤,,Tetramer-应用-例证,感染性疾病,含有HIV-I型病毒包
4、膜肽等三种抗原肽：HIV特异性CTL数量与血浆中RNA病毒量有明显的负相关，而与产毒性感染细胞的清除率无关 慢性HCV感染患者的特异性CTLs数量明显少于急性HCV感染和已康复患者,用黑色素瘤抗原诱导潜在的肿瘤特异性T细胞用Tetramer分离，富集,GVHD(移植物抗宿主反应)：受体与供体的次要组织相容性抗原(mHags)的不同引起，在骨髓移植后早期出现(14天内)，造成骨髓移植失败-HLA-mHags肽四聚体监测mHags特异性CTL，以了解对GVHD的临床治疗效果 HLA-A2/pp65 Tetramer监测肾移植患者感染CMV后的免疫应答能力,移植,肿瘤,1996- 126篇(8篇综述
5、), 机会难得！,,Tetramer-试剂,抗原,,Tetramer-试剂,MHC 等位型,,Tetramer-试剂,,血小板活化,静止血小板,活化血小板,,Fibrinogen,CD41,CD61,CD41/61复合物变形与Firbrinogen结合，为初期血栓形成的关键步骤,PLATELET Fibrinogen Kit,,应用,心血管疾病(不稳定心绞痛，心肌梗塞等) 监测抗凝集治疗(如RepPro, Integrelin, Plavix, Ticlid等) 检测GPIIb/IIIa(CD41/CD61)受体Fibrinogen结合能力,血液体外(in vitro)活化(ADP等诱导)后，
6、检测Fibrinogen结合能力 血小板活化状态(ex vivo),标本处理,PLATELET Fibrinogen Kit,,定量流式细胞术,,血小板表面抗原定量- PLATELET Calibrator Kit,,特点,可定量与血小板相关的任何抗原(如CD41, CD61, CD42a等) 免洗 间接法 一抗亚型为IgG1, IgG2a或IgG2b 定量范围宽(500-90,000 分子/血小板 ) 定量准确，CV值(变异系数)小,血小板表面抗原定量- PLATELET Calibrator Kit,,标准曲线,血小板表面抗原定量- PLATELET Calibrator Kit,,结果,
7、血小板表面抗原定量- PLATELET Calibrator Kit,,白细胞表面抗原定量- CELLQUANTTM Calibrator Kit,,特点,可定量与白细胞相关的任何抗原(如CD3, CD4, CD55, CD59等) 单个定量(用一个单抗，如CD28抗体定量白细胞表面CD28分子数) 多参数定量(如用CD8设门来定量CD8+ T细胞上CD28分子数) 全血和分离的细胞(如细胞株等)均可 间接法 一抗亚型为IgG1和IgG2a 定量范围宽(1000-300,000 分子/白细胞 ) 定量准确，CV值(变异系数)小,白细胞表面抗原定量- CELLQUANTTM Calibrator
8、 Kit,,标准曲线,白细胞表面抗原定量- CELLQUANTTM Calibrator Kit,,结果,白细胞表面抗原定量- CELLQUANTTM Calibrator Kit,,最新技术 计数血液中循环内皮细胞的标准方法,,循环内皮细胞(CEC)增加于,CELLQUANT FF-CD146,急性冠状动脉综合征 血小板减少性紫癜 镰刀细胞贫血 败血症 狼疮,肾病综合征 器官移植排斥 手术创伤 癌症,传统方法,显微镜检，手工计数。费时，费力，无法标准化,,新技术新标准,CELLQUANT FF-CD146,免疫磁珠富集与3色流式细胞术结合 仅需1 mL血 整个过程不到1个小时 灵敏度高：1m
9、L血中可检测出10个循环内皮细胞 重复性好，室间差(Interlaboratory CV)小,,方法,CELLQUANT FF-CD146,将包被CD146单抗的铁磁性纳米颗粒(CD146FF)与1mL 血孵育 富集的CD146+细胞用以下试剂染色PI(碘化丙啶) (确定有核细胞)CD45-FITC(排除WBC(白细胞)干扰)CD146-PE单抗(识别CD146抗原的另一位点)标准浓度微球(用于绝对计数) 流式分析(循环内皮细胞鉴定)有核细胞(PI+); CD45-; CD146+;前向散射角(FSC)范围宽,,CELLQUANT FF-CD146,PI-CD45 FITC,,CELLQUANT FF-CD146,PI-CD45 FITC,,CELLQUANT FF-CD146,,CELLQUANT FF-CD146,,CELLQUANT FF-CD146,,所有产品与技术信息,请登录,,免费电话：800 8571 184,,
