1、第十二 章,革兰阳性需氧和兼性厌氧杆菌,本章内容,革兰阳性无芽胞杆菌 白喉棒状杆菌 产单核细胞李斯特菌 红斑丹毒丝菌 革兰阳性需氧芽胞杆菌属 炭疽芽胞杆菌 蜡样芽胞杆菌,教学要求,掌握白喉棒状杆菌、炭疽芽孢杆菌生物学性状与微生物学检验。 熟悉产单核细胞李斯特菌的生物学性状与微生物学检查法。 了解红斑丹毒丝菌、蜡样芽胞杆菌的生物学性状与微生物学检查,第一节 革兰阳性无芽胞杆菌,（一 ）生物学特性 1. 形态结构：革兰氏染色阳性，菌体细长弯曲，一端或两端膨大呈棒状，常排列呈V、L等文字形。无鞭毛、无荚膜、无芽胞。用亚甲蓝或奈瑟染色，菌体一端、两端或中央可见明显的浓染颗粒，称为异染颗粒，主要成分是核
2、糖核酸和多磷酸盐。,一、白喉棒状杆菌,电镜下的白喉杆菌,形态与染色,革兰染色白喉棒状杆菌,2. 培养特性：本菌为需氧或兼性厌氧菌。对营养要求较严格，在一般培养基上不生长。在吕氏血清斜面上生长快，菌落为细小有光泽、圆形、灰白色、凸起、光滑的菌落；涂片染色菌体形态典型、异染颗粒明显。在亚碲酸钾血平板上，可形成黑色或灰黑色菌落。此培养基可作为选择和鉴定之用。在麦康凯平板上不生长。,血平板上菌落,亚碲酸钾血平板菌落：,3. 生化反应 发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气。 触酶和硝酸盐还原试验阳性，氧化酶阴性。 不分解尿素，不产生吲哚。 4. 抵抗力对热抵抗力强，煮沸1分钟死亡。对干燥、寒冷和日光的抵抗力较
3、其他无芽胞细菌强，对一般消毒剂敏感。,（二）微生物学检验,标本的采集 鉴定 直接涂片 分离培养 毒力试验,用无菌长棉拭子从疑为假膜的边缘采取分泌物，也可采取鼻咽部或扁桃腺分泌物。作培养时应在抗生素前采取，如不能立即送检，应将标本浸于无菌生理盐水或15%甘油中，标本应取双份。,1. 标本的采集,2. 鉴定,直接涂片染色镜检 革兰染色：观察形态、染色 异染颗粒染色：观察异染颗粒 初步报告：检出具有异染颗粒的革兰阳性杆菌 分离培养：同时接种血平板及吕氏斜面或亚碲酸钾血平板 吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显 亚碲酸钾血平板：黑色菌落,鉴定要点,革兰阳性，着色不均匀，菌体细长弯曲，排列不规则，有
4、X、V形态，具有异染颗粒 触酶阳性，无动力，无芽胞 吕氏血清斜面的菌落：灰白色、隆起、湿润 亚碲酸钾血平板的菌落：黑色或灰黑色,毒力试验,人类临床标本中检出白喉棒状杆菌，并非都能产生毒素，产生外毒素的菌株是由于携带-棒状杆菌噬菌体。可用 Elek 琼脂扩散法体外试验或用动物体内毒力测定。,(1)琼脂平板毒力试验：将含有20牛血清肉汤琼脂注于平皿中，将浸有lOOuml抗毒素血清的滤纸条沉于琼脂内，在与滤纸条垂直方向将待检菌划线接种，同时接种标准产毒株作为阳性对照。37培养 2448h，若菌苔两侧出现斜向外侧延伸的乳白色沉淀线，并与其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合，则为产毒株。,Elek平板试验结
5、果,沉淀线(阳性),含白喉抗毒素滤纸片,白喉杆菌菌苔,(2)动物试验,采用家兔皮内试验法。取待检菌的48h肉汤培养液O2ml，注射在去毛的一侧体壁皮内，5h后注射500U白喉抗毒素血清，30min后再次注射同样的培养液于动物去毛的另一侧体壁皮内作为对照。经2472h后，若注射抗毒素前接种培养液的部位发生红肿与坏死，而对照部位不发生任何变化，则说明待检菌株具有毒力。,（三）临床意义,传染源：患者或带菌者 致病物质：白喉外毒素（由携带-棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生） 经呼吸道飞沫感染，引起白喉。 假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因 中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因 抗白喉免疫主要依靠白
6、喉抗毒素的中和作用,二、产单核细胞李斯特菌,（一）生物学特性 （二）微生物检验 （三）临床意义,（一）微生物特性,形态与染色：G+短小杆菌或球杆菌，常成双排列，无芽胞 培养特性：最适3037， 4能生长，在血琼脂平板上，形成较小、圆形、光滑而有狭窄-溶血环的菌落，耐8.5%NaCl，半固体培养中动力阳性（倒伞形，是本菌特征之一）。 生化反应：触酶（+），甲基红（+），VP（+）， CAMP（+），发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖等，产酸不产气,（二）微生物学检验,标本采集：血液、脑脊液、分泌物及病变组织等 鉴定： 直接涂片：脑脊液离心后取沉淀涂片，其它直接涂片 分离培养： 脑脊液：血琼脂平板 血标本：
7、增菌后，再接种血琼脂平板 咽拭子、组织和粪便等：接种于肉汤培养基中，置于4冰箱中冷增菌，然后转种于血琼脂平板,（二）微生物学检验,鉴定特点：G+杆菌，细菌在湿片中呈翻筋斗运动，触酶阳性等,（三）临床意义,李斯特菌属有7个种，只有该菌对人和动物致病 分布广泛，土壤、水、植物、人和动物粪便中均存在，亦可自甲壳动物、蝇、蜱中分离出 能引起多种野生动物和家畜感染（羊、马、狗、猫、鸟、鱼等） 正常人粪便带菌率达10%左右，70%的人可短期带菌。新生儿、免疫功能降低者，易受该菌感染,健康带菌者是主要的传染源 污染食物，粪-口途径传播，通过肠道扩散全身 胎盘和产道感染新生儿 接触病畜及产品眼和皮肤的局部感染
8、,（三）临床意义,第二节 革兰阳性需氧芽胞杆菌属,炭疽芽胞杆菌蜡样芽胞杆菌,炭疽病疫情,据新华社电2011年8月 12日，从辽宁省卫生厅获悉，辽宁鞍山海城市和岫岩县近日发生的皮肤炭疽传染病疫情，截至11日20时病例报告数已增至30例，其中临床确诊病例3例，疑似病例27例，无死亡病例。 据调查，辽宁这次疫情是由于当地居民私自屠宰或接触病牛而感染发生的,皮肤炭疽,一、炭疽芽胞杆菌,炭疽芽胞杆菌是人类历史上最早被发现的病原菌，俗称炭疽杆菌。是一种致病能力最强的革兰阳性大杆菌。 芽孢：有些细菌(多为杆菌)在一定条件下,细胞质高度浓缩脱水所形成的一种抗逆性很强的球形或椭圆形的休眠体。,（一）微生物特性,
9、形态与染色 培养特性 生化反应 抵抗力,1、形态与染色,致病菌中最大的G+杆菌，两端平切、竹节状、无鞭毛，有毒株有明显荚膜， 有芽胞椭圆形，小于菌体，位于菌体中央,炭疽杆菌荚膜,2、培养特性,需氧或兼性厌氧，生长条件不严格； 普通培养基：扁平、粗糙、不透明、灰白色、无光泽，边缘不整齐的菌落，低倍镜下菌落边缘呈卷发状； 血平板：1215h不溶血，1824h轻微溶血； 肉汤：絮状沉淀生长 其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速,炭疽在普通平板的菌落,炭疽在血平板的菌落,炭疽杆菌卷发状菌落,3、生化反应,发酵葡萄糖、麦芽糖等，产酸不产气 硝酸盐还原试验阳性 不产生吲哚和硫化氢 枸橼酸盐、尿酶阴性,4、抵
10、抗力,抵抗力不强，加热60 30分钟死亡，易被一般消毒剂杀灭； 芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140 3h才能杀灭； 芽胞在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致病力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数十年 生物武器,（二）微生物学检验,标本采集及处理 鉴定 标本直接检查 分离培养 鉴定依据 鉴别试验,1、标本采集及处理,皮肤炭疽：病灶深部标本 肺炭疽：痰和血液 肠炭疽：粪、呕吐物 脑膜炭疽：CSF、血液 尽可能在抗生素治疗前采取标本 严禁用解剖方式获取标本。,2、 鉴定,G+染色：G+大杆菌、两端平截、竹节状排列。 荚膜染色：有明显荚膜，有时呈S、T、O形排列。 芽胞染色：芽胞卵圆形，位于
11、菌体中央，菌体不膨大。,（1）直接镜检,（2）分离培养,血平板上的菌落：较大、灰白色、边缘不整齐和有轻微溶血。 普通营养琼脂平板的菌落：灰白色、扁平、干燥、无光泽。 浸染严重标本，最好用选择性培养基（喷他脒多粘菌素B培养基）。,（3）鉴定依据,涂片染色和菌落特征 生化试验 青霉素抑菌试验 噬菌体裂解试验,将可疑菌落挑出，划线接种于普通营养琼脂平板之上，在划线区内分别贴上浸有诊断用炭疽芽孢杆菌噬菌体和青霉素的纸片。37孵育过夜或24h后，在两种纸片的周围均出现明显的抑菌环，便可判定为炭疽芽孢杆菌。,噬菌体斑,（4）鉴别试验,串珠试验炭疽芽孢杆菌接种于含有0.050.5U/ml青霉素的培养基中，可
12、发生形态变异，形成大而均匀的圆球状并相连如串球状，而类炭疽无此现象。,串珠试验,（三）临床意义,所致疾病：炭疽病 炭疽芽胞杆菌主要是牛、羊等食草类动物炭疽病的病原体 炭疽病是人畜共患的急性传染病 传染源：患病食草动物及其制品或被污染物 传播途径：接触皮肤炭疽食用肠炭疽吸入肺炭疽,致病物质 荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散 毒素：是致病和死亡的主要原因 对青霉素、红霉素、庆大霉素、氯霉素、链霉素、环丙沙星均敏感，但对头孢菌素耐药。,（三）临床意义,二、蜡样芽孢杆菌,微生物学特性 微生物学检验 临床意义,（一）微生物学特性,形态与染色 培养特性 生化反应,1、形态与染色,G+大杆菌，菌体两
13、端稍钝圆，多数呈链状排列。 无荚膜、有鞭毛（炭疽杆菌无鞭毛） 芽胞位于菌体中心或次末端、不突出菌体,蜡样杆菌,2、培养特性,营养琼脂平板：菌落呈乳白色、不透明、边缘不整齐，菌落常沿划线蔓延扩展成片如同白蜡 血平板：菌落呈浅灰色、毛玻璃样，伴草绿色溶血或透明溶血环 卵黄培养基：培养3小时能看到白色混浊环，称之为乳光反应 液体培养基：生长均匀，有菌膜,蜡样杆菌在血平板溶血,蜡样杆菌普通平板菌落,3、生化反应,发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素等，产酸不产气 不产生吲哚和硫化氢 V-P（+）,（二）微生物学检验,标本：患者食物、呕吐物、剩余食物、腹泻粪便 鉴定 直接涂片镜检 分离培养 活菌计数 105
14、个/g 或 105个/ml 鉴定依据：菌落、形态染色、生化反应等,(三)临床意义,食物中毒 含菌量达105/g（ml)以上 呕吐型耐热肠毒素 腹泻型不耐热肠毒素 心内膜炎、败血症和脑膜炎 夏、秋季多见,练习题,1、对炭疽病动物采集标本要特别禁止( ) A、取舌尖 B、取耳尖 C、局部病灶的病变组织 D、宰杀后解剖2、下列哪种细菌的菌落为卷发状( ) A蜡样芽胞杆菌 B炭疽芽胞杆菌 C白喉棒状杆菌 D阴道加特纳菌 E产单核李斯特菌,3、以下哪个不是炭疽芽胞杆菌的生物学特征( ) A、革兰阳性 B、菌体呈竹节状 C、专性需氧 D、感染后病死率不高 4、既有荚膜又有芽胞的细菌是( ) A、肺炎克雷伯菌 B、炭疽芽胞杆菌C、枯草芽胞杆菌 D、蜡样芽胞杆菌 5、产单核李斯特菌在半固体培养基中培养可出现（ ） A、沉淀生长 B、浑浊生长 C、产生色素 D、倒伞形生长,6、下列关于炭疽芽孢杆菌描述错误的是（） A两端平截，呈竹节状 B芽孢位于菌体一端呈椭圆形 C在普通培养基上形成灰白色，粗糙型菌落，边缘不整齐 D在血琼脂培养基上不溶血或微溶血 E是人畜共患的急性传染病的病原体,
