1、微生物学与免疫学教研室【 基本要求 】1. 进微生物实验室必须穿好白大衣，离室需脱下反折。2.实验无关物品一律禁止带入实验室。严禁在实验室进食、饮水和喧哗打闹。3.手拿培养物后或出实验室前要洗手；避免有菌材料溅出；破损器材及时处理并报告。4.实验操作过程中产生的废料要扔在指定容器内；实验完毕清理台面，值日生认真打扫卫生，关闭水电，门窗，洗手后离开实验室。 21.实验室生物安全； “ 有菌意识，无菌操作观念 ” 的树立。2.细菌的人工培养以及细菌的形态学检查（革兰染色）。3. 细菌在自然界的分布，消毒灭菌及理化因素对细菌的影响。内 容细 菌的人工培养细 菌生 长 繁殖所需要的条件充足的 营 养适
2、宜的温度嗜冷菌嗜温菌 病原菌 37嗜 热 菌合适的 PH值嗜酸菌嗜中性 细 菌病原菌 7.27.6嗜碱菌必需的气体 环 境根据 细 菌代 谢 是 对分子氧的需要与否专 性需氧菌 微需氧菌 兼性 厌 氧菌 专 性 厌 氧菌二、 细 菌的人工培养培养 细 菌的目的，是从不 纯 的被 检 材料中找出特定的 细 菌或全部 细 菌， 这 一 过程称 为 分离培养。如果只是培养性 质 明确的一种 细 菌， 则 称 为纯 培养。 为 了从被 检材料中分离出所要 检查 的 细 菌，可以利用多种性 质 不同的 选择 性培养基， 检查 各种不同的目的 细 菌。细 菌的培养基：（一）培养基的定 义：培养基是人工方法
3、配制的含有 细 菌生长 繁殖所需物 质 的营 养基 质 。其必 须本身无菌，一般PH调 至 7.2 7.6。营养物质水 碳源氮源无机盐生长因子（二）制 备 原 则 : 1.调 配 营 养物 质 ：蛋白 胨 （氮源），牛肉膏， 氯化 钠 ，蒸 馏 水。2.调 配 PH：加入 缓 冲 剂 ，保持 PH稳 定。3. 消毒 灭 菌。满 足 a充足的 营 养物 质b合适的 PH值c无菌就可制成 基 础 培养基液体培养基+1.52.5%琼 脂固体培养基+0.30.5%琼 脂半固体培养基（三）分 类 ： 1、 按物理性状分 类 ：大量繁殖 细 菌观 察 细 菌 动 力短期保存菌种 细 菌的分离和 纯 化液体
4、培养基液体培养基 固体固体 斜面培养基斜面培养基 半固体培养基半固体培养基固体平板培养基固体平板培养基2、按用途分：(1).基 础 培养基 ：含有 大多数 细 菌生 长 所需要的基本 营 养成分。最常用的 为 肉 汤 培养基(2).增菌培养基：在基 础 培养基中添加生 长 因子（ eg:血清等）或微量元素等其他 营 养物质 或特殊抑制 剂 。如血平板： 5-10%脱 纤维 羊 /兔血，（ 60C左右加入血）。巧克力平板 :80C左右加入血。(3).选择 培养基：培养基中加入某种 /些化学物 质 ，能抑制某 类细 菌生 长 而使另一 类细菌生 长 ，从而将后者 选择 出来 。常用 于 肠 道致病
5、菌的分离与 选择 培养 。(4).厌 氧培养基：用于 厌 氧菌的分离、培养和鉴 定。血平板 巧克力平板 MacConkey平板X.L.D平板 Sabourand平板 Mycosel平板几种常用培养基(5).鉴别 培养基 ：根据各种 细 菌分解糖 类 和蛋白 质 的能力及代 谢产 物不同，在培养基中加入底物和指示剂 来 鉴别 细 菌 。1） 蓝 色半固体培养基2）无色半固体培养基3 ）基 础 液体培养基（溴麝香草酚 蓝 ）（醋酸 铅 ）鉴别培养基细 菌 动 力 鉴别 细 菌生化反 应鉴别三、各种培养基的接种在医 疗实 践中或微生物 试验 中防止周 围环境中的微生物 污 染操作 对 象 ，同 时
6、防止操作 对象的微生物 污 染周 围环 境。1.四种接种方式：接种 针 用于穿刺接种 细 菌（半固体培养基），接种 环 用于固体、液体培养基的 细 菌接种。 （相 对 无菌）2.任何一个 实验 ，操作前均 应 在器皿上做 标记： 时间 ，菌种， 组别 。培养皿一般 标记 在皿底。一） 无菌操作接种环的灼烧 灭菌先将 环 端 烧热 ，将接种 环 提起垂直放在火焰上，烧红 ， 环 斜放，沿 环 向上，至金属杆，再移向 环端。来回通 过 火焰 3次，冷却。3 接种。 注意 ：整个 实验 操作 过 程都要非常小心，不要碰翻酒精灯，以免 烧伤 。（ 1）用左手大姆指、 食指、中指和无名指拿住 菌种 试
7、管，右手 拧 松棉塞、不取下 。接种管宜放在菌种管上面 （ 2）右手拿接种 环 ，在火焰上 烧 灼 灭 菌，特 别是箍 处 。（ 3）火焰 边 取下两个棉塞，不能放下； 烧 灼管口一周。（ 4）将接种 环 伸入 试 管内，冷却后， 轻轻 挑取少量菌体，立即将接种环 抽出。（ 6）抽出接种 环 后， 烧 管口，塞棉塞，接种 环灭 菌。（ 5）火焰旁将沾有菌种的接种 环 迅速伸到斜面培养基的底部，由里向外画蛇形细线 ， 线 要画得 细 些。（二） 接种方法1.平板划 线 接种法 ：目的： 使混合的细菌呈单个 分散生长 ，形成单个菌落，以便 获得 纯菌 。方法：1） 连续 划 线 法：适用于 样本含
8、 细 菌量少，如血液 标 本2）分区划 线 法：适用于含菌量 较 多的 标 本，如 粪 便 标本固体平板培养基一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。2.固体斜面培养基接种法：作用：观察细菌的培养特性、生化反应、保存菌种。接种方法：连续划线法。生长现象：呈菌苔样生长。3.半固体培养基 接种法：11作用：检测细菌动力、生化反应接种方法：接种针穿刺法 -用接种针中央直刺，一条线路，底部留空生长现象：沿穿刺线生长 -无动力沿穿刺线扩散生长（呈云雾状或羽毛状） -有动力4.液体培养基 接种法 作用：增菌及检测生化反应。 接种方法：研磨接种。 生长现象：浑浊、沉淀、菌膜样生长。细 菌培养法一般培养（需氧培养）： 培养温度： 37 （采用恒温培养箱） 培养 时间 ： 18 24h实验 一 细 菌的人工培养一、 细 菌在自然界的分布1.空气中 细 菌的 检查 ：每班两 个血平板 ， 标记方法 ：在室内 选择 一 处 放一个平皿，揭开皿盖，暴露放置 10min，即盖上皿盖，放入 37 温箱培养 24小 时 ， 观 察 结 果。
