DB50T427-2012 土壤、沉积物和固体废物 二恶英类的筛查 酶联免疫法.docx

1、IDB50ICS 13.030Z 70备案号：33235-2012重 庆 市 地 方 标 准DB50/T4272012土壤、沉积物和固体废物 二恶英类的筛查 酶联免疫法Soil, Sediment and Solid Waste Screening of polychlorinated dibenzo-p-dioxins(PCDDs) and polychlorinated dibenzofurans(PCDFs) Enzyme-Linked Immunoassay2012-02-15 发布 2012-09-01 实施重 庆 市 环 境 保 护 局重 庆 市 质 量 技 术 监 督 局 发 布

2、目 次前 言 III1 范围.12 规 范 性 引 用 文 件 .13 术 语 和 定 义 、 符 号 和 缩 略 词 .14 方法原理 25 试 剂 和 材 料 .26 仪器设备 37 样品采集 38 样 品 前 处 理 .39 酶 联 免 疫 分 析 .510 标 准 曲 线 绘 制 612 检 测 限 、 精 密 度 和 准 确 度 713 质 量 保 证 和 质 量 控 制 814 报告815 废 物 处 理 916 注 意 事 项 9附 录 A （ 规 范 性 附 录 ） 二 恶 英 类 分 析 流 程 图 10附 录 B（ 资 料 性 附 录 ） 样 品 蒸 发 模 式 .11附

3、录 C（ 资 料 性 附 录 ） 标 准 溶 液 浓 度 序 列 .12附 录 D（ 资 料 性 附 录 ） 标 准 曲 线 控 制 参 数 .13II前 言本标准根据 GB/T1.1-2009 规 定 进 行 编 制 。 本标准为推荐性标准。 本标准为首次发布。 本标准由重庆市环境保护局提出并归口。本标准起草单位：重庆市固体废物管理中心。 本标准起草人：廖世国 阳 剑 蔡 洪 英 季 祥 海 郑鸿柯 本 标 准 自 2012年 9月 1日 实 施 。III1土 壤 、 沉 积 物 和 固 体 废 物 二 恶 英 类 的 筛 查 酶 联 免 疫 法1 范围本 标 准 规 定 了 采 用 酶 联

4、 免 疫 法 筛 查 土 壤 、 沉 积 物 和 固 体 废 物 （ 包 含 飞 灰 、 盐 泥 、 工 业 废 渣 、 污 泥 ） 中 的 多 氯 代 二 苯 并 二 恶 英 （ PCDDs） 和 多 氯 代 二 苯 并 呋 喃 （ PCDFs） 方 法 。本 标 准 适 用 于 土 壤 、 沉 积 物 和 固 体 废 物 中 二 恶 英 类 的 筛 查 ， 利 用 酶 联 免 疫 法 筛 查 土 壤 、 沉 积 物 和 固体废物中的多氯代二苯并二恶英和多氯代二苯并呋喃。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期

5、的 引 用 文 件 ， 仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件 。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。HJ/T20-1998 工业固体废物采样制样技术规范 HJ/T166-2004 土 壤 环 境 监 测 技 术 规 范 HJ 494-2009 水质采样技术指导3 术 语 和 定 义 、 符 号 和 缩 略 词下列术语和定义适用于本标准。3.1 术 语 和 定 义3.1.1 二 恶 英 类多氯代二苯并二恶英 ( PCDDs)和 多 氯 代 二 苯 并 呋 喃 (PCDFs)的 总 称 。3.1.2 同 类 物二恶英类所有化合物互为同类物。二恶英类共

6、有 210 种 同 类 物 。3.1.3 2,3,7,8-多 氯 代 二 恶 英 类指 在 2,3,7,8 位 均 有 氯 原 子 取 代 的 二 恶 英 类 同 类 物 ， 共 有 17 种 ， 其 中 多 氯 代 二 苯 并 二 恶 英 有 7 种 ，多 氯 代 二 苯 并 呋 喃 有 10 种 。3.1.4 毒 性 当 量 （ TEQ）各 二 恶 英 类 同 类 物 浓 度 折 算 为 相 当 于 2,3,7,8-四 氯 代 二 苯 并 二 恶 英 毒 性 的 等 价 浓 度 ， 本 标 准 检 测 结果为 Bio-TEQ， 经 换 算 后 可 转 换 为 I-TEQ。3.1.5 孵育在

7、 20-26 下 ， 使 二 恶 英 类 与 酶 联 免 疫 测 定 管 中 的 抗 体 充 分 结 合 的 过 程 。3.1.6 试 剂 空 白以分析待测样品溶液所使用的溶剂作为空白，其余操作步骤和实际样品相同的空白实验。3.1.7 操 作 空 白除不添加实际样品外， 样品制备、 前处理、 仪器分析和数据处理步骤与实际样品分析步骤相同的空 白实验。3.2 符 号 和 缩 略 词23.2.1 PCDDs多 氯 代 二 苯 并 二 恶 英 ， 有 75 种 同 类 物 。3.2.2 PCDFs多氯代二苯并呋喃，有 135 种 同 类 物 。3.2.3 2,3,7,8-TCDD2,3,7,8-四

8、氯 代 二 苯 并 二 恶 英 。3.2.4 HRP辣根过氧化物酶。3.2.5 TEG四乙烯乙二醇。3.2.6 DF1-60 酶 联 免 疫 试 剂 盒本 标 准 采 用 的 一 种 试 剂 盒 ， 包 含 酶 联 免 疫 测 定 管 ， 样 品 稀 释 液 ， HRP， HRP 底物，终止液（1mol/L 盐酸溶液） ， Triton X-100， 保 留 剂 。3.2.7 CAF校正因子。4 方法原理酶 联 免 疫 法 的 基 础 是 抗 原 或 抗 体 的 固 相 化 及 抗 原 或 抗 体 的 酶 标 记 。 结 合 在 固 相 载 体 表 面 的 抗 原 或 抗体仍保持其免疫学活性，

9、 酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性， 又保留酶的活性。 在测定时， 受 检样品 （测定其中的抗体或抗原） 与固相载体表面的抗原或抗体起反应 。 用洗涤的方法使固相载体上形 成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。 再加入酶标记的抗原或抗体 ， 也通过反应而结合在固相 载体上。 此时固相上的酶量与样品中受检物质的量呈一定的比例 。 加入酶反应的底物后， 底物被酶催化 成为有色产物，产物的量与样品中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。 参见图 1 和 附录 A“二恶英分析流程图 ”。蓝 色 产 物PCDD/F HRP(辣 根 过 氧 化 物 酶 )干 扰 物 抗 二

10、恶 英 抗 体HRP 底 物5 试 剂 和 材 料图 1 筛 查 原 理 简 单 示 意 图除 非 另 有 说 明 ， 分 析 试 剂 均 使 用 农 残 级 试 剂 ， 并 进 行 空 白 实 验 。 有 机 溶 剂 浓 缩 万 分 之 一 倍 ， 不 得 检出二恶英类。35.1 2,3,7,8-四 氯 代 二 苯 并 二 恶 英 ： 标 准 品 试 剂5.2 无 水 硫 酸 钠 ： 分 析 纯5.3 酸 洗 石 英 砂5.4 正己烷5.5 丙酮5.6 甲苯5.7 甲醇5.8 正 十 四 烷 ： 分 析 纯5.9 盐 酸 ： 优 级 纯 。5.10 二 氯 甲 烷5.11 SP3-60 试

11、剂 盒 （ 含 40mL 萃 取 瓶 、 碳 柱 、 钢 珠 和 酸 性 硅 胶 ） ，SP2-ST 试剂盒 (含 硅胶柱和空柱) ， SP2-RT 试剂 盒（含活塞） ，DF1-60 试 剂盒5.12 25mL 容量瓶5.13 连续 移液器（100L-2mL） ， 微量移液器（0-10 L， 0-100L） 。5.14 带 有 聚 四 氟 乙 烯 树 脂 内 衬 盖 子 的 玻 璃 小 瓶 (2 12mL)。5.15 玻 璃 试 管 （ 15-20mL）5.16 铝箔5.17 过 滤 筛 （ 200 目）6 仪器设备6.1 电 子 天 平 （ 百 分 之 一 ）6.2 平 板 轨 道 振 荡

12、 器 （ 可 做 椭 圆 旋 转 ）6.3 离心机6.4 氮 气 吹 干 仪6.5 旋 转 蒸 发 仪6.6 索 氏 提 取 器6.7 分 光 光 度 计 （ 波 长 450nm）7 样品采集土 壤 采 集 按 HJ/T166-2004 土 壤 环 境 监 测 技 术 规 范 中 采 样 的 规 定 方 法 实 施 。 沉 积 物 采 集 按 HJ 494-2009 水 质 采 样 技 术 指 导 中 采 样 的 规 定 方 法 实 施 。 固 体 废 物 采 集 按 HJ/T20-1998 工 业 固 体 废 物 采样制样技术规范 中采样的规定方法实施。 采集后的土壤、 沉积物和固体样品在实

13、验室中风干 、 磨碎、 过 筛 ， 保 存 在 棕 色 玻 璃 瓶 中 ， 贮 存 于 2-6 环 境 中 。 样 品 采 集 后 ， 40天 内 应 完 成 提 取 。8 样 品 前 处 理8.1 土 壤 和 沉 积 物 样 品8.1.1 所有与实验相关的玻璃器皿，都要预先用甲苯清洗，干燥。空白值偏高时，可考虑使用马弗炉4对 所 有 仪 器 进 行 烘 干 ,降 低 空 白 值 。8.1.2 样 品 实 验 前 应 进 行 风 干 、 磨 碎 和 过 筛 （ 200 目 过 滤 筛 ） 处 理 。8.1.3 样品 混匀后称取 5.00g 加入 到 40mL 萃取瓶 （SP3-60 试 剂盒）

14、中（每个瓶子写好标签） 。8.1.4 每 个 萃 取 瓶 中 加 入 5g 酸 洗 石 英 砂 、 10-20g 无 水 硫 酸 钠 ， 再 加 入 3 颗 钢 珠 (在 此 步 添 加2,3,7,8-TCDD 于 方 法 空 白 和 样 品 中 ， 通 过 筛 查 结 果 计 算 方 法 空 白 和 样 品 的 加 标 回 收 率 )。8.1.5 每 个 萃 取 瓶 中 加 入 20mL 正 己 烷 和 丙 酮 混 合 溶 液 （ 体 积 比 1： 1） ， 拧紧瓶盖， 将萃取瓶放入平板 轨道振荡器中进行椭圆震荡 4 小 时 ， 振 动 频 率 为 180-200 次 /分 。 此 步 同

15、时 计 算 正 己 烷 和 丙 酮 混 合 溶 液（体积比 1： 1） 的 密 度 。8.1.6 震 荡 完 毕 后 取 出 萃 取 瓶 静 置 6-8 小 时 ， 用 吸 量 管 将 萃 取 瓶 中 上 清 液 全 部 转 移 到 已 标 记 的 玻 璃 试 管中（玻璃 试管事先称 重） ，转移完成后对玻璃 试管进行称 重，记录所 转移上清液 的质量。再 根据记录 的上清液的质量计算所转移上清液的体积。8.1.7 每 个 玻 璃 试 管 中 加 入 0.25mL 正十四烷，将每个玻璃试管置于氮气吹干仪中在 40 水 温 下 进 行 氮吹，至丙酮溶液完全清除。8.1.8 氮吹 完毕后每个玻璃试

16、管中加入 5mL 正 己烷， 若 玻 璃 试 管 中 溶 液 颜 色 较 深 则 应 加 入 1-2g 酸 性 硅 胶（SP3-60 试剂盒）处理，待溶液澄清。8.1.9 预 洗 柱 ： 硅 胶 柱 （ SP2-ST） 中 加 入 10mL 正己烷，正己烷从柱子底端滴下，从 SP3-60 试 剂 盒 中 取出碳柱， 加入正己烷在碳柱的平口端， 将其平口端接到硅胶柱的底端并拧紧， 硅胶柱与碳柱连接处不 允许气泡产生。同时硅胶柱中正己烷应覆盖硅胶（每根硅胶柱做好标记） 。8.1.10 预 洗后的硅胶柱中加入 8.1.8 步骤中玻 璃试管中溶液进行过柱， 分 2 次 每 次 用 2mL 正 己 烷

17、润 洗 玻璃试管，润洗液全部加入已标记的硅胶柱中，以保证所有的溶液全部转入硅胶柱中，进行加压过柱， 至溶液液面略高于硅胶上表面时停止加压。8.1.11 分 2 次 过 柱 ， 每 次 加 入 15mL 正己烷到硅胶柱中过柱。第二次过柱时溶剂距离碳柱顶部 1-2cm 时停止加压（保持碳柱的湿润状态） 。8.1.12 从 硅 胶 柱 上 取 下 碳 柱 ， 将 其 平 口 端 连 接 到 空 柱 （ SP2-ST 试 剂 盒 ） 底 部 ， 加 入 6mL 甲 苯 和 正 己 烷混合溶液 （1： 1） 到空柱 中进行加压过柱， 待溶液流至碳柱顶部时停止加压 （保持碳柱湿润状态） （空 柱做好标记）

18、 。8.1.13 从 空 柱 上 取 下 碳 柱 ， 将 其 斜 口 端 接 到 同 一 根 空 柱 上 ， 加 入 12mL 甲苯加压过柱进行洗脱，洗脱 液接收在玻璃试管中，甲苯完全流过碳柱，直至不再有液体滴下为止（玻璃试管作好标记） 。8.1.14 根 据实验样品情况选择蒸发模式 （见附录 B） ， 在 玻璃试管中加入保留剂 （DF1-60 试 剂盒） （以 附录 B 中 B 模式为例，B 模式下加入量为 62.5 L） ，在 70水 温下进行氮吹，至甲苯全部清除。8.1.15 氮 吹完毕后取出试管， 放置于离心机中在 1500-2000 转每分钟转 速下离心 5 分钟， 将所有样品 溶液

19、富集在试管底部。8.2 固 体 废 物 样 品8.2.1 所有与实验相关的玻璃器皿，都要预先用甲苯清洗，干燥。空白值偏高时，可考虑使用马弗炉 对 所 有 仪 器 进 行 烘 干 ,降 低 空 白 值 。8.2.2 润 洗 索 氏 提 取 器 ， 接 250mL 甲苯到旋转蒸发仪的圆底烧瓶中进行索氏提取，润洗约 2 小时。8.2.3 样 品 实 验 前 应 进 行 风 干 、 磨 碎 和 过 筛 （ 200 目 过 滤 筛 ） 处 理 。58.2.4 样 品 混 匀 后 称 取 0.25g 用 2mol/L 盐酸处理 1 小时。盐酸的用量为每 1g 样品加不少于 20mmol 盐酸， 使其与盐酸

20、充分接触并观察发泡情况， 必要时再添加盐酸， 直至不再发泡为止。 过滤干燥后用玻 璃纤维包好，加入到润洗后的圆底烧瓶中。过滤后的盐酸处理液用 100mL 二 氯 甲 烷 萃 取 三 次 。8.2.5 在 8.2.4 步 圆 底 烧 瓶 中 加 入 250mL 甲 苯 用 索 氏 提 取 器 进 行 索 氏 提 取 ， 提 取 16-20 小 时 （ 在 此 步 添 加 2,3,7,8-TCDD 于 方 法 空 白 和 样 品 中 ， 通 过 筛 查 结 果 计 算 方 法 空 白 和 样 品 的 加 标 回 收 率 ） 。8.2.6 提 取 完 毕 后 ， 将 圆 底 烧 瓶 中 的 甲 苯

21、提 取 液 和 8.2.4 步骤中的二氯甲烷萃取液合并加入到旋转蒸发仪的梨形瓶中， 圆底烧瓶和萃取瓶用少量甲苯各润洗 2 次 后转移到梨形瓶中， 保证样品溶液全部转入 梨形瓶中。8.2.7 样品 溶液在旋转蒸发仪中进行蒸发,水浴 温度设置 80， 真空泵压力调整至 0.08MPa， 蒸发至 剩 余溶液体积为 2-3mL 后 停 止 ， 用 吸 量 管 将 溶 液 转 入 25mL 容 量 瓶 中 ， 用 少 量 正 己 烷 润 洗 梨 形 瓶 2-3 次以 保证样品全部转入容量瓶中，最后用正己烷定溶，摇匀。8.2.8 预 洗 柱 ： 硅 胶 柱 （ SP2-ST） 中 加 入 10mL 正己烷

22、，正己烷从柱子底端滴下，从 SP3-60 试 剂 盒 中 取出碳柱， 在碳柱的平口端加入正己烷， 将其平口端接到硅胶柱的底端并拧紧， 硅胶柱与碳柱连接处不 能产生气泡。同时硅胶柱中正己烷应覆盖硅胶（每根硅胶柱做好标记） 。8.2.9 用 移 液 器 从 8.2.7 步 骤 定 溶 后 的 容 量 瓶 中 移 取 样 品 溶 液 3.0mL 加 入 到 预 洗 后 的 硅 胶 柱 中 ， 进 行 加压过柱。8.2.10 分 2 次过柱， 每 次 加 入 15mL 正 己 烷 到 硅 胶 柱 中 过 柱 ， 第二次过柱时当溶剂距离碳柱顶部 1-2cm 时停止加压（保持碳柱的湿润状态） 。8.2.1

23、1 从 硅 胶 柱 上 取 下 碳 柱 ， 将 其 平 口 端 接 到 空 柱 （ SP2-ST 试 剂 盒 ） 底 部 ， 加 入 6mL 甲 苯 和 正 己 烷 混合溶液（体积比 1：1）到空柱中进行加压过柱，待溶液流至碳柱顶部时停止加压（保持碳柱湿润状 态） （空柱做 好标记） 。8.2.12 从 空 柱 上 取 下 碳 柱 ， 将 其 斜 口 端 连 接 到 同 一 根 空 柱 上 ， 加 入 12mL 甲 苯 加 压 过 柱 进 行 洗 脱 ， 洗 脱液接收在玻璃试管中，甲苯完全流过碳柱，直到不再有液体滴下为止（玻璃试管作好标记） 。8.2.13 根 据实验样品情况选择蒸发模式（以附

24、录 B 中 B 模式为例） ， 在玻璃试管中加入保留剂（B 模 式下加入量为 62.5 L） （DF1-60 试 剂盒） ， 在 70 水 温 下 进 行 氮 吹 ， 至 甲 苯 溶 液 全 部 清 除 。8.2.14 氮 吹完毕后取出试管， 放置于离心机中在 1500-2000 转每分钟转 速下离心 5 分钟， 将所有样品 溶液富集在试管底部。9 酶 联 免 疫 分 析9.1 将 DF1-60 试 剂 盒 内 所 有 试 剂 回 温 至 20-26 才 可 使 用 。 使 用 前 ， 将 所 有 溶 剂 轻 轻 地 倒 置 混 匀 。9.2 清 洗 剂 配 制 ： 从 DF1-60 试 剂

25、盒 中 取 出 标 有 “0.5mL neat Triton X100”的玻璃瓶。用微量移液 器 移 取 10 L 的 Triton X-100 直 接 加 入 到 100mL 去 离 子 水 中 混 匀 ， 制 作 出 浓 度 为 0.01% V/V 的 清 洗 剂 。9.3 从 DF1-60 试剂盒中取出酶联免疫测定管，编号排列后用去离子水清洗每个测定管，重复清洗 3 次，倒去去离子水并反置，拍干。9.4 将 标 准 品 系 列 溶 液 按 低 浓 度 到 高 浓 度 依 次 排 列 ， 混 匀 后 静 置 待 用 。9.5 每个酶 联免疫测定管中加入 500L 样品稀释 液（DF1-60

26、 试剂盒） 。9.6 添 加 标 准 品 （ 2,3,7,8-TCDD 标 准 品 ） ：用微量 移液器移取 50L 标准品 加入到已标记的酶联免 疫6测定管中， 标准品必须用移液器从液面以下加入到溶液中， 不能在液体上部悬空加入到溶液中， 加入后 摇匀（注意标准品的添加，应是从低浓度到高浓度） 。9.7 根据蒸 发模式要求， 8.1.15 和 8.2.14 步骤中 离心后的每个玻璃试管中加入甲醇 （B 模式下加入 量 为 50 L） 到 试 管 底 部 ， 震 荡 ， 混 匀 15 秒 后 让 试 管 保 持 垂 直 1530 秒 ， 保 证 液 体 富 集 在 试 管 底 部 ， 立 即进

27、行下一步实验操作。9.8 加 入 待 测 样 品 ： 用 微 量 移 液 器 在 玻 璃 试 管 中 移 取 50 L 样品溶液加入到已标记的酶联免疫测定管 中。 样品溶液必须用移液器从液面以下加入到溶液中， 不能在液体上部悬空加入到溶液中。 加入后立即 摇 匀 样 品 ， 在 20-26 温 度 下 孵 育 12 到 24 个 小 时 。9.9 第一次 孵育完成后， 清洗全部的酶联免疫测定管， 用 9.2 步骤配制好的清洗剂进行清洗， 每次 1mL， 重复清洗 4 次。 清洗完毕后倒置除去测定管中水分， 然后加入 HRP（辣 根过氧化物酶） （ DF1-60 试 剂 盒 ） 进行第二次孵育，

28、时间为 15 分 钟 。 孵 育 完 成 后 用 去 离 子 水 进 行 清 洗 ， 每 次 1mL， 重 复 清 洗 4 次 。 清 洗 完 毕 后 倒 置 除 去 测 定 管 中 水 分 ， 然 后 加 入 HRP 底 物 （D F1-60 试 剂 盒 ） 进 行 第 三 次 孵 育 ， 时 间 为 30 分 钟。 孵 育 完 成 后 加 入 终 止 液 1mol/L 盐 酸 溶 液 （ DF1-60 试 剂 盒 ） 。9.10 使用 分光光度计（450nm 波长 ） ， 加 入 不 少 于 1mL 去 离 子 水 到 空 白 酶 联 免 疫 测 定 管 并 置 于 光 度 计 上 对 光

29、 度 计 进 行 校 正 。 擦 干 每 个 酶 联 免 疫 测 定 管 的 外 表 面 并 放 置 于 光 度 计 上 测 定 每 个 测 定 管 的 吸 光 度 值。10 标 准 曲 线 绘 制将 2,3,7,8-TCDD 用 甲 醇 配 制 成 0、 3.2、 10、 32 和 100pg/管 （ 每 个 酶 联 免 疫 测 定 管 中 标 准 品 的 添 加 量均为 50L）的系列标准工作溶液(见附录 C)， 分 别 进 行 酶 联 免 疫 分 析 ， 测 得 各 浓 度 所 对 应 的 吸 光 度 值。根 据 式 （ 1） 作 2,3,7,8-TCDD 的 剂 量 -效 应 关 系

30、标 准 曲 线 。 如 图 2 所 示 ， 标 准 曲 线 为 倒 “S”型 。 Y=(A-D)/(1+(X/C)B)+D （ 1）式中：X=pg/tube(2,3,7,8-TCDD标 准 品 的 毒 性 当 量 值 ) Y=每 个 酶 联 免 疫 测 定 管 所 测 得 的 吸 光 度 值 与 0浓 度 测 得 的 吸 光 度 值 的 百 分 比 A：0 浓 度 时 对 应 的 Y值B： 曲 线 部 分 的 斜 度 C： Y值 为 50时 对 应 的 X值 D： 较 低 渐 近 线 的 Y值7Percentofnegative control1101009080706050403020100

31、0.1 1 10 100 1000pg TEQ per tube图 2. 2,3,7,8-TCDD 剂 量 -效 应 关 系 标 准 曲 线11 结 果 计 算利用分光光度计测定二恶英类样品时得到的吸光度值 M，测定 0 浓度时得到的吸光度值 N,计 算 出 吸光度值的相对值 Y。再通过上述的标准曲线求得衍生物换算浓度 TEQ（pg/管） 即 X（pg/ 管 ） 。按操 作 步 骤 进 行 酶 联 免 疫 检 测 ， 加 待 测 样 品 a（ g） 加 入 到 酶 联 免 疫 测 试 管 中 ， 将 相 应 数 据 代 入 公 式 （ 1） （3） ，计算 出每单位样品重量中的毒性当量。Y=(

32、M/N) 100% （2）TEQ（ pg I-TEQ/g） TEQ（ pg/tube） /aCAF （ 3） 注： 以上涉及到的符号在本标准中含义相同， 本标准C AF取值范围为1. 0-4.0， 土壤 和沉积物样品建议 取 值 4.0， 固 体 废 物 样 品 建 议 取 值 2.0。12 检 测 限 、 精 密 度 和 准 确 度12.1 检测限本标准方法检出下限值为 4.0ngI-TEQ/kg。 12.2 精密度同 一 样 品 重 复 测 定 相 对 标 准 偏 差 （ RSD） 变 化 范 围 为 5-70 。 12.3 准确度方 法 空 白 加 标 回 收 率 变 化 范 围 为 7

33、0-130 。 方 法 样 品 加 标 回 收 率 变 化 范 围 为 60-135 。813 质 量 保 证 和 质 量 控 制13.1 标 准 曲 线 质 量 控 制 情 况二恶英类筛查所有批次的实验所得到的 2,3,7,8TCDD 校准标准测定值应在标准曲线质量控制范 围内，实验所得到的标准曲线方为合格。标准曲线质量控制情况见附录 D。13.2 分 析 质 量 保 证 最 基 本 的 要 求13.2.1 应 用 方 法 空 白 来 证 明 系 统 未 被 污 染 ， 空 白 值 变 化 范 围 应 在 3.0-8.0 ng I-TEQ/kg之 间 。13.2.2 实 验 室 应 每 批

34、次 考 察 校 正 结 果 、 精 密 度 和 回 收 率 一 次 ， 以 确 认 分 析 系 统 处 于 正 常 状 态 。13.3 样 品 中 标 记 化 合 物 的 回 收 率 需 要 按 期 评 价 并 做 好 记 录 ， 每 30天 对 各 种 基 质 样 品 进 行 平 行 样 分 析（不少于五个） ，计算出 标记化合物的平均回收率（R）和回 收率标准偏差（SR） 。 13.4 空 白 实 验空白实验分为两种： 试剂空白和操作空白。 试剂空白用来检查分析仪器的污染情况； 操作空白用来 检查样品制备过程的污染程度。13.4.1 试 剂 空 白 ： 所 有 试 剂 空 白 测 试 结

35、果 应 低 于 方 法 检 出 限 。13.4.2 操 作空白： 为评价实验环境的污染干扰水平， 应进行操作空白实验。 除不添加实际样品外， 操 作空白试验的样品制备、 前处理、 仪器分析和数据处理步骤与实际样品分析步骤相同， 结果应低于评价 浓度的1/10。 在样品制备过程有重大变化时(如使 用新的试剂或仪器设备， 或者仪器维修后再次使用时) 或 样 品 间 可 能 存 在 交 叉 污 染 时 (如 高 浓 度 样 品 )应 进 行 操 作 空 白 的 分 析 。13.5 标 准 溶 液 ： 标 准 溶 液 应 装 在 密 封 的 玻 璃 容 器 中 避 光 冷 藏 保 存 。13.6 质量

36、 控制考察样品： 每批次实验分析质量控制考察样品以确认校正标准的准确性和分析过程中的 可靠性。13.7 筛 查 实 验 材 料 筛查中所用试剂， 实验仪器均按照筛查方法的规定进行采购， 所有试剂、 材料均满足筛查实验要求。13.8 采 样 控 制在 样 品 采 集 过 程 中 ， 土 壤 采 集 按 HJ/T166-2004 土 壤 环 境 监 测 技 术 规 范 中 采 样 的 规 定 方 法 实 施 。 沉积物采集按HJ 494-2009 水 质 采 样 技 术 指 导 中 采 样 的 规 定 方 法 实 施 。 固 体 废 物 采 集 按 HJ/T20-1998工业固体废物采样制样技术规

37、范中采样的规定方法实施。14 报告14.1报 告 格 式 结果报告应采用表格形式，表中需包括样品种类、采样地点、测定对象、毒性当量浓度等内容。14.2样 品 名 称 实验室检测样品种类包括土壤、沉积物和固体废物。14.3 筛 查 对 象筛查对象包括 PCDDs 与 PCDFs。914.4 浓 度 单 位所有样品的毒性当量浓度单位均以 ng I-TEQ/kg 表示。15 废 物 处 理15.1 实 验 室 应 遵 守 废 物 管 理 法 律 规 定 ， 避 免 废 物 排 放 对 周 边 环 境 造 成 污 染 。15.2 实 验 室 产 生 的 废 弃 物 属 于 危 险 废 物 的 ， 应

38、按 有 关 法 律 规 定 进 行 处 置 。16 注 意 事 项本实验方法是根据 PCDDs 和 PCDFs 同 类 物 与 其 毒 性 当 量 因 子 （ TEF） 之 积 的 TEQ 设 计 来 进 行 样 品 筛 查。在某些情况下也可以进行定量检测。分 析 质 量 控 制 样 品 来 确 认 实 验 分 析 过 程 中 的 可 靠 性 是 非 常 必 要 的 。 为 确 保 精 度 和 结 果 的 可 靠 性 ， 实验酶联免疫分析的所有操作必须在 20 26 下 操 作 。试剂盒中试剂的 40%用 来 做 标 准 品 和 质 量 保 证 。 重 复 ， 复 查 样 品 ， 标 准 相

39、关 材 料 ， 方 法 空 白 ， 以 确 保实验的准确性。10附 录 A （ 规 范 性 附 录 ） 二 恶 英 类 分 析 流 程 图现场调查和实验准备采样样品保存和输送样品前处理提取液净化否酶联免疫分析标准曲线合格是否二恶英类定量回收率、检 出限确认是二恶英类筛查结果11附 录 B（ 资 料 性 附 录 ） 样 品 蒸 发 模 式蒸发模式选项 A B C可允许样品数量 无限 有限 均可可做重复次数（次） 2 1 1样品稀释所加容量(L) 约 30 0 30蒸 发 前 加 入 样 品 试 管 中 的 保 留 液 ( L) 150 62.5 100蒸发后残留（20%最初保 留液） （L ）

40、30 12.5 20加入残留中的甲醇(L) 120 50 80加入酶联免疫测定管中的起始液比例 33% 80% 50%12附 录 C（ 资 料 性 附 录 ） 标 准 溶 液 浓 度 序 列标准溶液序号 0 1 2 3 42,3,7,8 TCDD 浓度 (ng/mL) 0 0.064 0.20 0.64 2.0加入到每管中的 2,3,7,8-TCDD 质量(pg) 0 3.2 10 32 10013附 录 D（ 资 料 性 附 录 ） 标 准 曲 线 控 制 参 数标准序号 1 2 3 42,3,7,8 TCDD 浓度 (ng/mL) 0.064 0.20 0.64 2.0平均阴性空白比例（%NC） 87 66 41 29标准偏差（SD） 6.0 7.0 7.0 6.0阴性空白比例控制范围 75-99 52-80 27-55 17-41