1、非发酵菌,及检验,非发酵菌及检验,非发酵菌（nonfermenters）是指一群不能利用或仅以氧化形式利用糖类, 生化特性十分相近的革兰阴性无芽胞杆菌。括多个菌属，主要有：假单胞菌属不动杆菌属产碱杆菌属莫拉菌属黄杆菌属,分群依据：1. 氧化酶试验阳性（不动杆菌及个别假单胞菌为阴性）2. 葡萄糖氧化/发酵（O/F）：应开管产酸，闭管不变。3. 动力：大多为专性需氧菌，半固体上动力不明显（动力观察应在30或室温1224小时培养物悬滴法为准或以鞭毛染色鉴别）4. 麦康凯培养基上生长：可分群 见表,菌 属 氧化酶 葡萄糖 O/F 悬滴动力 触媒 硝酸盐还原 麦康凯上生长,假单胞菌属 + O / - +
2、 + + / - + 不动杆菌属 - O / - - + - + 产碱杆菌属 + - + + + / - + 莫拉菌属 + - - + + / - + 黄杆菌属 + O / F - + - + / -,非发酵菌主要菌属的生化反应,广泛存在于自然界的空气、水和土壤中。种类多达200余种，大多数为条件致病菌。革兰阴性，直或微弯曲，大多有鞭毛（单鞭毛或单端丛毛），无芽胞，专性需氧。,第二节 假单胞菌属（Pseudomonas）,为假单胞菌的代表，为条件致病菌，也是医院感染的常见病菌之一。（一）生物性状1、形态染色性：革兰阴性菌杆，呈球杆状或长丝状，长短不一，单个或短链排列。无芽胞，无荚膜，单端有鞭毛
3、13根，运动活泼。,铜绿假单胞菌（P.aeruginosa）,培养特性：专性需氧，4不长，42可生长。血平板：常见透明溶血环普通平板：可产多种色素，主要有：绿脓素（兰绿色，可溶于水）和荧光素（只溶于水）。从临床标本中分离的菌株大多产生此色素,麦康凯上可形成5种不同形态的菌落：典型型：灰绿色，大小不一，扁平湿润，边缘不齐，表面可见金属光泽。大肠菌群型：圆形凸起，灰白色半透明。粗糙型：菌落中央凸起，边缘扁平，表面粗糙。侏儒型：细小无光泽，半透明菌落粘液型：光滑凸起呈粘液状,生化反应： 氧化酶，O/F上能氧化分解葡萄糖、木糖产酸、精氨酸双水解酶，枸橼酸盐，硝酸盐。抵抗力：较强，临床分离株对多种抗生素
4、耐药,（二）致病性： 可产生多种致病物质：内毒素、外毒 素、菌毛、荚膜、胞外酶和溶血物质除自然界外，也存在于人体皮肤上及与外界相通的腔道中。多为继发感染，如烧伤后的创面感染，也可引起肺炎、脑膜炎、尿道感染，严重时可引起败血症，死亡率甚高。,（三）微生物学检验1、标本采集：血液、脑脊液、胸腹水、尿液、痰液、脓汁等。医院环境监控：可采空气、水、物体表面等。2、检验程序3、检验方法：（1）直接镜检：（2）分离培养：血液和体液可先增菌，再转种血平板和麦康凯平板分离；脓汁、分泌物、尿可直接种于上述培养基分离培养。,（3）鉴定：根据菌落特征、色素、生姜气味、菌体形态、氧化酶试验等作出鉴定。对无色素的菌株应
5、与其他假单胞菌鉴别。,脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液,分 离 培 养血、麦康凯,直接涂片染色,血液体液,粪 便,分 离 培 养SS、麦康凯,初步鉴定,菌落特征，色 素菌体形态、氧化酶,最后鉴定,生化反应,血清学噬菌体,分型：,增 菌 营养肉汤,铜绿假单胞菌的检验程序：,铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别,试 验,铜绿假单胞菌,荧光假单胞菌,恶臭假单胞菌,斯氏假单胞菌,嗜麦芽假单胞,鼻疽假单胞菌,类鼻疽假单胞,氧化酶 / 荧光素 / / 青脓素 / / / 动力 葡糖氧化 乳糖氧化 蔗糖氧化 木糖氧化 赖氨酸脱羧酶 精氨酸水解酶 硝酸盐还原 / / 明胶液化 / 42生长 / / ,第
6、三节 不动杆菌,不动杆菌（Acinetobacter）为一群氧化酶阴性，不发酵糖类、无动力的革兰阴性菌。 含6个种：醋酸钙不动杆菌洛菲不动杆菌溶血不动杆菌鲍曼不动杆菌琼氏不动杆菌约翰逊不动杆菌,一、生物学性状形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列，不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。培养特性 专性需养，营养要求不高。最适温度35 ，鲍曼不动杆菌42可生长。血平板上 圆形凸起、23 mm ，光滑、边缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶血不动杆菌可形成 -溶血环）；不产生色素。麦康凯平板 形成粉红色菌落。,生化反应 氧化酶阴性，触酶阳性，葡萄糖O/F为氧化型。不动杆菌属主要菌种生化反应特征
7、：二、致病性该菌广泛存在于自然界，属条件致病菌，也是医院感染的常见病菌之一，常引起呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染。,三、微生物学检查标本采集：血液、脑脊液、痰液、尿液、脓汁等。检验程序：检验方法：（1）直接镜检：脑脊液、尿液离心取沉淀物涂片，脓汁和痰液直接涂片染色镜检可见革兰阴性球杆菌成双排列，细胞内外可见，常染成革兰假阳性。（2）分离培养：,（3）初步鉴定：染色为革兰阴性球菌或球杆菌，成双排列。氧化酶（），硝酸盐还原（）。动力（），不发酵葡萄糖。符合上述五项即可判定为不动杆菌属的细菌。,脓汁、痰液、尿液,脑脊液、血液,分 离 培 养 （血液琼脂、麦康凯琼脂）,增菌培养,直接 涂片革兰染色,挑
8、选可疑菌落,生化反应,初步鉴定,KIA：底层、斜面不变硝酸盐还原、氧化酶、动力,最后鉴定,35 1824h,不动杆菌属及产碱杆菌属检验程序,醋酸钙不动杆菌,鲍曼不动杆菌,溶血不动杆菌,约 翰 逊不动杆菌,琼氏不动杆菌,洛菲不动杆菌,葡萄糖氧化 +/_ 木糖氧化 +/_ 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 _ /+ 鸟氨酸脱羧酶 苯丙氨酸脱氨酶 丙二酸盐利用 _/+ 柠檬酸盐利用 +/_ 明胶液化 生长温度37 41 42 ,不动杆菌属主要菌种生化反应特征,产碱杆菌属（Alcaligenes）为一群有动力，专性需氧，不分解糖类的革兰阴性菌杆。括2个种，即粪产碱杆菌，去硝化产碱杆菌。后者又分为去硝化亚种和木
9、糖氧化亚种。广泛存在于自然界，水和土壤中及人体皮肤粘膜有其存在。常从临床标本中分离出。,第四节 产碱杆菌属,一、生物学性状形态与染色：为革兰阴性短杆菌，成对或链状排列，有周鞭毛，有动力，无芽胞，多数无荚膜。培养特性：需氧，最适温度2537，营养要求不高。血平板：形成较大灰白、扁平、边缘菲薄的菌落。麦康凯和SS：形成透明无色菌落（少数菌株在SS上不长）。,液体培养：均匀混浊生长，表面形成菌膜，管底有粘性沉淀。在含蛋白胨的肉汤中产氨，使PH达8.6，为本菌鉴别特征。生化反应：氧化酶，触酶，硝酸盐还原，枸橼酸盐利用；不产生靛基质和硫化氢，不液化明胶，无苯丙氨酸脱氨酶和精氨酸双水解酶。大多数不能氧化分
10、解各种糖类。,二、微生物检验标本采集：脓汁、分泌物、尿液、血液等。检验程序：同前鉴 定：根据菌落形态、染色性、氧化酶试验，再根据生化反应作进一步鉴定。,硝酸盐还原 枸橼酸盐利用 氧化酶 尿素酶 / 丙二酸盐 / O/F试验 葡萄糖 O/ 木糖 O/ DNA中GC（mol%） 55.959.4 66.069.8 63.968.9,O：氧化；F：发酵；,粪产碱杆菌 木糖氧化亚种 去硝化亚种,产碱杆菌的鉴别,铜绿假单胞菌纯培养的镜下形态（革兰染色）,铜绿假单胞菌在血琼脂平板上的菌落特征（18-24h）,绿 脓 杆 菌,铜绿假单胞菌绿脓素,铜绿假单胞菌荧光素,葡萄糖OF反应结果,枸橼酸盐利用试验,硝酸盐还原试验,鲍曼不动杆菌纯培养的镜下形态（革兰染色）,鲍曼不动杆菌在血琼脂平板上的菌落特征（18-24h）,鲍曼不动杆菌在麦康凯琼脂平板上的深红色菌落（19-24h）,思考题：1、 什么叫非发酵菌？有何特点？2、绿脓杆菌在形态和培养特性有何特性？如何鉴定绿脓杆菌？,
