1、风湿免疫病自身抗体 检测和临床意义,安徽省立医院风湿科 汪国生,狼疮细胞（1948，Hargrave),风湿免疫病自身抗体,抗核抗体谱 抗磷脂抗体 类风湿关节炎抗体 肌炎相关抗体 血管炎抗体 自身免疫性肝病抗体,风湿免疫病自身抗体,抗核抗体谱 抗磷脂抗体 类风湿关节炎抗体 肌炎相关抗体 血管炎抗体 自身免疫性肝病抗体,抗核抗体谱,定义：抗细胞核内具有抗原性的蛋白质、DNA、RNA及其分子复合物的抗体的总称 分类： 抗ds-DNA抗体 抗组蛋白抗体 抗非组蛋白抗体 抗SSA 抗SSB 抗u1RNP 抗Sm抗体,抗核抗体（antibody to nuclear antigen，ANA）,底物：鼠肝
2、或鼠肾，HEP-2细胞 方法：间接免疫荧光法（IIF） 核型：颗粒、均质、核膜、核仁、着丝点。 意义：是结缔组织病的初筛试验。,抗核抗体（粗颗粒型, SSA、SSB、u1RNP、Sm）,抗核抗体（均质型, Histone-DNA）,抗核抗体（核膜型, dsDNA）,抗核抗体（核仁型, Mi-2、PM-SCL、RNA Polymerase I）,抗着丝点抗体（Centromere/kinetocore protein),ANA阳性的意义,N ENGL J M 2003,Prevalence of Antinuclear Antibodies in 3492 Healthy Individuals
3、,-Hooper B, et al Clin Exp Immunol 1972;12:79,Positive FANA Test in 125 Normal Individuals,-Tan EM, Feltkamp TE, Smolen JS, et al. Arthritis Rheum 1997;40:1601,可出现ANA的感染、药物,疟疾 血吸虫 结核 麻风 沙门氏菌 克雷伯菌 EB病毒 HIV,肯定的药物 肼苯哒嗪 普鲁卡因酰胺 异烟肼 可能的药物(近80种） 米诺环素 SASP Etanercept, Infliximab,可出现ANA的肝病 慢性活动性肝炎 原发性胆汁性肝硬化
4、自身免疫肝炎 自身免疫胆管炎 可出现ANA的肺病 特发性肺纤维化 石棉导致的纤维化 原发性肺动脉高压淋巴瘤 可出现ANA的肿瘤 白血病 黑色素瘤 实体瘤（卵巢瘤、乳腺癌、肺癌、肾癌）,可出现ANA的血液病 特发性血小板减少性紫癜 自身免疫性溶血性贫血 可出现ANA的内分泌病 1型糖尿病 Grave病 Hashimoto甲状腺炎,抗ds-DNA抗体,IIF-底物：短膜虫、马疫锥虫 Farr法、ELISA、血凝法、金标记法 意义 对SLE有较高特异性，阳性率40% 判断SLE病情活动的指标 与SLE的肾损害相关 评价治疗效果的指标,抗dsDNA抗体,马疫锥虫,绿蝇短膜虫,抗组蛋白抗体,组蛋白含：H
5、1、H2A、H2B、H3、H4 检测方法：ELISA 意义： 药物性狼疮阳性率达95%，SLE阳性率50% SLE病人为IgG型抗H2B、H2A-2B和抗H1抗体 肼苯哒嗪为抗H3和抗H4抗体 普鲁卡因酰胺主要为抗H2A-H2B复合物抗体 异烟肼抗H1、H2A、H2B、H3、H4滴度一致,抗非组蛋白抗体,抗ENA（Extractable nuclear antigen）抗体 抗Smith抗体 抗u1RNP抗体 抗SSA抗体 抗SSB抗体 抗P抗体 抗Scl-70抗体 抗Jo-1抗体 抗PM-Scl抗体,抗Sm抗体 (Tan,1966),抗原 u簇RNA+小分子核蛋白。 uRNA含u1、u2、u
6、4、u5、u6RNA，核蛋白B(29)、B(28)、D(16)、E(13)是Sm的抗原决定簇，与u1、u2、u4u6都结合。 方法 对流免疫电泳、免疫扩散、ELISA、免疫印迹法。（u1RNP、SSA、SSB、Ribosome P方法相同） 意义 是SLE的标记抗体，阳性率为30% 对早期、不典型或治疗缓解的SLE有诊断和回顾性诊断价值,抗原：9种蛋白组成，抗原决定簇为70KD蛋白及A(30)、C(22)蛋白,主要含u1RNA。 意义： 抗u1RNP抗体是诊断MCTD必不可少的实验室指标，阳性率为95%，滴度高。 是区分CTD和非CTD的有力指标 阳性病人常有雷诺氏现象、指端硬化、肿胀。 阳性
7、病人若抗DNA抗体阴性，LN发生率低,抗u1RNP抗体（Sharp,1971),抗SSA/Ro抗体（Clark 1969, Alspaugh 1975),抗原：由Y簇RNA（Y1Y5)与60KD和52KD蛋白组成 意义： 抗SSA/Ro抗体主要见于SS(60-70%)、SLE(50%)、PSS、PM、RA可阳性。 直接参与组织损害，特别是皮肤损害。 ANA阴性SLE病人多有抗SSA抗体 IgG类抗SSA抗体通过胎盘引起胎儿皮疹和心脏传导阻滞,抗SSB/La，Ha抗体 (Mattioli 1974, Akizuki 1977),抗原：snRNA+48KD的磷蛋白 意义：对SS更特异，阳性率为40
8、%,抗Ro/SSA和抗La/SSB抗体检查的指征,怀孕或将要怀孕的女性SLE。 女性曾诞心脏传导阻滞或心肌炎胎儿。 病人有不能解释的光敏性皮疹史。 病人强烈怀疑有SLE但ANA阴性。 病人有口干燥症、干燥性角膜结膜炎和/或唾液腺和泪腺肿大。,抗rRNP（ribosomal P protein）抗体,抗原：核糖体大亚基38、16.5、15KD磷蛋白意义 是SLE较特异的抗体，阳性率10-24% 阳性病人常伴神经系统症状，尤其精神症状 常在活动期出现,抗核糖体P蛋白抗体,抗核小体抗体（AnuA),抗原：核小体单体 检测方法：ELISA意义： 比抗dsDNA、抗组蛋白抗体更早出现于SLE。 对SLE
9、更特异，其敏感性为5090%，特异性98%。 多在活动期出现。57%抗dsDNA阴性SLE阳性。,抗C1q抗体,抗原： C1q分子胶原样区的新表位 检测方法：ELISA 意义： 在SLE中阳性率为3459% 与补体C1q, C3 和 C4水平负相关 与增殖性肾炎强相关 在肾脏损害出现或复发前开始出现和升高,风湿免疫病自身抗体,抗核抗体谱 抗磷脂抗体 类风湿关节炎抗体 肌炎相关抗体 血管炎抗体 自身免疫性肝病抗体,抗磷脂抗体,定义：抗磷脂、磷脂结合蛋白及其复合物的抗体。 分类： 梅毒血清学试验假阳性 抗心磷脂抗体（ACL） 狼疮抗凝物（LAC） 抗b2糖蛋白1抗体（b2-GP1),抗心磷脂抗体（
10、ACL）,抗原：心磷脂、磷脂酰丝氨酸 检测方法：ELISA、RIA 意义： 原发性或继发性抗磷脂抗体综合征 风湿病：SLE5060%，SSc23%，SS15%，MCTD10% 其他：感染性疾病、淋巴增生性疾病、药源、其他（ITP、AIH）,狼疮抗凝物（LAC),抗原：结合于阴离子磷脂上的血浆蛋白 检测方法（国际血栓和止血协会科学和标准化分会） 一个或一个以上的磷脂依赖的抗凝血时间延长。（aPTT、dRVVT、KCT) 不能被加入等量的正常血浆所纠正。 无特异的凝集抑制因子存在。 意义 30%SLE有LAC。 体外凝血时间延长，但病人发生动静脉血栓事件增加。 可与ACL一起出现，但许多情况下，L
11、AC是独立于ACL的一群抗体。因此怀疑有APS时，应同时检测LAC和ACL。,LAC和ACL可出现于多种自身免疫病：,溶血性贫血 ITP（近30%） 幼年关节炎 RA（7-50%） 银屑病关节炎(28%) 硬皮病（25%） 白塞病（20%）,干燥综合征(25-42%) MCTD（22%） PM/DM 风湿性多肌痛(20%) 慢性盘状狼疮 雷诺氏现象,APL也可出现在感染和使用某些药物病人中,甲肝 流行性腮腺炎 败血症 HIV 梅毒 HTLV-1 疟疾 卡氏肺囊虫 感染性单核细胞增多症 风疹,氯苯嗪 苯妥英 肼苯哒嗪 普鲁卡因酰胺 奎尼丁 奎宁 丙戊酸盐 阿莫西林 普洛奈尔 可卡因 磺胺嘧啶 乙
12、胺嘧啶 链霉素,抗b2糖蛋白-1(b2GP-1)抗体,抗原： b2糖蛋白-1(与磷脂结合的凝血抑制因子 ) 检测方法：ELISA 意义 常与其他抗磷脂抗体同时出现，但有11%的APS病人仅有抗b2GP-1 。 抗b2GP-1较单独抗心磷脂抗体与APS相关性更好 。 感染、药物病人APL无抗b2GP-1活性。,风湿免疫病自身抗体,抗核抗体谱 抗磷脂抗体 类风湿关节炎抗体 肌炎相关抗体 血管炎抗体 自身免疫性肝病抗体,类风湿关节炎中自身抗体,类风湿因子（RF, Harry M Rose 1947) 抗Filaggrin抗体 抗核周因子（APF, Nienlucis&Mandema 1964) 抗角
13、蛋白抗体（AKA, Young 1979) 抗环瓜氨酸肽抗体（Anti-CCP, Schellekens 1998） 抗RA33/36抗体 (Hassfeld 1989) 抗Sa抗体 (Menard&Despress 1991),类风湿因子（RF),抗原：变性的IgG Fc段 检测方法： 胶乳凝集法、ELISA 意义 RA阳性率70%，阳性预测值24%。 滴度与疾病活动平行 其他风湿病可阳性 感染、非感染疾病、正常人可阳性,非风湿病中的RF,抗CCP抗体（环瓜氨酸肽）,抗原：含瓜氨酸残基的21AA环状肽链 方法：ELISA 意义: 70%RA阳性，特异性90%。 2%正常人阳性。 阳性RA病情
14、重、骨破坏重。 有助于RA早期诊断。,风湿免疫病自身抗体,抗核抗体谱 抗磷脂抗体 类风湿关节炎抗体 肌炎相关抗体 血管炎抗体 自身免疫性肝病抗体,肌炎特异性抗体（MSAs),抗合成酶抗体综合征,抗Jo-1抗体（HisRs）18-20% 抗PL-7抗体（thrRs） 抗PL-12抗体（alaRs） 抗EJ抗体（glyRs） 抗OT抗体（ileRs）,抗Jo-1抗体,抗原：50KD的组氨酰tRNA合成酶 意义 是PM/DM的标记性抗体，阳性率25% 合并肺间质变的PM/DM阳性率60% 阳性病人常有急性发热、肌炎、关节炎、技工手、雷诺现象、肺间质变，称抗Jo-1综合征,风湿免疫病自身抗体,抗核抗体
15、谱 抗磷脂抗体 类风湿关节炎抗体 肌炎相关抗体 血管炎抗体 自身免疫性肝病抗体,抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）,抗原：中性粒细胞胞浆抗原 检测方法 IIF底物：中性粒细胞(乙醇、甲醛固定） 意义 多种血管炎性疾病ANCA阳性。,cANCA(胞浆型, 丝氨酸蛋白酶),抗丝氨酸蛋白酶（PR3)抗体,抗原：丝氨酸蛋白酶（PR3） 检测方法：ELISA 意义 主要出现在Wegner肉芽肿和显微镜下多动脉炎 在Wegner肉芽肿、显微镜下多动脉炎cANCA持续高滴度或滴度升高常与疾病复发相关(2/3)。,针对蛋白酶3的cANCA的意义,pANCA (核周型） 1、髓过氧化物酶 2、弹力酶 3、组织蛋白
16、酶G 4、乳铁蛋白 5、溶酶体 6、细菌增透蛋白 7、Azurocidin 8、,抗髓过氧化物酶（MPO）抗体,抗原：髓过氧化物酶（MPO） 检测方法：ELISA 意义 可出现于多种血管炎性疾病。 也可见于SLE、药物等,针对MPO的pANCA的意义,针对弹力酶、组织蛋白酶G、乳铁蛋白、溶酶体的pANCA的意义,药物相关的ANCA,肼苯哒嗪诱导的狼疮伴抗MPO和抗弹力酶抗体阳性。 肼苯哒嗪相关的血管炎和抗MPO抗体、抗乳铁蛋白抗体。 米诺环素诱导的关节炎、发热和网状青斑，伴抗MPO抗体阳性。 丙基硫脲嘧啶（PTU）诱导的血管炎伴以ANCA阳性，其针对抗原不同包括PR3、MPO和弹力酶。,风湿免
17、疫病自身抗体,抗核抗体谱 抗磷脂抗体 类风湿关节炎抗体 肌炎相关抗体 血管炎抗体 自身免疫性肝病抗体,抗线粒体抗体（Anti-mitochondria Antibody，AMA）,抗原：大鼠肾或丙酮酸脱氢酶复合物（M2) 检测方法：IIF, ELISA 意义： AMA可出现在自身免疫性肝炎、干燥综合征、原发性胆汁性肝硬化、系统性红斑狼疮等多种疾病中。 有20%干燥综合征AMA阳性。 抗M2抗体是原发性胆汁性肝硬化特异抗体。,抗SP100抗体和抗gP210抗体,抗SP100抗体在PBC患者中的阳性率约为30%，而在其他自身免疫性或风湿性疾病中很少发现(约3%)，因此对PBC有很高的特异性。 抗g
18、P210抗体是PBC高度特异性自身抗体 和疾病活动性密切相关。 抗gP210抗体阳性的PBC患者进展为肝衰竭的发生率。,抗平滑肌抗体（ASMA),抗原：大鼠胃 检测方法：IIF 意义： 1型自身免疫性肝炎，97%高滴度阳性（1:160) 低滴度阳性偶见于感染性疾病、系统性自身免疫病、急性肝炎、心肌炎、传单、炎性肠病。,参考书籍,Practical Rheumaotology, Third Edition.2004Cecil Textbook of Medicine, 22th Edition.2005.Arthritis and Allied Conditions, 14th Edition.
19、2001Kellys Textbook of Rheumatology, 6th Edition.2001,谢谢！,抗a-胞衬蛋白（ a- fodrin）抗体,抗原：鼠腮腺组织纯化出的120KD的器官特异性抗原，其氨基端残基与人细胞骨架蛋白-fodrin相同。 检测方法：ELISA 意义： SS患者阳性率高达6070%。而在系统性红斑狼疮或类风湿关节炎病人中阳性率极低（狼疮约为7%），特异性达93%。 抗-fodrin抗体的发现为临床诊断SS提供了特异性极高的血清学指标。,抗M3受体抗体,抗原 型毒蕈碱样乙酰胆碱（）受体 方法 IIF、免疫印记、ELISA 意义 对原发性干燥综合征诊断有重要意义，敏感性为，特异性为。,其他重要检查,急性时相反应蛋白 ASO 遗传学检查 滑液检查 肌酶谱,
