1、1统计微生物数目的方法 (1)显微镜直接计数法 原理：利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 方法：用计数板计数。 缺点：不能区分死菌与活菌。 (2)间接计数法(活菌计数法) 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少个活菌。,方法：平板划线法、稀释混合平板法、稀释涂布平板法。 缺点：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落。 注意事项：a.设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b.为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。 计算公
2、式：每克样品中的菌株数C/VM，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。,1自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。步骤如下： (1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。 (2)为了得到更加准确的结果，你选用_(平板划线法、稀释混合平板法、稀释涂布平板法)接种样品。 (3)适宜温度下培养。 结果分析： 测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是( )
3、A一个平板，统计的菌落数是23 B两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24 C三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均值26 D四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25,一同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的大肠杆菌数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL)_。 用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量_，因为_。 某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还有其他杂菌的菌落，能否据此肯定该大肠杆菌的品系被污染了？为什么？_。,解析：平板划线分离法是指由接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料
4、，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，经培养后，可在平板表面得到单菌落。稀释倒平板法又分为稀释涂布平板法和稀释混合平板法。稀释涂布平板法就是将稀释后的菌液分别涂布在固体培养基的表面进行培养；稀释混合平板法就是将不同浓度的稀释液与已溶化并冷却至45 左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间后即可出现菌落。,在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养
5、。由于大肠杆菌属于兼性厌氧菌，为了得到更加准确的结果，最好选用稀释混合平板法。统计菌落数计算的平板越多，其平均值越接近实际值。但是C选项中出现一个菌落数只有5的结果，不可信，因此答案选D。 。计算公式：每克样品中的菌株数C/VM，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表稀释平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量多，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落。在培养基上还有其他杂菌的菌落，其原因可能有多种，一是大肠杆菌被污染了，二是培养基被污染了，三是培养过程中被污染了。,答案：(2)稀释混合平板法 (3)结果分
6、析：D 1.17108 多 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落 不能，因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程,2影响果胶酶活性的实验设计技巧 在设计实验检验影响果胶酶活性的因素时，要注意以下几点： (1)无论是研究温度，还是研究pH对酶活性的影响时，注意设置合适的梯度。 (2)实验时，要保证酶促反应在恒温或恒定酸碱度的条件下进行，否则，会影响实验结果。 (3)必须设计对照实验，这就要求在实验中，所用一切试剂，包括蒸馏水，都要做到量的一致性，保证唯一变量，尽量避免干扰因素。 (4)梯度实验，是无法得到酶的最适温度或最适酸碱度的，只能得到一个大致的适宜范围。,3归纳外植体污染的
7、原因 植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。 (1)培养材料的取材应很好地加以选择，老的材料比幼嫩的材料带菌多，田间比温室生长材料带菌多。 (2)消毒材料不彻底，植物组织只能进行表面灭菌，对材料内部所带的细菌、霉菌等杂菌往往难以对付，可在培养基中添加抗生素解决。 (3)人为污染，如使用未消毒工具或呼吸排出细菌；手接触材料或器皿边缘，使用过的工作器具未消毒而再继续使用，造成交叉污染；接种室空气污染，使真菌孢子在培养
8、基上繁殖。,2(2011年广州测试)下图是月季花药离体培养产生花粉植株的两种途径，请据图回答有关问题：,(1)选用的材料合适与否是能否成功诱导出花粉植株的重要因素，一般来说选用_期的花粉可提高成功率。选择花粉时，一般要通过_来确定花粉是否处于合适的发育期，这时需要对花粉的细胞核进行染色，常用的染色剂是_。 (2)上图中花药经脱分化产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中_。 (3)胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别在于愈伤组织的细胞排列疏松无规则，是一种高度_的薄壁细胞，胚状体与_发育形成的胚有类似的结构，即具有胚芽、胚轴和胚根。,(4)无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素，请说明下列各项
9、需要消毒，还是需要灭菌。培养基，培养皿，接种环，花蕾，实验操作者的双手，三角锥形瓶。_(填编号)需要灭菌，_(填编号)需要消毒。 (5)试管苗移栽到土壤前，通常要进行壮苗处理，应如何壮苗？_。,解析：(1)单核期花粉对离体刺激敏感，选用该期花粉可提高培养的成功率；选择花粉时可用显微镜观察、筛选；对花粉细胞核染色应选择碱性染料，常用醋酸洋红。(2)细胞培养成植株的两条途径取决于植物激素的种类及比例，尤其是生长素和细胞分裂素。(3)愈伤组织细胞的特点为细胞排列疏松无规则、高度液泡化；胚状体是具有与胚相似的根或芽的结构。(4)灭菌对象为培养基和实验器材，消毒对象为要保持活性的材料和实验者自身。(5)壮苗即使试管苗逐步适应外界环境的做法。 答案：(1)单核 镜检(显微镜观察) 醋酸洋红 (2)激素的种类及其浓度配比 (3)液泡化 正常受精卵(或受精卵) (4) (5)将试管苗移栽到经消毒过的培养基中生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中,
