1、2018/10/25,ms-g-s,1,多发性硬化 许贤豪 卫生部北京医院神经科 100730 北京东单大华路1号 TEL & FAX: 010-6514-2439 e-mail address: ,2018/10/25,ms-g-s,2,定 义多发性硬化是中枢神经系统炎性、多灶性、脱髓鞘性疾病。虽有20病人自起病后进行性加重，但多数是以复发、缓解为特征。其典型的症状和体征，是由于脊髓的白质传导束、视神经、脑室周围白质、脑干和小脑的病变所致。,2018/10/25,ms-g-s,3,诊 断临床诊断的主要依据是：有中枢神 经系统白质病变的证据，且有其部位及时 间上的多发。应除外其他疾病(Eber
2、s GC 1986:1268)。多发性硬化是一种以血管周围炎性细胞浸润和多灶性脱髓鞘为主要特征的中枢神经系统疾病。,2018/10/25,ms-g-s,4,多发性硬化的诊断标准(Poser 1983,1984) _ 临床 发作 临床 实验室 脑脊液寡 类别 次数 证据 证据 克隆区带 临床确定 1 2 2 实验室确定 1. 2 1 或1 或+ 2. 1 2 + 3 1 1 1 + 临床可能 1. 2 1 2. 1 2 3. 1 1 1 实验室可能 1. 2 +2. 1 1 +,2018/10/25,ms-g-s,5,发病率 发病率因区域不同而有明显差别： 北欧的北纬45-65度之间，于北美洲(
3、美国北部、加拿大南部)、澳大利亚南部和新西兰为多发性硬化高发病区，为30-80/10万或100/10万；美国南部和南欧为6-14/10万； 亚洲为低发病区，为5/10万； 热带，则仅为1/10万； 非洲的Bantu则根本没听说过有多发性硬化。,2018/10/25,ms-g-s,6,多发性硬化的临床分型 1996年根据病程特点把MS进一步分为： 1, 复发缓解型(Remission Relapsing,RR)MS：急性发病后恢复或有后遗症，两次复发间病期稳定； 2,原发进展型(Primary Progressive,PP)MS：进行性发病且仅有短暂、不明显的症状改善； 3,继发进展型(Seco
4、ndary Progressive,SP)MS：症状进行性恶化，伴或不伴急性复发； 4, 进展复发型(Prograssive Relapsing, PR)MS：发病后病情逐渐进展，并间有复发，两次复发间持续进展。,2018/10/25,ms-g-s,7,诊断 应注意要除外其他疾病,尤其是脊髓型多发性硬化 黄惠芬、徐文璇、赵葆洵、许贤豪、胡跃琨。误诊为脊髓多发性硬化的2例报告。临床神经病学杂志 1989;2(4):220-1,210,2018/10/25,ms-g-s,8,多发性硬化-发病机制 多发性硬化病人脑脊液中免疫活性细胞均来自周围血 1, 如何选择性地通过血脑屏障(ICAM-1, VCA
5、M-1, LFA-1) 2, 如何像导弹一样达到神经系统中轴部位的髓鞘(MHC-II) 3, 如何攻击、破坏神经系统中轴部位的的髓鞘 (Cytokines) (许贤豪：多发性硬化。于：许贤豪主编：神经免疫学。第十九章。武汉：湖北科学技术出版社 2000:210-236),2018/10/25,ms-g-s,9,多发性硬化-遗传研究 在中国和高加索MS病人证实有一个新的易感位点-19号染色体上与MS相关的单位点和多位点单体 Barcellos LF, Thomson G, Carrington M, schafer J, Befovich AB, Lin P, Xu X-H, Min B-Q,
6、Marti D, Klitz W. Chromosome 19 single-locus and multilocus haplotyp associations with multple sclerosis. Vidence of a new sussceptibilityu locus in Caucasian and Chinese patients. JAMA 1997, Oct.15,278(15):1256-1261,2018/10/25,ms-g-s,10,多发性硬化-遗传研究 高加索多发性硬化病人有Sp3基因缺如。 中国多发性硬化病人是否有类似缺如？ 缺如的可能机制-启动子处找
7、原因,2018/10/25,ms-g-s,11,多发性硬化-遗传研究 CCR5 位于多发性硬化易感基因附近 是人类单疱病毒的受体 学说：有CCR5者是人类单疱病毒的易感者-感染人类单疱病毒后-打开多发性硬化易感基因-临床上表现出多发性硬化,2018/10/25,ms-g-s,12,自身免疫攻击的靶 髓鞘碱性蛋白(Myelin Basic Protein, MBP) 蛋白脂蛋白(Proteolipid Protein, PLP) 髓鞘相伴糖蛋白(Myelin Associated Glycoprotein, MAG ) 髓鞘少树突胶质细胞糖蛋白(myelin oligo-dendrocyte g
8、lycoprotein-MOG),2018/10/25,ms-g-s,13,抗原决定簇扩散 （Epitope Spreading） 在自身免疫中，抗原特异性T细胞趋于更易识别相同抗原中的抗原决定簇。当疾病进展时，更易识别相同器官多种抗原，人们把这一过程称之为“抗原决定簇间或内扩散”。,2018/10/25,ms-g-s,14,抗原决定簇扩散只有复发进展型小鼠对新的致脑炎决定簇有扩散识别能力。当用抗CD3抗体刺激T细胞时，进展型MS病人产生IFN-量增高的产量远较复发缓解型MS病人为多，其增多为IL-12依赖性，且IL-12产量也明显增高。 131例复发缓解型MS病人和35例继发进展性MS病人用
9、IFN-1b治疗的前瞻性研究，发现进展型和转化为继发进展型MS病人，尿中MBP明显增高。,2018/10/25,ms-g-s,15,轴索损害的机制(1) 1,髓鞘再生不能：髓鞘再生依赖于少突胶质细胞或病灶中它们的祖先细胞。在疾病进展的慢性病变中，可能由于祖先细胞耗竭引起髓鞘修复不能；这发生在复发性脱髓鞘发作时，最终继发性轴索变性，导致永久性神经功能障碍。 2,早期轴索损害：在MS发病的急性或慢性期，轴索受损可能使由于巨噬细胞和CD8炎症反应产生阳性T细胞等炎症细胞直接浸润或炎症反应产生毒性物质引起暴露轴索髓鞘丧失造成或体液免疫反应有助于不可逆轴索损害。,2018/10/25,ms-g-s,16
10、,轴索损害的机制(2) 3,继发性轴索变性：轴索有广泛异常，表现为轴索染色不连续和轴突管径改变。在慢性活动性病灶胞浆少的中心有轴索末端卵圆形体。,2018/10/25,ms-g-s,17,磁共振成像（Magnetic Imaging） 近年新的MRI技术包括：磁共振波谱分析(MRS, Spectrum)、磁共振传递成像(MTI)、弥散加权成像(DWI)。 这些为早期轴索丧失提供间接证据。也提示：轴索损害既发生在病灶内(炎症的结果)，又发生在貌似正常的白质中(轴索横断后继发性轴索变性和炎变小病灶共同作用结果),2018/10/25,ms-g-s,18,新的MRI技术包括：磁共振波谱分析(MRS,
11、 Spectrum)、磁共振传递成像(MTI)、弥散加权成像(DWI)。 这些为早期轴索丧失提供间接证据。也提示：轴索损害既发生在病灶内(炎症的结果)，又发生在貌似正常的白质中(轴索横断后继发性轴索变性和炎变小病灶共同作用结果),2018/10/25,ms-g-s,19,Imaging Studies Magnetic Resonance Imaging (MRI) Routine Quantitative 张华、许贤豪、国红、李宝林、冯颍、刘广志、张星虎、王红. MRI定量分析以及在多发性硬化(MS)研究中的应用. 第六届全国神经免疫学术研讨会“论文汇编”1999年10月，北京1999:8,
12、2018/10/25,ms-g-s,20,病理（PATHOLOGY）在某一特定时期，某病人所有病灶有共同的病理形式。但随病程延长，新旧病灶交织，这为治疗设计增加了难度。 传导阻滞可由阶段性脱髓鞘和暴露的轴索易接触到炎症反应产生的NO、自由基等毒性物质引起。,2018/10/25,ms-g-s,21,体液免疫 非特异性 特异性,2018/10/25,ms-g-s,22,等电点聚焦测IgG组分区带 (IgGFBs) 可测得少到25 ng/ml的IgG, 23 例正常对照 24例神经系统非炎性疾病 8 例神经系统炎性疾病 27例散发性多发性硬化 29例多发性硬化病人纯或杂合子双胎 Xu X-H, M
13、cFarlin DE. Oligoclonal bands in CSF: Twins with MS. Neurology, 1984,34(6): 769-774 吴佳怡、许贤豪、赵卫国。检测脑脊液IgG组分区带新方法。中华医学检验杂志 1987;10(4): 224-225,2018/10/25,ms-g-s,23,等电点聚焦测IgG组分区带 (IgGFBs) 34/35例有临床证据多发性硬化病人 12/17临床上正常的多发性硬化病人的杂合子双胎，3年后随访发现3例临床上出现MS的临床证据 Xu X-H, McFarlin DE. Oligoclonal bands in CSF: Tw
14、ins with MS. Neurology, 1984,34(6): 769-774,2018/10/25,ms-g-s,24,等电点聚焦测IgG组分区带 (IgGFBs) IgGFBs有助于临床上怀疑MS者作出临床上可能MS的诊断 Xu X-H, McFarlin DE: : Oligoclonal Bands in CSF: Twins with MS. Year Book of Neurology and Neurosurgery 1986:166-168,2018/10/25,ms-g-s,25,用等电点聚焦+ Western印迹+ ABC染色检测IgGFBs 1, 等电点聚焦 2,
15、 Western印迹到硝酸纤维薄膜 3, 浸泡于3%无-球蛋白的小牛血清白蛋白(BSA)中 4, 直接过氧化物酶染色 5, 过氧化物酶抗过氧化物酶染色 6, 生物素抗生物素过氧化物酶复合物染色 Xu X-H. Detection of IgG fraction bands in cerebrospinal fluid by highly sensitive specific immunoperoxidase staining methods. Asian Pacific Journal of Allergy and Immunology 1985;3(1):9-15,2018/10/25,ms
16、-g-s,26,IgGFBs不同检测方法的敏感性sensitivity ng IEF+考马氏亮蓝染色 1 IEF+银染色 100 200.00 IEF+Western印迹+DPS 1200-1600 25.00 IEF+Western印迹+PAP 2400-3200 12.50 IEF+Western印迹+ABC 4800-6400 6.25 Xu X-H. Detection of IgG fraction bands in cerebrospinal fluid by highly sensitive specific immunoperoxidase staining methods.
17、Asian Pacific Journal of Allergy and Immunology 1985;3(1):9-15,2018/10/25,ms-g-s,27,高度敏感、特异检测IgG组分区带(IgGFBs)的方法 Xu X-H: Detection of IgG fraction bands in cerebrospinal fluid by highly sensitive and specific immunoperoxidase staining methods. (Cambridge Scientific Abstracts) Immunology Abstracts 198
18、5;10(9):25,2018/10/25,ms-g-s,28,测得组分区带的命名(1) 问题的提出： 1,若把电泳法检测寡克隆区带阴性的脑脊液用等电点聚焦法检测获IgG区带阳性。 2,若把电泳法测得为单克隆区带的CSF标本用等电点聚焦法测可测得26条区带。 (Xu X-H et al. 1987:186),2018/10/25,ms-g-s,29,测得组分区带的命名(2) 命名应遵循的原则： 1,命名应包括方法学在内。 2,脑脊液内测得而相应血中未能测得的区带才能命之为“阳性” 。 (Xu X-H et al. 1987:186),2018/10/25,ms-g-s,30,测得组分区带的命名
19、(3) 命名的建议： 1, 加入检测的脑脊液和血标本中IgG含量应相等，并排检测。 2,脑脊液内测得而相应血中未能测得的区带命之为“阳性” 。 3,把电泳法于 区测得的区带命为“组分区带” ；把等电点聚焦于IgG区测得的区带名之为“IgG组分区带” (Xu X-H et al. 1987:186) Xu X-H and Wang X-G: Terminology of IgG Fractional Bands and Gamma Fractional Bands. J Neuroimmunol 1987;16(1):186,2018/10/25,ms-g-s,31,双向电泳 (2-DE) 等电
20、点聚焦+电泳 银染色法 (系数=1) H3- 放射自显影(系数=4) Harrington MG, Merril CR, Goldman D, Xu X-H, McFarlin DE. Two dimensional electrophoresis of cerebrospinal fluid proteins, in multiple sclerosis and various neurological diseases. Electrophoresis, 1984,5:236-245,2018/10/25,ms-g-s,32,双向电泳 (2-DE) 14 例正常志愿者 20 例非炎性神经科
21、病人 17 例炎性神经科病人 22 例MS病人 6 例亚急性硬化性全脑炎 Harrington MG, Merril CR, Goldman D, Xu X-H, McFarlin DE. Two dimensional electrophoresis of cerebrospinal fluid proteins, in multiple sclerosis and various neurological diseases. Electrophoresis, 1984,5:236-245,2018/10/25,ms-g-s,33,双向电泳 (2-DE) 用双向电泳于MS病人脑脊液中检测出3
22、个特殊的点 序号 分子量 pH值 1, 16 000 6.2 2, 20 000 5.6-6.6 3, 25 000 6.2-6.6 Harrington MG, Merril CR, Goldman D, Xu X-H, McFarlin DE. Two dimensional electrophoresis of cerebrospinal fluid proteins, in multiple sclerosis and various neurological diseases. Electrophoresis, 1984,5:236-245,2018/10/25,ms-g-s,34,
23、对此3点的设想 1.取出此3点 2.分离出此3点的蛋白质 3.用分离出来的蛋白免疫动物 4.纯化出针对此蛋白的抗体 5.用抗体定量测定此蛋白 Harrington MG, Merril CR, Goldman D, Xu X-H, McFarlin DE. Two dimensional electrophoresis of cerebrospinal fluid proteins, in multiple sclerosis and various neurological diseases. Electrophoresis, 1984,5:236-245,2018/10/25,ms-g-s
24、,35,脑脊液中免疫球蛋白的定量检测 1.免疫单扩散(Mancini)法 2.火箭免疫电泳 3.酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay, ELISA) 4.放射免疫法(RadioImmunoAssay,RIA) Xu X-H, He X-M, Nie L-C and Wu A-R. Preliminary analysis of clinical significance of determination of cerebrospinal fluid immunoglobulins. Chin Med J 1981;94 (3):161-166
25、李黎、周彤、李伊东、张永祥、许贤豪、吴安然。一种特异、敏感、快速ELISA检测微量IgG水平。中国免疫学杂志 1985;1(3):45-48 Xu X-H, Zhang H, Guo H, Wang X-Y, Sun H, Han X, Li B-L, Pang F-Z, Wang H, Wen S-G, Jiang Y, Tan M-X:Clinical Neuroimmunology. Advances in Neuroimmunology 1996;6:249-257,2018/10/25,ms-g-s,36,脑脊液中IgG综合检测 CSF中IgG定量检测 CSF中IgG半定量研究 双向
26、电泳(Two-Dimensional Electrophoresis) CSF中综合研究 Xu X-H: A Comprehensive Study of CSF IgG. J Neuroimmunol 1987;16(1):187,2018/10/25,ms-g-s,37,体液免疫学 非特异性 特异性,2018/10/25,ms-g-s,38,脑脊液中特异性抗原 (Myelin Basic Protein-MBP) 及其抗体 随临床病情加重而增高 MBP出现较MBP Ab早出现 Min B-Q, Xu X-H, Wang H, Fan Z-G, Ma W-Y, Wang X-Y, Zhang
27、 H, Lin J-Y, Huang H-F, Wei G-Z. Measurement of myelin basic protein (MBP) and MBP antibody (MBPA) in cerebrospinal fluid (CSF) of MS patients. Chin J Neuroimmunol Neurol 1997;4(Suppl):65-66,2018/10/25,ms-g-s,39,细胞免疫 (Cell-Mediated Immunity-CMI) 高应答性细胞系 细胞因子,2018/10/25,ms-g-s,40,MS病人脑脊液中淋巴细胞的定性 自MS病
28、人脑脊液中分离出特异性细胞系 脑脊液细胞系的定性 Richert JR, Rose JW, Xu X-H, Greenstein JI, McFarland HF and McFarlin DE. Characterization of cerebrospinal fluid lymphocytes in multiple sclerosis. Ann NY Acad Sci, 1985, 436:151-162,2018/10/25,ms-g-s,41,Cell-Mediated Immunity (CMI)High responder cell line Cytokines,2018/10
29、/25,ms-g-s,42,Serum Cytokines Serum IL-2 and sIL-2R increased with clinical aggravation of Multiple Sclerosis Min B-Q, Xu X-H, Wang X-Y, Ma W-Y, Fan Z-G, Zhang H, Lin J-Y, Huang H-F, Wei G-Z. Serum levels of IL-2 and soluble IL-2R in patients with multiple sclerosis.Chin J Neuroimmunol Neurol 1997;4
30、(Suppl.):66-67,2018/10/25,ms-g-s,43,病理生理与临床基础 一发生血管炎的机制 二髓鞘脱失的机制 三产生临床、电生理改变的机制 四复发、缓解，和渐加重的机制 五周围神经受累的可能机制,2018/10/25,ms-g-s,44,病理生理与临床基础 六临床定位与病理及影像学所见不一致的机制 七Lhermitte综合征的机制 八东方病人视神经脊髓受累较多而西方病人小脑和脑干受累较多的机制 九, 发作性症状的机制,2018/10/25,ms-g-s,45,多发性硬化合并重症肌无力 多发性硬化：中枢神经系统多发性损害+两次以上发作+脑脊液中IgG组分区带阳性+诱发电位阳性
31、 重症肌无力：临床上有晨轻暮重、活动后加重休息后减轻的随意肌无力，药理学上胆碱酯酶抑制剂有效，电生理上低频重复电刺激示波幅递减、单纤维肌电图示Jitter增宽，免疫学上示血清中乙酰胆碱受体抗体增高 贺建华、张茁、刘水平、许贤豪。重症肌无力与多发性硬化并存一例报告。中华神经科杂志 1998;31(1):50,2018/10/25,ms-g-s,46,临床表现 视神经71.4%，脊髓51.5%，脑干45.7%，大脑34.3%，小脑28.3 %。,2018/10/25,ms-g-s,47,临床表现-发作性症状 病人常把Lhermitte综合征描述如下：象一种电流顺脊柱而下，有时可达下肢，臂(一侧罕见
32、)，偶可上升达背和颈部。典型的是当低头时引起，反复多次则减轻。 某些病例过度换气可促发痛性痉挛和其它发作。体育锻炼、情绪波动和发热可使原有症状加重或引起一次新的短暂发作。于此种情况下短暂的视觉丧失称之为Uhthoff症状。,2018/10/25,ms-g-s,48,植物神经功能障碍 有些病人发现手足发绀，微循环检查示足皮肤毛细血管的血流缓慢。下丘脑受累少见，虽有些病人可表现为停经，Ebers GC等见2例伴泌乳、1例有低体温而未发现其它疾病。,2018/10/25,ms-g-s,49,临床表现-发作性症状(1) 其它发作性症状包括单眼闪光幻觉(photopsia)，这可能是一种与Lhermit
33、te氏综合征相似的视觉症状。感觉异常、构音不良、无力、复视、共济失调，这些可单独或合并存在，很象暂时性大脑或脑干缺血发作。有时短暂的强直痉挛可累及臂或一侧肢体而被误诊为Jackson氏癫痫发作。,2018/10/25,ms-g-s,50,临床表现-发作性症状(2) 1982年Smith KJ和McDonald WI等的实验显示：当部分脱髓鞘的脊髓轴突遭到很小机械性刺激时可致自发性放电。 1973年Rasminsky M(:284)的实验研究显示：当温度稍增高时会使原已部分脱髓鞘的周围轴索增加对神经传导阻滞的易感性。可用此种机制来解释发热和体育锻炼可伴以暂时性中枢现象。,2018/10/25,m
34、s-g-s,51,临床表现-内分泌障碍 血清中PRL水平于MS病人急性复发期上升，且PRL水平上升是MS病人产后复发率升高的主要机制，即PRL与MS病情加重密切相关。 女较男易患MS，在产后MS复发率明显升高，这可能与女性体内雌激素、PRL水平升高及基础生长激素释放，导致抑制性T细胞功能降低，而使MS发作危险性增加。,2018/10/25,ms-g-s,52,同心圆硬化(Balo病) 同心圆硬化是一种罕见的大脑脱髓鞘病。病灶呈明暗相间的条纹，形如年轮状或葱头的剖面。现一般认为是多发性硬化的一型，也有人，如Gharagciloo等认为是一种独立的中枢神经系统的脱髓鞘病 此病缺乏特异性临床表现，多
35、有低热、乏力等前驱症状。初期多为精神、行为、意识、语言、运动、等障碍。重者可出现去大脑强直、去皮层状态、失语、痉挛性瘫痪等。少数可有失神经、小脑、脑干和脊髓受累。,2018/10/25,ms-g-s,53,同心圆硬化(Balo病) 脑脊液多数正常，可有细胞数或蛋白增高。脑电图可见局限性或弥漫性慢波。脑CT多无特殊所见。但脑MRI的T1加权相可显示白质区典型的葱头样或年轮样类圆形病灶；T2加权相呈长T2的高信号，若增强，则其层状结构更为明显。 此病预后不良。多数于数月内死亡。但于急性期积极、适当治疗可望挽救生命，故其早期诊断非常重要。 诊断：过去认为有赖于病理诊断，现发现MRI可作为生前及早期诊
36、断此病的可靠手段。,2018/10/25,ms-g-s,54,Therapeutic Strategy Immunosuppresants: AGCS Cyclosporin A Azathioprine Cyclophosphamide High Dose Intravenous Immunoglobulin Immune Tolerance T4 Cell Vaccination Gene Therapy 许贤豪：多发性硬化。于：许贤豪主编：神经免疫学。第十九章。武汉：湖北科学技术出版社 2000:210-236,2018/10/25,ms-g-s,55,MS的治疗 肾上腺皮质激素 (AG
37、CS)冲击治疗 短期大量优于长期小量 许贤豪：多发性硬化的肾上腺皮质类固醇治疗。实用内科杂志1990;10(12): 652-653,2018/10/25,ms-g-s,56,甲基强的松龙静脉点滴，每日1克连续3天，可减少50%病人在2年内转变成临床肯定MS，但这种作用持续时间不长，在以后5年内消失。 许贤豪：多发性硬化的肾上腺皮质类固醇治疗。实用内科杂志1990;10(12): 652-653,2018/10/25,ms-g-s,57,MS的治疗 环孢菌素A: 3-8mg/kg /d x 3-12 月 闵宝权、许贤豪：环孢菌素A治疗多发性硬化。中国神经免疫学和神经病学 1995;2(2):1
38、21-125,2018/10/25,ms-g-s,58,共聚物-1（Co-polymor-1） 于复发缓解型MS病人用共聚物-1治疗试验中，EDSS评分最低者效果似乎最佳。,2018/10/25,ms-g-s,59,-干扰素（Interferon-） IFN-1a： 对MS疾病活动程度的影响 因病程而异 PRISMS研究：对EDSS为3.5或3.5病人临床上不再恶化，非增强扫描时，其临床和MRI盖上只有发生在高剂量组,2018/10/25,ms-g-s,60,CHAMPS试验： 目的：能否缓解急性单症状病人 用Avonex 30g 肌肉注射,3周 早期病例小剂量有效。,2018/10/25,m
39、s-g-s,61,ETOMS研究： 目的：能否缓解急性多症状发作。 Rebif 22g皮下注射，各观察3月 早期病人用低剂量有效,2018/10/25,ms-g-s,62,基因治疗(Gene Therapy)转基因技术的创立大大提高了我们理解在动物模型和相关人类疾病中各种不同基因的功能。对诱导基因表达的四环素-调节转活化(transactivation)系统使我们能以暂时和定量方式控制外源性基因的表达。这种细胞特异性启动子操作使我们能在单一型细胞上表达一种特殊的蛋白。四环素系统和组织特异性启动子的结合使我们能创立一种发明性的基因表达系统，这样有可能以某型细胞特异性、时间-和水平-可控制的形式表
40、达基因。一种少树突细胞-特异性髓鞘碱性蛋白(MBP)基因启动子控制其逆转了的四环素-诱导性转活化剂(transactivator)。,2018/10/25,ms-g-s,63,基因治疗(Gene Therapy)可通过基因治疗提供细胞因子抑制剂，如TNF拮抗剂，达到进行中自身免疫性疾病的免疫调节。研究表达小鼠干扰素基因和含与小鼠免疫球蛋白连接人类p55 RNF受体细胞外活性部位(Domain)的嵌合性蛋白(chimeric protein)的逆转录病毒载体(vectors)和试验质粒(test plasmid)。这些载体(vectors,向量带菌者)暂时表达于COS-7细胞和持续地表达于amp
41、hotropic包装的细胞系或ABH小鼠不灭的(immortalized)成纤维细胞。,2018/10/25,ms-g-s,64,基因治疗(Gene Therapy) 用ELISA测定其表达水平。以Western转印和生物学活性测定中枢神经系统中组织特异性表达，在大鼠NSE启动子控制下把干扰素基因克隆并表达。于实验性变态反应性脑脊髓炎(一种多发性硬化的小鼠模型)诱导期把DNA-脂质体(liposome)复合物直接颅内注射以评价此种结构和疗效。,2018/10/25,ms-g-s,65,基因治疗(Gene Therapy) 于实验性变态反应性脑脊髓炎动物的视神经试验由病毒介导人类分解酶(cata
42、lase)基因转染(transfer)的氧化损伤的抑制。实验性变态反应性脑脊髓炎是原发性中枢神经系统脱髓鞘的炎性自身免疫性疾病,常被用作人类多发性硬化的动物模型.视神经是实验性变态反应性脑脊髓炎和多发性硬化的常见受累部位。把含人类分解酶(catalase)基因的重组腺苷相伴性病毒同时注入实验性变态反应性脑脊髓炎的SJL/J小鼠右侧视神经乳头。,2018/10/25,ms-g-s,66,基因治疗(Gene Therapy) 一个月后，细胞特异性分解酶活性，用分解酶免疫金(immunogold)的定量方法评价细胞特异性分解酶活性，比内皮细胞、少树突胶质细胞、星形细胞者高一倍，和视神经轴索的二倍。对脱髓鞘来说用髓鞘区，对视神经乳头水肿来说用视盘面积，和于活体用过氧化氢反应产物的计算机分析其实验性变态反应性脑脊髓炎组织损害的分解酶作用。注射不伴治疗性基因的重组病毒的对侧视神经相比，接种分解酶基因使脱髓鞘减低38%，视神经乳头水肿减少29%，细胞浸润减少34%，血脑屏障破坏减少64%，而活体的H2O2减少61%。,2018/10/25,ms-g-s,67,基因治疗(Gene Therapy) 因为潜在治疗多发性硬化的效果通常用实验性变态反应性脑脊髓炎来实验，所以，此研究提示：用病毒载体(vectors)分解酶基因传递可能是抑制多发性硬化的治疗策略之一。,
